浙江省科技厅重大专项基金(2006C13110)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：谭峰王寒梁韶晖赵巧莲潘长旺更多>>
- 相关机构：温州医学院温州市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅重大专项基金浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种新的广州管圆线虫候选诊断抗原基因的克隆、表达及初步鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的克隆广州管圆线虫Ⅴ期幼虫候选免疫诊断抗原基因,进行体外表达及免疫学鉴定。方法根据本室构建的广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库的免疫筛选结果 ,选择文库中表达具有免疫反应性Ac11蛋白基因,进行生物信息学(在线Blast)分析,PCR扩增后克隆入pET28a(+)载体中,进行诱导表达及免疫学鉴定。结果推断Ac11基因为亚硫酸盐氧化酶基因。构建的重组质粒pET28a(+)-Ac11经IPTG透导,表达以包涵体形式存在的重组融合蛋白,分子质量单位约为30 kd。Western blot显示纯化的重组蛋白具有良好的免疫反应性。结论制备了具有良好免疫反应性的广州管圆线虫Ⅴ期幼虫亚硫酸盐氧化酶重组融合蛋白,为广州管圆线虫病的免疫诊断研究奠定了基础。
- 王寒刘文权赵巧莲谭峰潘长旺梁韶晖
- 关键词：广州管圆线虫克隆纯化免疫印迹
- 广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库的构建及免疫学筛选被引量：3
- 2010年
- 目的构建广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库,免疫学筛选抗原基因。方法提取广州管圆线虫Ⅴ期幼虫总RNA,用Clontech公司的SMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建未扩增文库,检测未扩增文库滴度和重组率后,进行文库扩增。用大鼠感染血清作免疫探针筛选文库,PCR扩增外源基因插入片段并测序,用生物信息学软件进行同源性比对,推导氨基酸序列,预测其理化性质。结果成功构建了广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库,免疫学筛选获得11个阳性克隆,对测序的9个阳性克隆进行初步分析,1个与广州管圆线虫Ⅴ期幼虫的1个EST同源性为99%,6个(有2个为同一克隆)与秀丽隐杆线虫和新杆状线虫均有不同程度的同源性,最高达91%。共有7个阳性克隆存在完整的开放阅读框。结论从广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库中初步筛选出7个有诊断意义的抗原基因,为其相关研究奠定了基础。
- 赵巧莲马雪莲王寒谭峰潘长旺梁韶晖
- 关键词：广州管圆线虫CDNA文库免疫学筛选
