国家自然科学基金(3087221)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 人类巨细胞病毒编码US28受体拮抗性多肽的筛选鉴定及体外活性研究被引量：1
- 2010年
- 立足US28的广谱趋化因子结合活性,寻找拮抗剂多肽的先导物.通过预测US28的结合模拟位设计多肽序列,合成相关多肽,再利用自建的25种趋化因子随机构成的噬菌体12肽库筛选结合模拟位,竞争性ELISA方法验证,从而获得30个阳性克隆,测序并推导氨基酸序列,得到7种序列:GSESLNAHCALW、EIDGFNAHCALL、VIARLNAHCALR、ATECLNAHCALW、VIESLNAHCALW、DNGSINAHCALL及VKKTLNAHCALR.所有序列富含疏水氨基酸,其中8个克隆有LNAHCAL保守序列.采用趋化抑制实验检测多肽对生理性趋化因子引起的细胞迁移活性的影响,流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度变化.结果表明,利用人源趋化因子序列构建肽库并筛选有效序列的方法取得成功,筛选出的阳性克隆保守序列LNAHCAL可以模拟HumanMIP-1β与US28N端的结合位,从而与合成多肽H22结合,多肽H22可以阻断受体结合生理性趋化因子形成的趋化作用,本身不引起趋化运动,不影响胞内信号转导和细胞自然活性,具有广谱趋化因子拮抗剂的可能性.
- 李璐何滔莫雪梅李秀英张光孙晗笑
- 关键词：人类巨细胞病毒拮抗剂
- 病毒受体拮抗性诱获配体H9的体外活性及其对人趋化因子受体CX_3CR1的作用被引量：1
- 2011年
- 目的:来源于US28受体N末端的诱惑配体多肽H9,以阐明H9的体外活性及其对细胞表面趋化因子受体CX3CR1内化及调变研究,探讨H9对人趋化因子受体CX3CR1的作用及影响。方法:立足US28的广谱趋化因子结合活性,得到趋化因子受体拮抗性多肽H9。采用趋化抑制实验检测多肽对生理性趋化因子引起的细胞迁移活性的影响,流式细胞术方法(FCM)检测细胞内钙离子浓度变化,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别定性、定量检测CX3CR1的内化,以阐明H9的生物活性及其对人源受体CX3CR1的作用及其机制。结果:多肽H9可以阻断受体结合生理性趋化因子形成的趋化作用,本身不引起趋化运动,不影响胞内信号转导和细胞自然活性;200 ng/mL H9在给药后的最初50min钟内能使细胞表面受体CX3CR1内化达到最大值,内化率约为70%,第100分钟,内化到细胞内的CX3CR1逐渐再循环到细胞表面。证明了H9能引起细胞表面受体CX3CR1内化,内化的受体部分再循环到细胞表面。结论:H9是一种趋化因子受体抑制短肽,影响人受体CX3CR1的内化,但内化后受体再循环到细胞表面,对人受体CX3CR1生理功能没有明显影响,可以作为特异性抗病毒多肽。
- 张敏孙晗笑莫雪梅李秀英张光
- 关键词：病毒受体趋化因子受体
