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人脐静脉内皮细胞饲养层促进胚胎干细胞的生长: 2008年; 目的探讨人脐静脉内皮细胞是否可作为饲养层支持胚胎干细胞（ESCs）的生长。方法分离培养人脐带内皮细胞，采用生长良好的3代内皮细胞，灭活后制备饲养层，通过观察碱性磷酸酶染色、胚胎干细胞特异性表面标志物检测、染色体核型分析和严重联合免疫缺陷小鼠（SCID）体内畸胎瘤形成实验，对在内皮细胞上的E14．1胚胎干细胞进行鉴定。结果E14．1胚胎干细胞在人脐静脉内皮细胞上传3～8代后细胞呈克隆性生长，高度表达碱性磷酸酶、SSEA-1及Oct-4。传15代后仍表现正常的二倍体核型。传20代的ESCs接种到SCID小鼠，6周后均能形成畸胎瘤。结论人脐静脉血管内皮细胞能有效地支持ESCs的生长，解决了ESCs临床应用的生物安全性问题。; 王志华何志旭米蔷汪浩文; 关键词：胚胎干细胞脐静脉内皮细胞饲养层

人脐静脉内皮细胞制备饲养层对胚胎干细胞生长的支持作用被引量：1: 2008年; 目的探讨人脐静脉内皮细胞是否可作为饲养层支持胚胎干细胞(ESC)的生长,维持ESC的未分化状态。方法取健康产妇产后的脐带,胶原酶灌注消化脐静脉血管,分离内皮细胞原代培养,并连续传代扩增细胞,Ⅷ因子相关抗原鉴定。采用生长良好的3代以上内皮细胞,经丝裂霉素C(10mg/L)灭活后制备饲养层,将E14.1 ESC接种到该饲养层上进行传代培养,观察ESC的形态学特征,测定不同传代时间的ESC碱性磷酸酶(AKP)活性、干细胞标志物Oct-4的表达,严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内畸胎瘤形成实验鉴定其全能分化特性。结果人脐静脉血管来源的内皮细胞能够在体外培养过程中生长、增殖旺盛,细胞连续传代10代以上能完整的保持正常的细胞形态学特征和生物学特性。经丝裂霉素C处理后细胞停止增殖,在24h内能较好的保持细胞活力和形态学特征,具备饲养层细胞的基本条件。E14.1 ESC在人脐静脉内皮细胞上传3～8代能较好的保持未分化状态,细胞呈克隆性生长,高度表达AKP及干细胞因子Oct-4;体内全能分化实验显示:在内皮细胞上生长6代和10代以上的E14.1 ESC接种到SCID小鼠6周后均能形成畸胎瘤,含有3个胚层的组织细胞。结论人脐静脉血管内皮细胞可作为一种来源丰富,取材方便的人源化饲养层细胞,能有效支持ESC的生长,克服了目前人ESC使用动物细胞饲养层带来的异种蛋白污染和致病微生物的危险,解决了ESC临床应用的生物安全性问题。; 何志旭王志华米蔷汪浩文; 关键词：胚胎干细胞脐静脉内皮细胞饲养层

人脐静脉血管内皮细胞饲养层的制备: 2008年; 目的探讨使用人脐静脉内皮细胞制备饲养层的方法。方法使用健康产妇剖宫产后同意遗弃的脐带,无菌状态下胶原酶消化法收集内皮细胞,进行传代培养和增殖扩增,免疫组化法进行Ⅷ因子相关抗原鉴定,分别取 P2～P5代内皮细胞经丝裂霉素 C(10μg/ml)分别处理30、60、90、120 min 后再接种 E14.1胚胎干细胞。观察 E14.1胚胎干细胞在内皮细胞上的生长情况。结果经丝裂霉素 C 处理30～60 min 后的 P2～P3代内皮细胞可以很好的支持胚胎干细胞的生长。结论人脐静脉血管内皮细胞可作为一种来源丰富、取材方便的人源化饲养层细胞,为以后临床应用打下基础。 [临床儿科杂志,2008,26(10):890-892]; 王志华何志旭汪浩文米蔷; 关键词：人脐静脉内皮细胞饲养层

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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(050820)

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