泰安市科技发展计划项目(20074043)
- 作品数：6 被引量：20H指数：4
- 相关作者：王克强侯彦强韩国新朱蓓王晓红更多>>
- 相关机构：泰山医学院附属医院上海交通大学附属第一人民医院泰山护理职业学院更多>>
- 发文基金：泰安市科技发展计划项目山东省高等学校科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- γδT细胞的扩增及其信号转导分子ζ链相关蛋白-70的免疫印迹检测被引量：14
- 2013年
- 目的 检测人外周血γδT细胞的信号转导分子ζ链相关蛋白-70 （ZAP-70）的表达.方法 应用淋巴细胞分离液常规分离获取健康人外周血单个核细胞（PBMC）,用结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb-Ag）刺激PBMC增殖培养,10d后收集细胞,用免疫磁珠阳性分选法分离获取高纯度的γδT细胞；采用免疫印迹方法检测γδT细胞内的ZAP-70分子.结果 新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为4.9％,Mtb-Ag刺激培养10d后升为69.2％,免疫磁珠阳性分选后达99.3％.免疫印迹显示检测到γδT细胞内相对分子质量为70 000的ZAP-70分子的表达.结论 ZAP-70分子在活化增殖的人外周血γδT细胞内高表达.
- 王克强侯彦强朱蓓李雁陈岱韻韩国新
- 关键词：ΓΔT细胞
- 三种方式刺激γδT细胞活化CD69表达的动力学观察被引量：13
- 2014年
- 根据T细胞受体（TCR）类型差异,可将T细胞分为αβT细胞和yδT细胞.γδT细胞占正常人外周血T淋巴细胞总数的0.5％～5％[1],表达CD3,绝大多数不表达CD4及CD8.γδT细胞的抗原识别与αβT细胞不同,不需要经过抗原处理和呈递,无主要组织相容性复合物（MHC）限制性,主要识别热休克蛋白和含磷酸基的非肽类小分子[2].
- 王克强侯彦强王晓红韩国新
- 关键词：动力学观察CD69主要组织相容性复合物ΑΒT细胞细胞总数
- 磷脂酰肌醇3激酶特异性抑制剂LY294002对结核杆菌低分子多肽抗原激活γδT细胞的影响被引量：5
- 2015年
- 目的观察磷脂酰肌醇3激酶（P13K）特异性抑制剂LY294002对CD3单克隆抗体（CD3mAb）活化的T细胞及结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb-Ag）激活γδT细胞的影响，探讨P13K在CD3mAb活化的T细胞及Mtb-Ag启动的78T细胞TCR途径信号转导中作用。方法分离获取健康人外周血单个核细胞（PBMC），用CD3mAb、佛波醇酯＋离子霉素（PMA＋IM）、Mtb-Ag刺激PBMC，采用流式细胞术检测CD3’T细胞和78T细胞0、6、12、24、48h和72h的CD69分子的表达情况。PBMC经LY294002（0、0．4、2、10~tmol／L）处理后再刺激培养，用EIA试剂盒检测CD3mAb和PMA＋IM刺激组CD3’T细胞白细胞介素（IL）一2的含量；经CD3PE和CD69FITC、v6PE和CD69FITC双染后，检测LY294002对CD3mAb活化T细胞和Mtb．Ag活化的γδT细胞增殖的影响，并计数培养扩增10d的细胞数量。结果用CD3mAb刺激24hCD3’T细胞和γδT细胞CD69的表达均达高峰（均在56％左右），用PMA＋IM刺激6h，均达高峰（均在99％左右），用Mtb-Ag刺激24h，亦均达高峰，但CD3^＋T细胞和γδT细胞CD69的表达分别为（16．0±0．0）％和（75．2±0．7）％，3组同时间点CD3^＋T细胞CD69的表达之间差异均有统计学意义（均P〈0．05），而78T细胞CD69的表达在PMA＋IM刺激组高于CD3mAb刺激组和Mtb-Ag刺激组（均P〈0．05），后两组差异则没有统计学意义（均P〉0．05）。用LY294002终浓度分别为0、0．4、2、10μmol／L处理的样本，CD3mAb刺激组CD3^＋T细胞CD69的表达分别为（52．0±0．5）％、（46．3±0．4）％、（33．2±0．4）％和（19．1±0．0）％；Mtb-Ag刺激组78T细胞CD69的表达分别为（66．2±0．6）％、（58．4＋0．5）％、（38．1±0．3）％和（19．3±0．1）％。0、0．4、2、10μmol／LLY294002处理CD3＋T细胞后，CD3mAb刺激组IL-2的含量分别为（561．1±86．2）、（477．0±75.5）、（280．3±53．9）、（36．0±8．7）ng／L，PMA＋IM刺激组为�
- 王克强侯彦强段衍超陈岱韻吴家锋刘晶王雅姝李清华
- 关键词：T细胞1-磷脂酰肌醇3-激酶
- 结核杆菌低分子多肽抗原再次刺激其活化的T细胞对诱导γδT细胞CD69分子再次表达的影响被引量：9
- 2014年
- 目的 观察结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb-Ag）再刺激Mtb-Ag活化的T细胞（Mtb-AT细胞）诱导γδT细胞CD69分子的再表达的情况.方法 分离获取健康人外周血单个核细胞（PBMC）,用Mtb-Ag刺激PBMC,采用直接免疫荧光染色法通过CD3PE/CD69FITC、γδPE/CD69FITC细胞双染检测γδT细胞0、6、12、24、48和72 h CD69分子的表达情况.PBMC经Mtb-Ag刺激活化扩增培养至10 d后再次加入Mtb-Ag,经培养0、6、12、24、48和72 h后收集细胞,再次检测CD69分子的表达情况.结果 培养0、6、12、24、48和72 h后,Mtb-Ag初次刺激γδT细胞后CD69分子的表达分别为0.91％、15.1％、35.2％、75.2％、59.4％和50％.再次刺激培养0、6、12、24、48和72 h后,γδT细胞CD69分子的表达分别为1.7％、72.3％、73.5％、50.3％、45.6％、41.7％.结论Mtb-Ag初次刺激γδT细胞表达CD69分子约在24 h达高峰,随后快速下降;Mtb-Ag再次刺激Mtb-AT细胞诱导γδT细胞CD69分子的再表达,6h时CD69分子达高峰,可维持到12 h.这为寻求γδT细胞迅速活化、CD69分子的迅速表达奠定了方法学基础.
- 王克强侯彦强王晓红姜倩晋红梅朱莉朱蓓韩国新
- 关键词：ΓΔT细胞
- 三种方式活化T细胞CD69分子表达观察
- 2015年
- 目的观察CD3单克隆抗体（CD3mAb）、佛波醇酯＋离子霉素（PMA＋IM）、结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb-Ag）活化CD3＋T细胞CD69分子的表达情况。方法分离获取健康人外周血单个核细胞（PBMC），用CD3mAb（A组）、PMA＋IM（B组）、Mtb．Ag（C组）刺激PBMC，采用流式细胞术检测。CD3＋T细胞和∞T细胞0、6、12、24、48和72hCD69分子的动态表达情况。结果CD3＋T细胞CD69分子的动态表达情况：CD3mAb刺激组24h达高峰，为56．2％；PMA＋IM刺激组6h达高峰，为99．5％；Mtb-Ag刺激组24h达高峰，为16％。各组比较F=322．528，P〈0．001；两两比较，均P〈0．001。γδT细胞CD69分子的动态表达情况：CD3mAb刺激组24h达高峰，为55．1％；PMA＋IM刺激组6h达高峰，为99．3％；Mtb-Ag刺激组24h达高峰，为75．2％。各组比较F=21．170，P〈0．001；两两比较：CD3mAb与PMA＋IM组比较，PMA＋IM组与Mtb—Ag组比较，均P〈0．001；Mtb-Ag与CD3mAb比较P=0．646。结论PMA＋IM的刺激，CD3＋T细胞和γδT细胞活化达高峰的用时比CD3mAb、Mtb-Ag的刺激要短，CD69的表达率也比CD3mAb、Mtb-Ag的刺激要高，应作为三种方法中CD3＋T细胞活化的首选方法。
- 苑振新
- 关键词：佛波醇酯
- Mtb-Ag活化γδT细胞的扩增及对γδT细胞CD69分子表达的影响被引量：1
- 2015年
- 目的 用结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb-Ag）激活和扩增γδT细胞,观察γδT细胞表面CD69分子表达的情况.方法 分离获取健康人外周血单个核细胞（PBMC）,用Mtb-Ag刺激PBMC,所得细胞用磁珠阳性分选,通过荧光单抗TCR γδPE染色及流式细胞仪检测γδT细胞所占比例.用γδPE/CD69FITC细胞双染检测初次刺激和再次刺激γδT细胞CD69分子的表达情况.结果 新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为（4.9±1.85）％,Mtb-Ag刺激培养10d后升为（69.2±6.57）％,免疫磁珠阳性分选后达（99.3±8.92）％.Mtb-Ag初次刺激γδT细胞,CD69分子的表达24 h达高峰,为75.2％;Mtb-Ag再次刺激γδT细胞,CD69分子的表达6h达高峰,为72％.结论 Mtb-Ag能特异地刺激PBMC中的γδT细胞增殖,Mtb-Ag初次和再次刺激均可特异性活化γδT细胞.
- 晋红梅朱莉王克强刘国段衍超苑振新
- 关键词：ΓΔT细胞
