陕西省科技攻关计划(2002K01-G3)
- 作品数：3 被引量：13H指数：3
- 相关作者：安立龙窦忠英效梅杨学义马霄飞更多>>
- 相关机构：广东海洋大学西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划广东省教育厅科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 人胰腺干细胞建系及移植诱导胰岛治疗大鼠糖尿病被引量：7
- 2008年
- 供体不足已成为移植胰岛治疗Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病的主要障碍,分离克隆胰腺干细胞作为种子细胞并诱导其分化为功能性胰岛可提供丰富的移植资源.本研究从人流产胎儿胰腺组织分离获得1例单克隆胰腺干细胞系.无菌取流产胎儿胰腺组织,0.1%Ⅳ型胶原酶消化分离为单个细胞和细胞团.低糖DMEM+10%FBS培养,单个细胞和细胞团贴壁,原代上皮样胰腺干细胞克隆性生长.0.25%胰蛋白酶+0.04%已二胺四乙酸(EDTA)消化传代,成纤维样细胞和其他细胞逐渐被消除,上皮样胰腺干细胞逐渐被纯化.克隆环筛选,获得单克隆人胰腺干细胞.在培养液中添加10ng/mL表皮生长因子(EGF),单克隆人胰腺干细胞快速生长至单层,呈铺路石样.继续传代培养,1例来源于4月龄男性流产胎儿胰腺干细胞已传50代.液氮冷冻保存细胞1×109个以上.染色体核型分析,该干细胞系为正常的二倍体细胞.免疫组织化学反应,共表达pdx1,glucagon,nestin及CK19蛋白,不表达insulin,CD34,CD44及CD45.RT-PCR检测,转录pdx1,glucagon,nestin及CK19的mRNA,不转录insulin.β-巯基乙醇诱导,分化为神经细胞,免疫组织化学反应表达NF蛋白.烟酰胺诱导,分化为DTZ染色阳性,转录表达insulin,分泌insulin和C肽的功能性类胰岛.将单克隆人胰腺干细胞体外诱导胰岛移植在STZ制备的糖尿病大鼠肾囊内,能降低糖尿病大鼠血糖水平,延长寿命.
- 效梅安立龙杨学义葛昕乔海赵婷马霄飞樊敬庄朱梦漾窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞单克隆分化
- 单克隆人胰腺干细胞的形态和蛋白表达特征被引量：3
- 2009年
- 目的研究1例单克隆人胰腺干细胞系的细胞形态和表达特性。方法10例4～5月龄流产胎儿胰腺组织,胶原酶消化。原代细胞DMEM培养,胰蛋白酶消化传代。在传代中逐渐纯化胰腺干细胞。克隆环筛选单克隆人胰腺干细胞,扩增培养。活力较好的细胞液氮冷冻保存。采用HE和Giemsa染色,观察单克隆人胰腺干细胞的形态特征;通过透射电镜分析其超微结构。用免疫组织化学反应和RT-PCR方法,检测其蛋白水平和mRNA水平的表达特征。结果1例来源于4月龄男性胎儿的单克隆人胰腺干细胞建系,传50代。液氮保存细胞1×109个以上。单克隆人胰腺干细胞完全贴璧时呈多角形上皮样,单核,圆形或椭圆形,单、双或多核仁。细胞核质比大,线粒体、内质网等细胞器均不发达,胞质内无分泌颗粒,属于发育早期的胰腺上皮样细胞。共表达胰肠同源域因子1（pdx1）、胰高血糖素、巢蛋白及角蛋白19（CK19）,不表达胰岛素、周期蛋白34（CD34）、CD44及CD45。转录表达pdx1、胰高血糖素及巢蛋白的mRNA,不转录表达胰岛素。结论首次证实1例共表达pdx1、胰高血糖素、巢蛋白及CK19蛋白的单克隆人胰腺干细胞系。
- 效梅安立龙窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞单克隆免疫组织化学反转录-聚合酶链式反应
- 移植源于人单克隆胰腺干细胞的胰岛治疗大鼠糖尿病被引量：5
- 2009年
- 将人单克隆胰腺干细胞（1．0×10^4个／孔）接种在铺有明胶的6孔板内，体外定向诱导其分化为包含大量β细胞的类胰岛。双硫腙染色呈阳性。RTPCR检测，转录表达胰岛素。Sprague-Dawley成年大鼠30只，6只腹腔注射缓冲液作正常对照，24只腹腔注射2％链脲菌素制备糖尿病模型。注射后48h及5、8d，断尾采血，测定全血血糖。随机取3次血糖均〉16．65mmol／L的糖尿病大鼠用于移植试验。DMEM稀释每个阳性孔诱导胰岛细胞至100μL，分别移植在12只糖尿病大鼠左侧肾囊内。6只糖尿病模型对照大鼠左侧肾囊内分别注射100μL DMEM。实验大鼠每10d断尾测全血血糖1次。在为期67d的移植试验中，12只诱导胰岛移植大鼠血糖水平从18．93～25．78mmol／L降至6．32～11．47mmol／L。除2只死于移植感染外，其余存活了54～67d。6只糖尿病对照大鼠血糖水平持续在18．73～25．96mmol／L。1只感染死亡，5只存活了16～42d。6只正常对照大鼠血糖基本保持在3．56～5．83mmol／L，死亡率为0。结果表明，人单克隆胰腺干细胞体外定向诱导能分化为包含大量β细胞的功能性胰岛，移植这些诱导胰岛能降低糖尿病大鼠血糖水平，延长其寿命。
- 效梅安立龙杨学义窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞单克隆诱导胰岛糖尿病
