博士科研启动基金(2727)
- 作品数：4 被引量：17H指数：2
- 相关作者：孔令保吴晓玉刘好桔熊舒珺郭韫丽更多>>
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- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 众筹在图书馆的实践与思考被引量：12
- 2016年
- 众筹图书馆是"互联网+",时代图书馆建设的创新模式,是众筹与图书馆的有机融合,对网络环境下的文化慈善、精准扶贫、共享经济、图书捐赠等带来突破和创新。期望以众筹在图书馆的成功实践为例,从众筹平台、众筹项目、筹资人、投资人等方面分析国内众筹图书馆的现状,剖析众筹图书馆建设的保障机制。研究发现,众筹在图书馆领域的应用目前还处于初始阶段,未来必将在推广全民阅读和延伸图书馆服务方面发挥重要作用,提升服务质量,成为图书馆的新增长点。
- 郭韫丽
- 关键词：众筹图书馆建设
- 持续表达HCV NS5B的Bel-7402细胞系的构建与鉴定被引量：2
- 2009年
- HCV NS5B是HCV复制所必需的RNA依赖的RNA聚合酶和抗HCV药物的一个理想靶标,构建持续表达NS5B的肝细胞系将有助于研究HCV在肝细胞的复制机制和抗HCV药物的研发。ScaI酶切含有NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,获得的线性化pcDNA-5B通过脂质体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞,G418筛选转染细胞。阳性细胞经基因组PCR、RT-PCR和Western Blot鉴定,证实获得持续表达NS5B的Bel-7402细胞系。体外复制试验和荧光素酶试验表明:Bel-7402细胞表达的NS5B蛋白有体外和细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。持续表达有聚合酶活性的HCV NS5B的Bel-7402细胞系的建立为进一步研究NS5B催化的HCV复制机制和NS5B抑制剂的筛选奠定基础。
- 孔令保吴晓玉李昆太徐波刘好桔熊舒珺
- 关键词：HCVNS5BBEL-7402活性
- 丙型肝炎病毒NS5B在Hep3B细胞的表达及活性分析被引量：2
- 2010年
- 目的丙型肝炎病毒NS5B基因转染人肝癌细胞系Hep3B细胞,检测NS5B的表达与细胞内RNA聚合酶活性。方法使用脂质体把包含全长丙型肝炎病毒NS5B基因的重组载体pcDNA-5B转染到Hep3B细胞。RT-PCR和Wes-tern blot鉴定NS5B基因的表达,荧光素酶检测NS5B的细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。结果RT-PCR和Westernblot发现转染NS5B基因的Hep3B细胞产生NS5B mRNA和NS5B蛋白,荧光素酶分析表明Hep3B细胞表达的NS5B蛋白具有细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。结论人肝癌细胞系Hep3B细胞可以成功表达NS5B基因,且表达的NS5B蛋白具备细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。
- 孔令保刘志文吴晓玉刘好桔王园秀
- 关键词：丙型肝炎病毒NS5BHEP3B细胞活性
- 丙型肝炎病毒RNA聚合酶在HepG-2细胞的稳定表达及活性分析被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨丙型肝炎病毒RNA聚合酶(NS5B)在肝癌细胞株HepG-2的稳定表达与活性。方法:ScaⅠ酶切含有丙型肝炎病毒NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,线性化的pcDNA-5B通过脂质体介导转染HepG-2细胞,G418筛选转染细胞。阳性细胞经基因组PCR、RT-PCR和Western Blot鉴定。体外RNA聚合酶试验和荧光素酶试验鉴定稳定表达NS5B蛋白的RNA聚合酶活性。结果:NS5B基因可整合到转染的HepG-2细胞的染色体上,并能有效转录和表达。体外RNA聚合酶试验和荧光素酶试验表明稳定表达的NS5B在体外和细胞内均具备RNA依赖的RNA聚合酶活性。结论:肝细胞HepG-2可以稳定表达丙型肝炎病毒NS5B,且具备RNA依赖的RNA聚合酶活性。
- 熊舒珺吴晓玉孔令保
- 关键词：肝炎病毒属RNA聚合酶HEPG-2细胞活性
