四川省青年科技基金([2002]1)
- 作品数：22 被引量：32H指数：3
- 相关作者：李晖钟森任红史小玲王明勇更多>>
- 相关机构：泸州医学院附属医院重庆医科大学附属第二医院成都中医药大学附属医院更多>>
- 发文基金：四川省青年科技基金四川省重点科学建设项目四川省教育厅科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程机械工程石油与天然气工程更多>>
- 结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12表达质粒联合免疫的细胞免疫应答观察被引量：3
- 2007年
- 目的观察结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)联合免疫小鼠所诱导的细胞免疫应答。方法15只C57BL/6N小鼠随机分为Mtb8.4基因疫苗+hIL-12质粒组(联合免疫组)、Mtb8.4基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组,基因疫苗、空载体和PBS经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG组经尾部皮下注射1×106CFUBCG免疫1次。ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。结果联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-γ和IL-2水平(分别为1493.340±8.128pg/ml、747.489±48.676pg/ml)显著高于Mtb8.4基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少,特异性CTL杀伤活性增强。结论hIL-12表达质粒能够增强Mtb8.4基因疫苗所诱导的细胞免疫应答。
- 李晖李强钟森任红邓存良
- 关键词：MTB8.4白细胞介素12联合免疫
- 结核菌Mtb8.4基因疫苗对结核杆菌感染小鼠的免疫保护效果研究被引量：1
- 2005年
- 为研究Mtb8.4基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果,将雌性C57BL/6N小鼠32只,随机分为4组,即Mtb8.4基因疫苗组、BCG组、pcDNA3.1(+)组和PBS组。小鼠脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行CTL杀伤活性检测。用结核杆菌H37Rv强毒株静脉攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,对小鼠部分肺和脾组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度,Z-N染色查抗酸杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果表明,Mtb8.4基因疫苗对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护效果,能够诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-2分泌增加,IL-4分泌减少,特异性CTL活性增加;使小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻。
- 李晖李榕钟森任红陈宣世史小玲王明勇龙汉安
- 关键词：MTB8.4基因疫苗免疫应答免疫保护
- 球片展开仿真分析被引量：1
- 2007年
- 通过建立球片数据模型,总结出一种较为新颖的球壳板展开仿真方法,以建立成型球片与原料钢板之间的对应关系。该方法设计简单,制作方便,且精样板精度高,实用性强。
- 柳忠彬贺元成兰芳胡光中
- 关键词：仿真
- 含信号肽的Mtb8.4/hIL12嵌合基因真核表达质粒的构建及在COS-7细胞中的表达
- 2007年
- [目的]克隆结核分枝杆菌含信号肽的Mtb8.4(MS)/hIL12嵌合基因,导入真核表达载体pCI-neo,并在COS-7细胞中进行表达。[方法]首先以pcDNA3.1(+)-含信号肽的Mtb8.4(pMS)为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增出MS-linker基因,与pCI-neo载体进行连接重组,构建成pCI-neo-MS-linker(pMSL)重组质粒,然后以pORF-hIL12质粒为模板,经PCR扩增出hIL-12基因,将hIL-12基因与pMSL质粒进行连接重组,构建成MS/hIL12嵌合基因真核表达质粒,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定;重组嵌合质粒转染COS-7细胞后,用RT-PCR方法鉴定MS/hIL12嵌合基因在转录水平的表达情况。[结果]MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功;转染COS-7细胞后,MS/hIL12嵌合基因在转录水平成功表达。[结论]MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建及在COS-7细胞中的成功表达,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病MS/hIL12嵌合基因疫苗奠定了基础。
- 李榕李晖钟森任红
- 关键词：MS嵌合基因
- 人IL-12基因表达对含信号肽mtb8.4基因疫苗的免疫效应
- 2007年
- [目的]观察结核分枝杆菌含信号肽Mtb8.4(MS)基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)表达质粒联合免疫小鼠所诱导的细胞免疫应答。[方法]15只C57BL/6N小鼠随机分为MS基因疫苗+hIL-12质粒组(联合免疫组)、MS基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组,基因疫苗、空载体和PBS经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG组经尾部皮下注射1×106 CFU BCG免疫1次。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子水平;采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫小鼠细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性。[结果]联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-γ和IL-2水平(分别为(1546.18±36.23)pg/ml、(681.64±40.88)pg/ml),显著高于MS基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少,特异性CTL杀伤活性增强。[结论]hIL-12表达质粒与MS基因疫苗联合免疫后,能够增强MS基因疫苗所诱导的细胞免疫应答。
- 李晖李榕钟森任红黄永茂
- 关键词：联合免疫细胞免疫应答
