国家自然科学基金(30872095)
- 作品数：9 被引量：24H指数：4
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- 煤焦沥青烟提取物致BEAS-2B恶性转化细胞中心体及其调控蛋白的变化被引量：1
- 2013年
- 目的 分析煤焦沥青烟提取物诱导人支气管上皮细胞BEAS-2B恶变过程中细胞内中心体及其调控蛋白的变化,探讨中心体在煤焦沥青烟提取物致肺癌中的作用及机制.方法 用中温煤焦沥青烟提取物作为诱导剂,建立永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B的恶性转化模型,作为煤焦沥青烟提取物染毒组（煤焦沥青组）,设溶剂对照组和正常对照组平行传代培养,用细胞爬片间接免疫荧光法检测中心体改变,用实时定量反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测相关基因的mRNA表达;细胞爬片免疫组化半定量法检测相关蛋白表达.结果 煤焦沥青组第20代细胞中心体总异常率为6.56％±1.01％,明显高于正常对照组（3.40％±0.86％）和溶剂对照组（3.14％±0.59％）,差异有统计学意义（P＜0.05）.与正常对照组（4.34％±1.04％）和溶剂对照组（4.33％±1.20％）比较,煤焦沥青组第30代细胞中心体总异常比例（22.39％±9.5％）明显增大,差异有统计学意义（P＜0.05）.煤焦沥青组第20、30代细胞的P53、P21基因和蛋白表达明显降低,Cyclin E基因和蛋白表达明显升高,与正常对照组相和溶剂对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 在煤焦沥青烟提取物诱导BEAS-2B细胞恶性转化过程中,中心体异常出现在细胞恶性改变前.中心体异常可能是通过P53/P2 1/CyclinE通路异常而引起.
- 李智涛冯艳铭王威燕贞王丽霞祝寒松赵勇吴拥军吴逸明
- 关键词：煤焦沥青中心体细胞周期蛋白质类
- 煤焦沥青烟提取物致人支气管上皮细胞BEAS-2B染色体不稳定性研究被引量：6
- 2011年
- 目的建立煤焦沥青烟提取物诱导的人支气管上皮细胞BEAS-2B株的恶化模型;观察不同时期细胞的染色体不稳定性与细胞恶性转化之间的关系。方法用四唑蓝(MTT)法测定煤焦沥青烟提取物的细胞毒性,以煤焦沥青烟提取物诱导并观察BEAS-2B细胞传代转化过程中的形态学改变;软琼脂克隆形成实验检测细胞恶性转化能力,流式细胞术检测细胞增殖周期变化,核型分析观察细胞染色体不稳定性。结果煤焦沥青烟提取物的半数致死浓度(LC50)为8.64 mg/L。以诱导剂量(2.0 mg/L)诱导细胞转化,经过30代传代培养,细胞形态发生恶性变化。第30代时,诱导组细胞即能在软琼脂上形成阳性克隆,细胞克隆形成率为21.50‰,明显高于正常对照组和溶剂对照组。流式细胞术检测诱导组G1期细胞比例明显减少,G2/M期细胞比例明显增加。煤焦沥青诱导组从第10代开始细胞二倍体核型的比例明显下降,非整倍体细胞的比例明显增加。随着传代次数增加,染色体不稳定性更明显。细胞克隆形成率和染色体变异的细胞百分比两者呈正相关。结论煤焦沥青烟提取物可以在体外诱导BEAS-2B细胞产生染色体不稳定性并发生恶化。
- 李智涛冯艳铭王威王丽霞赵勇祝寒松吴卫东吴逸明
- 关键词：细胞恶性转化染色体不稳定
- 煤焦沥青烟提取物致BEAS-2B恶性转化细胞中姊妹染色单体分离相关蛋白的改变被引量：2
- 2010年
- 目的 通过检测姊妹染色体凝集和分离相关蛋白染色体结构维持蛋白（SMC）1、SMC3、分离酶（Separase）和保全素（Securin）在煤焦沥青致BEAS-2B癌变细胞中的变化,探讨其在煤焦沥青接触者肺癌发生中的作用.方法 用中温煤焦沥青烟提取物作为诱导剂,建立永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B的恶性转化模型,用实时定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测相关基因的mRNA表达水平;细胞爬片免疫组化半定量法检测其蛋白表达改变.以二甲亚砜（DMSO）溶剂组和未染毒的正常传代的BEAS-2B细胞为对照组.结果 与正常对照组和DMSO溶剂对照组比较,煤焦沥青烟提取物诱导转化细胞中,SMC1基因和蛋白表达水平的差异无统计学意义（P＞0.05）;煤焦沥青烟诱导组SMC3和Separase的基因和蛋白表达水平明显升高（基因：SMC3：2.54±0.20、Separase：2.42±0.22,蛋白：SMC3：0.27±0.02、Separase：0.25±0.02）,Securin的基因和蛋白表达水平明显降低（基因：0.30±0.04,蛋白：0.17±0.01）,与其他两组（DMSO溶剂对照组：基因：SMC3：1.13±0.12、Separase：1.00±0.04、Securin：0.90±0.11,蛋白：SMC3：0.10±0.03、Separase：0.18±0.02、Securin：0.22±0.02;正常对照组：基因：SMC3：1.00±0.11、Separase：1.00±0.08、Securin：1.00±0.11,蛋白：SMC3：0.09±0.01、Separase：0.18±0.01、Securin：0.23±0.02）相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 在煤焦沥青致支气管上皮细胞恶性转化过程中,姊妹染色单体凝集和分离相关蛋白SMC3和Separase升高,Securin表达水平降低,参与了细胞恶性转化过程.
