广州市科技计划项目(2006Z1-E0031)
- 作品数：3 被引量：21H指数：3
- 相关作者：潘秋辉孙奋勇马纪于永春杨松海更多>>
- 相关机构：中山大学附属第二医院暨南大学同济大学更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 骨形态发生蛋白2通过Smad途径上调Osterix的表达被引量：12
- 2008年
- Osterix(Osx)是一种重要的调控成骨细胞分化的具有锌指结构的转录因子.骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP 2)能够上调Osx的表达,但其分子机制并不清楚.采用实时定量RT-PCR方法检测到BMP2诱导成骨相关细胞C3H10T1/2,MC3T3-E1,C2C12中Osx的转录水平显著上调,并且与成骨分化指标Col1a1,osteocalcin具有相似的表达动力学特征.而且,在C3H10T1/2细胞中过表达负显性(dominant negative,DN)Osx基因,能够有效抑制BMP2诱导的成骨分化.过表达BMP/Smad信号通路抑制蛋白Smad6,能够抑制Osx转录水平的上调.但是通过荧光素酶报告载体对Osx的启动子-1254^+85区域进行分析后未发现接受BMP通路调控的启动子区域.上述结果表明,BMP2能够通过Smad途径上调Osx的表达,并对成骨分化的过程具有十分重要的作用.
- 潘秋辉李益广杨松海马纪谢在春于永春孙奋勇
- 关键词：OSTERIX成骨细胞骨形态发生蛋白2
- 转录因子Osterix对成骨细胞Col1a1基因的反式激活作用被引量：5
- 2007年
- Osterix(Osx)是一种具有锌指结构的转录因子,对骨形成十分重要.但到目前为止,直接接受Osterix调控的靶基因尚不清楚.用骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)诱导原代培养小鼠成骨细胞的骨分化,定量RT-PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ a1,Col1a1)与Osx的转录水平.结果发现,二者的转录时相具有相同的变化模式.为了确定二者之间的关系,采用腺病毒表达系统在原代成骨细胞中过表达Osx.数据表明,Osx能够明显上调Col1a1的转录水平.用EMSA(electromobility shift assay)检测这些过表达Osx基因的成骨细胞核抽提物,迁移条带的出现表明,Osx能够直接与Col1a1的启动子相结合.结果提示,在原代培养的成骨细胞中,Osterix通过直接与启动子相结合,调控Col1a1基因的转录.
- 潘秋辉马纪于永春孙奋勇
- 关键词：成骨细胞OSTERIX骨形态发生蛋白2
- 在CHO细胞中表达具有高效成骨活性的BMP-2／7异源二聚体被引量：4
- 2008年
- PCR扩增BMP-2与BMP-7的编码基因,利用重叠PCR以柔性肽(Gly4Ser)5编码序列将二者串连并克隆到质粒pIRESneo3上,转染CHO-K1细胞得到混合稳定克隆。ELISA检测培养液中BMP-2/7异源二聚体蛋白的表达水平为230.75±13.34ng/mL,以此为条件培养基处理成骨细胞株MC3T3,对照组为分别含有CHO-K1细胞及大肠杆菌表达的BMP-2同源二聚体以及PBS的条件培养基。结果发现碱性磷酸酶染色与茜素红染色差异明显,定量RT-PCR显示分子指标OC、ALP、Runx2与Osx的转录水平明显增高(P<0.05),Luciferase报告基因检测BMP/Smad通路活性较对照组升高明显(P<0.05)。首次设计构建了BMP-2/7异源二聚体蛋白,其成骨活性显著高于BMP-2同源二聚体。
- 潘秋辉杨松海孙奋勇
- 关键词：骨形态发生蛋白异源二聚体成骨细胞
