国家自然科学基金(30672261)
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
- 相关作者：常立文李文斌陈燕蔡成刘伟更多>>
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- 硫氧还蛋白在早产鼠高氧肺损伤中的动态表达及其临床意义被引量：6
- 2007年
- 目的研究高氧肺损伤早产鼠肺组织硫氧还蛋白(Trx)的表达及其临床意义。方法早产新生SD大鼠128只,生后d1随机分为空气组和高氧组,每组64只。分别于d1、4、7、10、14提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx mRNA水平;免疫组织化学方法检测肺组织切片凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3);HE染色观察肺组织病理变化。结果高氧组肺发育明显受阻,与空气组比较,高氧暴露后Trx mRNA表达显著增强,且于d10时达高峰(P<0.05,0.01)。Caspase-3表达显著升高(P<0.05,0.01)。结论高氧上调早产鼠肺组织Trx mRNA的表达;肺组织Trx mRNA的表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发生发展中发挥重要保护作用。
- 陈燕常立文刘伟李文斌汪鸿黄光焰蔡成
- 关键词：高氧硫氧还蛋白半胱氨酸蛋白酶类肺损伤
- 硫氧还蛋白及其还原酶在新生鼠高氧肺损伤中的表达
- 2008年
- 目的研究硫氧还蛋白（Trx）及其还原酶（TR）在早产新生鼠高氧肺损伤的肺组织中的表达变化及意义。方法早产新生SD大鼠，生后第一天随机分为空气组和高氧组，每组64只。两组分别于高氧或空气暴露后第4、7、10、14天提取肺组织总RNA，采取半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定Trx和TR mRNA表达；同时采用HE染色观察肺组织病理学变化，并进行辐射状肺泡计数（RAC）。结果病理学观察显示：与对照组比较，高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后，同时RAC值亦较空气组显著减少（P〈0．05）。高氧暴露各组Trx、TR mRNA表达较空气组均明显增强（P〈0．05），且二者表达强度分别于第10天和第7天达高峰。结论高氧上调肺组织Trx、TR表达；肺组织Trx系统表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发病过程中发挥重要保护作用。
- 陈燕常立文李文斌蔡成刘伟单瑞艳
- 关键词：高氧硫氧还蛋白肺损伤
- 高氧暴露对早产新生大鼠肺组织凋亡信号调节激酶1表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的研究早产新生大鼠高氧肺损伤肺组织中凋亡信号调节激酶1（ apoptosis signalregulating kinase 1, ASK1 ） 及硫氧还蛋白（thioredoxin，Trx）和硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reduetase，TrxR）的表达变化及意义，探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法早产新生SD大鼠128只，生后1d随机分为空气组和高氧组，每组64只。两组于生后1、4、7、10、14d各时间点处死8只大鼠取肺组织，采用HE染色观察肺组织病理学变化；采用逆转录-聚合酶链反应技术测定Trx和TrxRmRNA表达；免疫组织化学方法检测肺组织ASK1蛋白的表达和分布，Western印迹法检测ASK1蛋白表达水平变化。两组间比较采用t检验。结果（1）肺组织病理学：与对照组比较，高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后。（2）肺组织ASK1广泛分布于肺泡上皮细胞和血管内皮细胞胞浆中；高氧暴露1、4d肺组织ASK1蛋白表达分别为0．4382±0．0227和0．5270±0．0432，高于空气组（0．3458±0．0263和0．3760±0．0058）（P〈0．01），7d时下降为0．4343±0．0254，但仍高于空气组（0．3473±0．0220）（P〈0．01）。（3）高氧组Trx和TrxRmRNA表达强度均高于空气组，且二者分别于10d（0．6860±0．0811）和7d（2．0351±0．1600）时达高峰（P％0．05）。（4）Western印迹法检测ASK1蛋白水平变化与免疫组织化学法的结果一致。结论ASK1可能参与高氧肺损伤的发生发展，而Trx系统可能在其中发挥重要保护作用。