- 李智涛王威赵勇王丽霞祝寒松吴卫东吴逸明
- 关键词：煤焦沥青恶性转化
- 单核巨噬细胞在煤焦沥青烟提取物诱导永生化人支气管上皮细胞恶变中的作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨单核巨噬细胞（THP-1）在煤焦沥青烟提取物（coaltarpitch，CTP）致永生化人支气管上皮细胞humanbronchialepithelialcells，BEAS-2B）恶变过程中的作用及肿瘤坏死因子0【（tumornecrosisfactoralpha，TNF-α）在该过程中的表达。方法以THP．1和BEAS．2B为研究对象，设立CTP组、苯并（a）芘[B（a）P]组（阳性对照组）、二甲亚砜对照组（溶剂对照组）、BEAS-2B与THP-1共培养组，建立细胞恶性变模型。应用软琼脂集落形成实验、染色体数目畸变分析、流式细胞仪测定细胞周期中不同培养时期（10、20、30代）细胞的恶变情况，利用ELISA方法测定CTP组及共培养组细胞培养上清中TNF-α的含量。结果染色体数目异常在实验的早期（10代）已经显现，表现为非整倍体和多倍体比例增加，二倍体数目减少。在第20代：共培养组克隆形成率（17．63‰±0．97‰）明显高于CTP组（13．94‰±0．84‰）和阳性对照组组（12．96‰±1．62‰），差异有统计学意义（P〈0．05）；共培养组S期细胞比例（44．49％±0．68％）明显高于CTP组（38．19％±1．26％）和阳性对照组（36．41％±1．19％），差异有统计学意义（P〈0．05）。共培养组细胞培养上清中TNF-α含量明显高于CTP组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论THP-1能够加速CTP诱导的BEAS．2B恶变，增加TNF-α的表达水平。
- 周凡静张少峰冯斐斐燕贞王威吴逸明
- 关键词：巨噬细胞肿瘤坏死因子Α
- 煤焦沥青烟提取物致BEAS－2B恶性转化细胞端粒蛋白的变化被引量：2
- 2011年
- 目的通过检测端粒保卫蛋白复合体中端粒保卫蛋白1（POT1）、端粒重复序列结合因子1（TRF1）和TRF2在煤焦沥青烟致永生化人支气管上皮细胞（BEAS－2B）癌变细胞中的表达变化，探讨其在煤焦沥青烟致肺癌发生中的作用。方法用中温煤焦沥青烟提取物作为诱导剂，建立BEAS－2B的恶性转化模型，用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应法（RT—PCR）检测POTI、TRF1和TRF2基因mRNA表达水平；细胞爬片免疫组化半定量法检测其蛋白表达改变。结果BEAS－2B恶性转化细胞POT1和TRF1基因mRNA表达水平（分别为：0．63±0．04，0．36±0．01）和蛋白表达水平（分别为：0．36±0．05，0．09±0．03）均下调，与正常对照组（mRNA：POT1：1．00±0．04，TRF1：1．01±0．16；蛋白：POT1：0．55±0．07，TRF1：0．27±0．07）和二甲亚砜溶剂对照组（mRNA：POT1：0．89±0．12，TRF1：0．90±0．08；蛋白：POT1：0．55±0．10，TRF1：0．26±0．04）相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。BEAS-2B恶性转化细胞TRF2基因mRNA表达水平（1．45±0．07）和蛋白表达水平（0．88±0．06）均上调，与正常对照组（mRNA：1．00±0．07，蛋白：0．48±0．06）和二甲亚砜溶剂对照组（mRNA：1．00±0．06，蛋白：0．50±0．06）相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论在煤焦沥青烟致支气管上皮细胞恶性演化过程中，POT1、TRF1和TRF2基因和蛋白表达水平发生变化。