- 结核分枝杆菌mtb8.4/hIL12嵌合基因的克隆及真核表达质粒的构建被引量：1
- 2004年
- 目的 :克隆结核分枝杆菌mtb8.4 /hIL12嵌合基因 ,构建其真核表达质粒 ,并进行鉴定。方法 :采用基因工程技术 ,首先以 pcDNA 3.1(+) -mtb 8.4为模板 ,经聚合酶链反应 (PCR)扩增出mtb 8.4 -linker基因 ,与pCI-neo载体进行连接重组 ,构建成pCI-neo -mtb 8.4 -linker(pML)重组质粒 ,然后以pORF -hIL12质粒为模板 ,经PCR扩增出hIL - 12基因 ,将hIL -12基因与pML质粒进行连接重组 ,构建成mtb 8.4 /hIL12嵌合基因真核表达质粒 ,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定。结果 :mtb 8.4 /hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功。结论 :mtb 8.4 /hIL12嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建 ,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病mtb 8.4
- 李晖任小华钟森任红
- 关键词：结核分枝杆菌MTB8.4嵌合基因克隆真核表达质粒
- 含信号肽的结核分枝杆菌8.4/白细胞介素12嵌合基因真核表达质粒的构建、表达及免疫原性研究
- 2006年
- 目的构建和表达含信号肽的结核分枝杆菌8.4(MS)/人白细胞介素12(hIL-12)嵌合基因,并研究嵌合基因疫苗的免疫原性。方法克隆 MS/hIL12嵌合基因,导入真核表达载体 pCI-neo,构建成 MS/hIL12嵌合基因真核表达质粒,用限制性内切酶消化、聚合酶链反应(PCR)及 DNA 序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定;重组嵌合质粒转染 COS-7细胞后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)鉴定 MS/hIL12嵌合基因的表达情况。将 MS/hIL-12嵌合基因疫苗免疫 C57BL/6N 小鼠,脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行细胞毒 T 淋巴细胞(CTL)杀伤检测。结果 MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒构建成功;转染 COS-7细胞后,MS/hIL12嵌合基因在转录水平成功表达。MS/hIL-12嵌合基因疫苗组免疫小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)含量分别为(1 521±48)ng/L 和(755±41)ng/L,MS 基因疫苗组分别为(820±50)ng/L 和(297±31)ng/L,BCG 组分别为(1 487±40)ng/L 和(767±50)ng/L,空载体组分别为(121±16)ng/L 和(62±10)ng/L,PBS 组分别为(48±16)ng/L 和(32±17)ng/L,上述结果显示 MS/hIL-12嵌合基因疫苗组 IFN-γ、IL-2分泌量增加,明显高于 MS 基因疫苗组及对照组(P<0.01),与 BCG 组相当(P>0.05);BCG 组免疫小鼠脾细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)的含量为(91±11)ng/L,明显高于其他各组(P<0.01)。效靶比为100∶1、50∶1、10∶1时,MS/hIL12嵌合基因疫苗组的 CTL 活性分别为77.5%、51.2%、30.3%,MS 基因疫苗组分别为56.2%、37.8%、11.5%,BCG 组分别为28.9%、21.4%、9.8%,MS/hIL-12嵌合基因疫苗组的CTL 活性高于 MS 基因疫苗组、BCG 组、空载体组和 PBS 组(P<0.01)。结论 hIL-12与 MS 构建成嵌合基因疫苗后,MS 基因疫苗的免疫原性得到很大提高。
- 李晖李榕钟森任红邓存良史小玲王明勇
- 关键词：分枝杆菌免疫原性
- 结核杆菌含信号肽的Mtb8.4真核表达质粒的构建及在COS-7细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的:克隆结核杆菌含信号肽的Mtb8·4(MS)基因,导入真核表达载体pcDNA3·1(+),构建成重组质粒pcDNA3·1(+)-MS,并在真核细胞中进行表达。方法:提取人结核杆菌H37Rv株的基因组作为模板,进行PCR圹增,获得含信号肽的Mtb8·4(MS)基因后,与pcDNA3·1(+)载体进行连接重组,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定;重组质粒转染COS-7细胞48h后,用RT-PCR方法鉴定MS在转录水平的表达情况。结果:pcD-NA3·1(+)-MS真核表达载体构建成功;转染COS-7细胞后,MS在转录水平成功表达。结论:pcDNA3·1(+)-MS真核表达质粒的构建以及MS在COS-7细胞中的成功表达,为进一步研究该真核表达质粒的免疫保护效果及制备结核病pcD-NA3·1(+)-MSDNA疫苗奠定了基础。
- 李晖李榕钟森任红
- 关键词：结核杆菌真核表达
- 含信号肽Mtb8·4基因疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护作用
- 2006年
- 目的研究含信号肽MTB8.4基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护作用。方法雌性C57BL/6N小鼠32只,随机分为4组,即含信号肽的MTB8.4(MS)基因疫苗组、BCG组、pcDNA3.1+组和PBS组。ELISA检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行CTL杀伤检测。用结核杆菌H37Rv强毒株静脉攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,观察小鼠部分肺和脾组织的病变程度;Z-N染色查结核杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护作用。结果MS基因疫苗能够诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-2分泌增加,IL-4分泌减少,特异性CTL活性增加;免疫组小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻。结论结核病MS基因疫苗能诱导较强的Th1型细胞免疫应答,对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护作用,但尚需进一步提高。
- 李晖邹永胜钟森任红陈宣世史小玲王明勇
- 关键词：基因疫苗免疫应答免疫保护
- 球罐一次下料展开分析被引量：1
- 2007年
- 通过实验并采集球形容器球瓣片成型数据,总结出了一种较为新颖的球壳板一次下料展开计算方法。该方法计算简单,制作方便,且样板精度高,实用性强。
- 柳忠彬贺元成胡光中兰芳
- 关键词：球形压力容器球壳板