- 单瑞艳常立文陈燕李文斌蔡成刘伟
- 关键词：高氧症肺疾病
- 高体积分数氧暴露早产新生大鼠肺组织超微结构变化与氧化应激反应的关系被引量：4
- 2008年
- 目的探讨高体积分数氧(高氧)暴露早产新生大鼠肺组织超微结构变化与氧化应激反应的关系。方法将160只新生SD大鼠(孕21d)随机分为空气组(Ⅰ组)、高氧组(Ⅱ组)、高氧加大剂量N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(Ⅲ组)和高氧加小剂量NAC组(Ⅳ组),每组各40只。Ⅰ组在空气中饲养,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组置于高氧箱(保持氧体积分数>950mL/L)中饲养,Ⅲ、Ⅳ组大鼠以灌胃方式予NAC[Ⅲ组予NAC6.25×10-2g/(kg.d),Ⅳ组剂量是Ⅲ组剂量的1/4,给药时间为出生第1-7天]。每组又随机分为第3、7、14、21天4个亚组,每组各10只,分别在第3、7、14、21天处死动物,收集其血浆和肺组织标本。采用ELISA方法检测各亚组大鼠血浆8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)水平,并应用透射电镜观察其肺组织超微结构改变。结果Ⅱ组第3天肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)胞质中板层小体出现排空现象,AECⅠ、AECⅡ线粒体肿胀;肺组织中可见中性粒细胞浸润。第7天各种细胞超微结构改变较第3天更加明显,AECⅡ胞质中板层小体排空现象增加,各种细胞线粒体肿胀更加明显,呈气球样变;部分AECⅡ出现坏死;第14、21天,AEC基底膜及气血屏障明显增厚;成纤维细胞增殖,肺间质可见大量胶原原纤维。Ⅲ组第3、7天时肺组织各类细胞线粒体肿胀明显减轻,AECⅡ板层小体排空明显减少,未见AECⅡ坏死或凋亡;第14、21天肺间质中胶原纤维未见明显增加。Ⅳ组肺组织超微结构在各时间点的变化较Ⅱ组稍减轻。Ⅱ组早产新生大鼠血浆8-iso-PGF2α水平从第3天即开始升高,第14天最高,第21天虽较前明显下降,但仍显著高于Ⅰ组;Ⅲ组各时间点血浆8-iso-PGF2α水平较Ⅱ组明显降低,但仍高于Ⅰ组;Ⅳ组血浆8-iso-PGF2α水平较Ⅱ组降低不明显。结论高氧暴露诱导的肺损伤早期以AEC,尤其是AECⅡ损伤为特征,继之导致AEC基底膜及气血屏障明显增厚,晚期出现肺间质胶原纤维沉积形成肺纤�
- 周晓光刘秀香刘仁红肖昕常立文
- 关键词：高体积分数氧肺损伤8-异前列腺素F2Α氧化应激超微结构
- 线粒体呼吸链与新生儿高氧肺损伤被引量：1
- 2008年
- 高氧肺损伤是新生儿尤其早产儿常见的并发症之一。迄今新生儿高氧肺损伤的详细发病机制尚未完全阐明。最近的研究表明，线粒体呼吸链与新生儿高氧性肺损伤也有密不可分的关系。该文综述高浓度氧暴露对肺组织线粒体呼吸链酶复合体组成成分表达的影响；线粒体呼吸链在高氧肺损伤中可能发挥的作用以及与此相关的治疗与展望。
- 蔡成常立文
- 关键词：线粒体婴儿高氧症肺疾病
- RNA干扰抑制高氧暴露下A549细胞中硫氧还蛋白-2表达的研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究小分子干扰RNA（small interference RNA，SiRNA）抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2（thioredoxin-2，Trx-2）的表达及其与细胞凋亡的关系，探讨Trx-2对高氧肺损伤线粒体的保护作用。方法体外传代培养A549细胞系，将Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipo—fectamine 2000转染A549细胞，随机分为干扰后空气组、无干扰高氧组和干扰后高氧组。