国家自然科学基金(30672201)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
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- HMG盒蛋白1抑制巨噬细胞移动抑制因子启动子的转录激活
- 2010年
- HMG盒蛋白1(HMG box-containing protein 1,HBP1)是一种转录抑制因子.HBP1表达上调可抑制肿瘤细胞的增殖和转移,并且在肿瘤细胞中HBP1常常发生丢失或转位,这表明HBP1是一种抑癌基因.HBP1所调节的靶基因无疑将为HBP1的肿瘤抑制机制提供新的线索.本研究通过生物信息学分析发现,在促细胞增殖基因-巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)启动子区域-811 bp至-792 bp发现高亲和力的HBP1反应元件.缺失和突变分析表明,HBP1通过该元件抑制MIF启动子活性.此外,免疫共沉淀研究显示,HBP1在细胞内与该元件结合,并且抑制MIF的转录.功能分析进一步证实,在细胞培养液中加入重组MIF可部分消除HBP1对大肠癌细胞LOVO的抑制作用.这些结果提示,MIF是HBP1的一个靶基因.HBP1通过抑制促细胞增殖基因MIF的表达抑制肿瘤细胞生长.
- 雷福明毛泽斌
- H_2O_2诱导的2BS早老细胞中自噬体增多被引量：2
- 2009年
- 自噬在细胞复制性衰老中起着重要的作用.然而,早老细胞中的自噬现象基本无相关的报道.本文通过外源性过氧化氢(H2O2)的诱导,构建人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS细胞)早老模型.首先,通过SA-β-gal染色,验证细胞早老;从形态学和特异标志分子及雷帕霉素作用的靶位点(mTOR)信号通路不同角度检测自噬的变化,其中形态学检测包括丹(磺)酰戊二胺(MDC)自噬分子定量法及电镜自噬超微结构的观察;特异标志分子LC3的检测包括GFP-LC3自噬定位法和免疫印迹法检测LC3;及检测mTOR信号通路下游激酶p70S6蛋白的表达变化.结果表明,过氧化氢诱导的早老细胞中自噬体相对年轻细胞明显增多,且具有保护早老细胞的作用.
- 谢步善韩秀丽陈丽婷何维清白俊海毛泽斌
- 关键词：自噬人胚肺二倍体成纤维细胞过氧化氢
- PKIB抑制PKA活性调节细胞衰老被引量：1
- 2009年
- 人cAMP依赖型蛋白激酶B抑制剂(PKIB)是一种新的耐热蛋白.实验证明,PKIB对PKA催化亚单位具有抑制作用.为研究PKIB在细胞衰老中的功能,以年轻和年老人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS细胞株)为实验对象,通过实时-PCR发现,在年老细胞中,PKIB表达高于年轻细胞;用PKA活化剂处理年轻和年老细胞,结果显示,在年老细胞中PKA活性变化较年轻细胞小.通过免疫共沉淀实验证实,在年老细胞中,PKIB与PKA催化亚单位结合较年轻细胞中多;进一步通过在年轻细胞中过表达PKIB,检测细胞PKA活性,发现PKA活性明显降低,进一步证实了在人胚肺二倍体成纤维细胞中PKIB对PKA活性的抑制作用;利用Western实验结果证实,PKA催化亚单位在年轻细胞中的表达高于年老细胞.以上结果证明,在2BS细胞中,PKA活性受PKIB的抑制;这种抑制作用与细胞的衰老有一定的关联作用.
- 韩秀丽陈丽婷谢步善白俊海毛泽斌
- 关键词：细胞衰老PKA人胚肺二倍体成纤维细胞
- miR-30d负性调节HeLa细胞的增殖被引量：3
- 2009年
- 有证据显示,microRNA(miRNA)可作为癌基因或抑癌基因发挥功能,参与细胞增殖和凋亡等调控;PI3K/Akt通路的持续活化与肿瘤的发生、发展密切相关.在本研究中,我们通过microarray技术在HeLa细胞中检测经ly294002作用24h阻断PI3K/Akt通路后microRNA的表达变化.Taqman实时PCR实验结果显示,hsa-miR-30d的表达在PI3K/Akt通路被阻断后明显上调.萤光素酶报告基因转染结合Taqman实时PCR显示,稳定转染miR-30d过表达质粒的HeLa细胞系中miR-30d的表达量升高并且有活性.MTT及流式细胞术分析显示,过表达miR-30d的HeLa细胞其增殖受到抑制.这些结果说明,hsa-miR-30d可抑制HeLa细胞增殖,负性调节细胞生长,是一个潜在的抑癌基因.
- 陈丽婷牛小华韩秀丽谢步善毛泽斌
- 关键词：微RNAHELA肿瘤
- pAkt在衰老细胞中的核转位
- 2009年
- 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB,又称为Akt)/叉头转录因子(FOXO)信号通路在从酵母菌到小鼠的寿命以及衰老的调节上都起着非常重要的作用.有研究发现,血清可以激活年轻细胞、衰老细胞胞浆内的Akt,并且年轻细胞核内磷酸化Akt(pAkt)增多,而衰老细胞核内pAkt没有增多.为了研究衰老细胞膜是否发生转位受损,即pAkt能否通过衰老细胞核膜进入核内,通过激光共聚焦显微镜(CLSM)、Western印迹等实验方法,发现衰老细胞胞浆中pAkt可以进入核内,进入核内的pAkt很快被去磷酸化灭活.
- 赵磊谢步善韩秀丽陈丽婷何维清毛泽斌
- 关键词：PI3K/AKT通路AKT衰老细胞
- 自噬对过氧化氢诱导的2BS早衰细胞具有保护作用被引量：2
- 2009年
- 过氧化氢诱导的2BS应激性早衰细胞后,自噬被发现增多.自噬特异抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)阻断年轻和早衰的2BS细胞的自噬作用36 h,用共聚焦显微镜,分析转染了自噬特异标志GFP-LC3融合质粒的年轻和早衰细胞,发现细胞自噬颗粒均明显减少,且GFP-LC3染色阳性/细胞数目也大大减少,说明3-MA有效地阻断了细胞的自噬过程.分别用流式细胞术和荧光显微镜分析年轻和早衰细胞的凋亡情况,发现年轻的2BS细胞自噬阻断后凋亡未见显著变化,而早衰的细胞凋亡明显增加,且有细胞坏死.由此推断,3-AM可使过氧化氢诱导的2BS早衰细胞自噬明显减少,而凋亡被诱导增多,提示自噬对过氧化氢诱导的早衰细胞具有避免凋亡和维持存活的保护作用.
- 何维清谢步善贺东奇毛泽斌
- 关键词：过氧化氢自噬
