国家教育部博士点基金(20030001029)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：刘树林刘桂荣王玲部小霞陈芳更多>>
- 相关机构：北京大学卡尔加里大学哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金教育部留学回国人员科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 鸡沙门菌基因组物理图被引量：1
- 2006年
- 目的建立鸡沙门菌287/91株的基因组物理图,与鸡沙门菌SARB21以及鼠伤寒沙门菌LT2的基因组物理图进行比较,以找出同种细菌不同菌株之间以及近缘菌之间基因组的差异,进而探讨细菌基因组进化的一般规律。方法细菌基因组DNA用XhaⅠ、AvrⅡ和Ⅰ-CeuⅠ进行酶切,再用脉冲场凝胶电泳方法分离出DNA片段,通过Tn10插入等方法对这些片段进行精确排列。结果构建了鸡沙门菌287/91株的基因组物理图。与SARB21株的基因组物理图比较发现,二者相对于鼠伤寒沙门菌LT2有相似的插入和缺失片段。结论鸡沙门菌287/91株与SARB21株基因组很相似,其主要差异在于rrn操纵子DNA介导的同源性重组发生的具体部位不同,导致了基因组DNA片段的不同排列,因而造成二者不同的基因组结构。
- 刘桂荣刘葳峤祁丹妮何晓燕张凤民刘树林
- 关键词：基因组重排脉冲场凝胶电泳
- 沙门菌细聚合菌毛作为新型载体表达外源基因片段被引量：4
- 2006年
- 目的用减毒Salmonella typhimurium ST14028-3b菌株的细聚合菌毛(thin aggregative fim- briae)构建表达HIV-1 2F5抗原表位的载体。方法通过两步重叠PCR法(two step overlap extension PCR)构建重组体agfA：：2F5,将重组体克隆至具有分离缺陷的温度敏感性低拷贝质粒pHSG415中,构成重组质粒pHSGAgfA2F5,然后经电穿孔法转化入ST14028-3b菌株中,经温度和抗生素选择压力进行等位基因置换,通过PCR筛选出含有外源基因的突变株,测序验证其序列的正确性。最后,用Western blot法检测菌毛蛋白的表达,黏附试验来证明含有外源基因的菌株Bu96的黏附能力。结果序列分析表明基因置换后的突变株在菌毛基因上含有外源基因2F5,且不含有质粒pHSG415的复制子序列。Western blot结果显示菌毛蛋白表达,黏附试验表明了菌株Bu96的黏附能力。结论利用具有分离缺陷的温度敏感性低拷贝质粒pHSG415,在ST14028-3b的细聚合菌毛编码基因agfA上插入表达2F5或其他外源基因的方法可行。本方法的最大优点在于不需要使用专门的菌株或抗生素抗性标记重组基因来进行位点特异性基因置换,同时也避免了在染色体上非目的DNA的出现。
- 部小霞Aaron White王玲刘树林
- 关键词：基因置换沙门菌
- 沙门菌Ⅲ型分泌蛋白融合HBx抗原介导的T细胞免疫效果观察
- 2007年
- 目的检测沙门菌减毒株作为载体,Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,TTSS)效应蛋白-肿瘤抗原融合蛋白激发机体产生T细胞免疫反应的能力。方法重组原核表达质粒,表达Ⅲ型分泌蛋白SspH2和肿瘤抗原HBx融合分子,转化鼠伤寒沙门菌减毒株SL3261,口饲免疫小鼠。通过检测免疫小鼠脾细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放确定疫苗激发CTL作用;利用ELISPOT方法检测免疫小鼠脾淋巴细胞释放IFN-γ能力;腋下接种稳定表达HBx的B16细胞,观察免疫小鼠肿瘤的体积及重量,检测该疫苗的免疫保护效果。结果通过LDH释放试验发现,经细菌体内表达及投递SspH2-HBx融合蛋白诱发后,小鼠脾淋巴细胞具有特异的CTL反应活性;ELISPOT结果显示细菌表达、投递SspH2- HBx蛋白具有特异诱发淋巴细胞分泌IFN-γ活性;肿瘤接种试验进一步证实这种基于TIKS的肿瘤疫苗可以特异抑制肿瘤的生长。结论以沙门菌减毒株作为载体、Ⅲ型分泌蛋白SspH2作为底物融合肿瘤抗原HBx能够激发显著的T细胞免疫反应、产生一定的免疫保护作用;这种基于沙门菌TTSS的疫苗具有一定的开发、应用前景。
- 汪业军侯艳黄鹤刘桂荣刘树林
- 关键词：HBX肿瘤免疫