三组分别于高氧或空气暴露12、24、48h后采用RT-PCR技术测定Trx-2和细胞色素c（cytochromec，Cytc）mRNA的表达；采用流式细胞术检测三组A549细胞凋亡情况。结果（1）RT-PCR检测显示序列特异性SiRNA可显著降低Trx-2 mRNA的表达。（2）干扰后高氧组24hTrx-2 mRNA水平为0．2774±0．0174，48h为0．25874-0．0069，均低于无干扰高氧组（分别为0．7799±0．1249，0．4050±0．0842）（P均〈0．05）。无干扰高氧组24hTrx-2 mRNA水平高于干扰后空气组（O．4046±0．0161）（P〈0．05）。（3）无干扰高氧组24hCytc mRNA水平为0．3957±0．0903，48h为0．3438±0．0092，均低于干扰后高氧组（分别为0．6620±0．0395，0．4806±0．0977）和干扰后空气组（分别为0．5197±0．0377，0．4902±0．1079）（P均d0．05）。（4）干扰后高氧组A549细胞凋亡率明显高于干扰后空气组。结论SiRNA能显著下调A549细胞Trx-2 mRNA的表达；高氧暴露诱导SiRNA干扰后A549细胞Trx-2和Cytc mRNA表达的变化表明Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用。
- 蔡成常立文李文斌刘伟陈燕单瑞艳
- 关键词：小分子干扰高氧症硫氧还蛋白
- 细胞色素氧化酶在高体积分数氧暴露下胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞表达的变化被引量：1
- 2009年
- 目的观察高体积分数氧(高氧)暴露下胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的线粒体DNA编码细胞色素氧化酶亚基Ⅰ、Ⅱ(COXⅠ、COXⅡ)mRNA表达的动态变化,探讨其在早产鼠高氧肺损伤发生发展的可能作用。方法分离、培养19 d胎鼠AECⅡ,经贴壁纯化后随机分为高氧组和空气组。高氧组在更换培养液后通入950 mL/L氧气及50 mL/L二氧化碳混合气,3 L/min,10 min后密封。2组均置于37℃、50 mL/L二氧化碳培养箱中培养。2组分别于高氧或空气暴露6、12、24 h提取AECⅡ总RNA,采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定其COXⅠ和COXⅡmRNA表达。采用SPSS12.0软件进行统计学分析。结果与同时间点空气组比较,高氧暴露6、12 h时,COXⅠmRNA的表达显著升高(t=3.832 P=0.019,t=10.431 P=0),其后下降,24 h时2组比较无显著性差异(t=0.360 P=0.731)。高氧暴露6 h时,COXⅡmRNA表达显著升高(t=2.795 P=0.035),12、24 h时2组无显著差异(t=0.892 P=0.40,t=2.018 P=0.071)。结论高氧暴露诱导胎鼠AECⅡ中COXⅠmRNA和COXⅡmRNA表达上调,可能是高氧肺损伤的保护作用机制之一。
- 潘睿常立文陈燕
- 关键词：高体积分数氧细胞色素氧化酶
- 高氧暴露胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体蛋白质组学初步研究以及ND4动态表达
- 2008年
- 目的初步分析高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar epithelial cell Ⅱ，AECⅡ）线粒体蛋白质表达谱的改变并就NADH脱氢酶亚单位4（NADH—dehydrogenase subunit4，ND4）的动态表达进行研究。方法原代培养胎鼠AECⅡ并随机分为空气组和高氧组，采用双向电泳检测线粒体蛋白差异性表达，运用RT—PCR和Western blot方法分别检测ND4 mRNA及其蛋白表达。结果与空气组比较，高氧暴露24h导致55种AECⅡ线粒体蛋白质出现差异性表达；高氧暴露6、12、24和48h，原代胎鼠AECⅡ ND4 mRNA（1．20±0．12，1．20±0．12，0．69±0．07和1．54±0．10）表达均较对照组（2．3±0．13，4．61±0．43，2．15±0．14和2．21±0．21）显著降低，差异均有统计学意义（P均〈0．01）。高氧暴露12和24h时，原代胎鼠AECⅡ ND4蛋白表达（1．58±0．21和1．33±0．10）较对照组（2．77±0．19和2．23±0．05）下降，差异有统计学意义（P均〈0．01）。结论高氧暴露导致AECⅡ线粒体（包括呼吸链）功能状态改变可能是促使肺损伤发生发展的重要因素。