- 王威李智涛祝寒松赵勇王丽霞燕贞李时恩许东吴卫东吴拥军吴逸明
- 关键词：煤焦油端粒
- 煤焦沥青烟提取物致支气管上皮细胞系恶性转化细胞中Bub1和Mad2表达水平改变被引量：5
- 2010年
- 目的检测纺锤体检测点蛋白Bub1和Mad2在煤焦沥青致人支气管上皮细胞系(BEAS-2B)癌变细胞中的变化,探讨Bub1和Mad2在煤焦沥青接触者肺癌发生中的作用。方法利用中温煤焦沥青烟提取物作为诱导剂,建立永生化BEAS-2B的恶性转化模型,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bub1和Mad2基因的mRNA表达水平;采用细胞爬片免疫组化半定量法检测蛋白表达改变。结果与正常对照组和二甲基亚砜(DMSO)组相比较,煤焦沥青烟提取物诱导转化细胞Bub1和Mad2基因mRNA和蛋白表达水平均减低,差异具有统计学意义(P<0.05)。正常对照组和DMSO组之间2种基因的mRNA和蛋白表达水平均没有明显改变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在煤焦沥青致支气管上皮细胞恶性转化后,纺锤体检测点蛋白Bub1和Mad2表达水平降低。
- 李智涛燕贞赵勇王丽霞祝寒松王威吴卫东吴逸明
- 关键词：煤焦沥青恶性转化BUB1MAD2
- FHIT和p16基因甲基化与肺癌的发生被引量：4
- 2009年
- 背景与目的:探讨FHIT和p16基因甲基化与肺癌发生之间的关系。材料与方法:采用甲基化特异性PCR检测59例原发性肺癌组织,相对应的32例正常组织及11例支气管鳞状化生组织中FHIT基因、p16基因启动子区CpG岛甲基化状况。结果:肺癌组织和正常肺组织中的FHIT基因甲基化率分别为37.3%(22/59)、0.0%(0/32),两组间的差异有统计学意义(P<0.01);支气管鳞状化生组织FHIT基因甲基化阳性率为18.1%(2/11)。肺癌组织和正常肺组织中的p16基因甲基化率分别为50.8%(30/59)、0.0%(0/32),两组间的差异具有统计学意义(P<0.01);支气管鳞状化生组织p16基因甲基化阳性率为18.1%(2/11)。肺癌患者吸烟组中FHIT、p16基因甲基化联合检测的阳性率为90.6%(29/32),与非吸烟组(33.3%,9/27)相比较,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:FHIT基因和p16基因启动子区甲基化可能与肺癌的发生有关。
- 亢春彦肖红吴逸明
- 关键词：FHIT基因P16基因甲基化肺癌
- 亚甲基四氢叶酸还原酶C677T基因多态性与肺癌易感性的关系被引量：4
- 2011年
- 肺癌在全世界癌症死因中居首位,但其发病机制迄今尚未完全明确.既往文献报道与肺癌发病有关的因素包括吸烟、职业因素、环境污染、病毒感染、遗传背景以及肺癌的基因易感性等.新近的研究结果显示,外来化学物质代谢、DNA修复、细胞周期调控以及相关基因多态性可能与肺癌的发生有关.
- 程哲王威宋永娜夏杰康燕代灵灵吴逸明吴拥军
- 关键词：肺癌易感性亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性C677T细胞周期调控基因易感性
- 中心体异常扩增和染色体不稳定性被引量：1
- 2010年
- 中心体作为主要微管组织中心在细胞周期事件中起着重要的作用。异常中心体可产生纺锤体异常,使染色体错误分离,引起染色体不稳定性和非整倍体的形成。中心体异常同染色体不稳定性一样是肿瘤细胞的一个普遍特征,并且可出现在肿瘤发生的早期阶段。中心体异常在肿瘤的发生发展演化过程中可能具有重要作用。现综述中心体的结构、功能、复制和调控,阐述肿瘤中中心体异常的表现和导致中心体扩增的可能机制及中心体扩增与染色体不稳定之间的相关性。
- 李智涛吴逸明
- 关键词：中心体染色体不稳定性非整倍体肿瘤
