国家自然科学基金(30672284)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：王薇张纯李颖黄琛陈晓勇更多>>
- 相关机构：北京大学第三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠视网膜色素上皮细胞分离的改良及其MMP表达被引量：1
- 2010年
- 目的探索和优化大鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞分离培养的方法,评价RPE细胞的存活状态及细胞基质金属蛋白酶(MMP)的表达,为相关眼底疾病的研究提供细胞来源。方法采用改良的三步酶消化法分离大鼠RPE细胞,并进行细胞体外培养。倒置显微镜观察细胞形态,细胞生长曲线评价不同培养代数的RPE细胞的增殖活力。免疫荧光检测CRALBP和角蛋白表达鉴定RPE细胞,并观察不同培养代数RPE细胞中多种基质金属蛋白酶的表达。结果分离培养的RPE细胞可呈梭形、六角形,并维持RPE细胞特征性蛋白CRALBP和角蛋白表达,但细胞内色素成分随着细胞分裂和传代次数的增多逐渐减少。基质金属蛋白酶MMP2、MMP3、MMP9和MMP10在第1代和第3代RPE细胞中均表达阳性,且表达强度未见明显改变。结论应用改良的三步酶消化法可以成功的分离培养大鼠RPE细胞,并在第1代和第3代RPE细胞维持基质金属蛋白酶MMP2、MMP3、MMP9和MMP10的阳性表达。体外培养的大鼠RPE细胞为研究视网膜相关疾病提供了细胞模型。
- 黄琛李颖陈晓勇许永根张纯王薇
- 关键词：视网膜色素上皮细胞基质金属蛋白酶细胞培养
- NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂Y1231对视网膜缺血再灌注损伤后RGCs的影响被引量：2
- 2008年
- 目的研究NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂Y1231对视网膜缺血再灌注损伤后神经节细胞的影响。方法采用视网膜神经节细胞(RGCs)逆行标记,用立体定位仪将大鼠固定,根据大鼠双侧上丘和外侧膝状体在颅骨表面的投影,在投影处钻4个骨孔,每孔注入10g/L的荧光金2μL。2周后采用升高眼压的方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。将35只SD大鼠随机分为正常对照组(7只),缺血再灌注组(7只)和治疗组(21只)。其中治疗组根据再灌注后不同时间予以0.1%Y12315μL右眼玻璃体腔注射分为1、3、6h组,每组7只大鼠。于再灌注后24 h取其视网膜铺片,用荧光显微镜拍照并计算赤道部以内RGCs的数目,对数据进行方差分析。结果缺血再灌注组与治疗组的RGCs数量均少于正常对照组(P<0.01)。与缺血再灌注组相比,治疗组中1h和3h给药组的RGCs数量明显多(P<0.01),而6h给药组差异无统计学意义(P=1.0)。结论在视网膜缺血再灌注损伤中,NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂Y1231可有效地保护RGCs。
- 邱伟强张纯王薇卫若昕
- 关键词：NMDA受体缺血再灌注
- 猪视网膜色素上皮细胞的体外培养与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的建立猪视网膜色素上皮(RPE)细胞体外分离、纯化培养体系并进行鉴定,为研究RPE细胞的功能及治疗相关眼底疾病提供细胞来源。方法采用胰蛋白酶消化法获取猪RPE细胞进行原代及传代培养,倒置显微镜观察细胞生长过程及形态变化并计算生长数据,角蛋白和RPE65蛋白抗体免疫细胞化学染色鉴定细胞。结果用胰蛋白酶消化法分离培养的猪RPE细胞生长良好,表现为多边形和梭形两种形态,原代细胞胞浆内含有丰富的色素颗粒,传代细胞内色素颗粒较原代细胞少。免疫组织化学法证实RPE细胞均为鼠抗人角蛋白染色阳性。结论培养的细胞可作为体外猪RPE细胞的来源,体外分离、纯化和培养猪RPE细胞的成功,为RPE细胞功能和相关视网膜疾病的深入研究提供了细胞来源。
- 李颖陈晓勇黄琛王薇
- 关键词：视网膜色素上皮细胞细胞培养视网膜疾病