- 李文斌常立文卢红艳容志惠汪鸿刘伟
- 关键词：高氧症线粒体蛋白质类NADH脱氢酶
- 高浓度氧暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸表达的影响被引量：2
- 2007年
- 目的探讨高浓度氧(高氧)暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-脱氢酶亚基4(ND4)表达的影响。方法原代培养早产Sprague-Dawley(SD)大鼠AECⅡ,待其在含50mL/L二氧化碳(CO2)培养箱中生长至接近融合状态时随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧体积分数>900mL/L,CO2体积分数为50mL/L;空气组仍置于含50mL/L CO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露6、12、24h提取细胞RNA,采取半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ND4 mRNA的表达;采用免疫细胞化学染色法检测细胞爬片ND4蛋白的表达。结果与空气组比较,免疫细胞化学结果显示高氧暴露6、12h ND4的表达无显著性差异(Pa>0.05),高氧暴露24h ND4的表达显著减弱(P<0.05);RT-PCR检测显示高氧暴露6h ND4 mRNA表达无显著性差异(P>0.05),高氧暴露12、24h ND4 mRNA表达显著减弱(Pa<0.05)。结论高氧暴露下调早产SD大鼠AECⅡ ND4 mRNA和蛋白水平的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程。
- 黄光焰常立文汪鸿蔡成刘伟李文斌陈燕
- 关键词：高氧症早产
- 高氧、维甲酸对早产鼠肺组织基质金属蛋白酶-2、-9及特异性组织抑制物-1、-2表达的影响被引量：5
- 2007年
- 目的探讨基质金属原蛋白-2(MMP-2)、MMP-9、基质金属蛋白酶特异性组织抑制物-1(TIMP-1)和TIMP-2在高氧肺损伤中的作用及维甲酸(RA)的保护作用机制。方法建立高氧(FiO285%)暴露早产SD大鼠肺损伤模型,应用RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2mRNA表达,采用明胶酶谱检测MMP-2和MMP-9酶原及活酶表达,采用Western blot技术检测TIMP-1和TIMP-2蛋白表达。结果与空气组比较,高氧暴露4、7、14d,MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达均显著升高(P均<0.01),MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶和TIMP-1蛋白的表达明显上调(P<0.05);RA对空气暴露下它们的表达均无明显影响(P均>0.05),但不同程度下调高氧暴露后MMP-2、MMP-9、TIMP-1mRNA的表达和MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶的表达,进一步提高TIMP-1蛋白表达;高氧、RA对TIMP-2 mRNA和蛋白的表达均无明显影响(P均>0.05)。结论高氧暴露明显改变MMPs/TIMPs的表达,在肺泡形成关键时期,MMPs/TIMPs之间平衡关系的破坏是造成肺发育受阻和纤维化的重要因素;通过协调MMPs/TIMPs之间的表达,改善肺泡结构,降低肺纤维化程度,从而逆转高氧所致肺损伤,是RA发挥保护作用的重要机制之一。
- 李文斌常立文容志惠刘汉楚张谦慎陈红兵祝华平卢红艳王华
- 关键词：高氧肺损伤维甲酸
