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建立高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系的研究被引量：2: 2004年; 目的:建立一个组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系。方法:(1)采用重组DNA技术将小鼠Retn基因的全长cDNA克隆到质粒pcDNA3的CMV启动子下面而获得一个能在真核细胞内组成性表达小鼠Resistin蛋白的表达载体pcDNA3-mRetn。(2)用电穿孔转染和G418筛选等方法建立能组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系。(3)诱导细胞分化为脂肪细胞,并用实时荧光RT-PCR法分析这些脂肪细胞内Retn基因mRNA的水平。结果:构建了一个能在真核细胞内表达小鼠Retn基因的表达载体;建立了一个携带有pcDNA3-mRetn载体并组成性地高表达小鼠Retn基因的细胞系。结论:成功地建立了一个组成性地高表达小鼠Retn基因细胞系,为进一步研究Retn基因的功能和小鼠Resistin蛋白的获得奠定了基础。; 李雅慧黎怀星吴丹蔡东联孙树汉; 关键词：基因表达

抵抗素在肥胖小鼠脂肪组织中的表达及其对小鼠肌肉组织葡萄糖摄取率的影响被引量：11: 2006年; 目的观察抵抗素基因(Retn基因)在肥胖小鼠脂肪组织中的表达,及其蛋白(resistin蛋白)对小鼠肌肉组织葡萄糖摄取率的影响,探讨肥胖、抵抗素与胰岛素抵抗可能的相关性。方法用高脂肪和高能量型的小鼠饲料喂养C57BL/6J小鼠,诱导其产生肥胖伴胰岛素抵抗模型,22周后测定小鼠的Lee’s指数(即体质指数,BMI)以及血糖和血浆胰岛素的浓度,然后进行葡萄糖耐量试验,并与正常小鼠作对照,以评价肥胖小鼠是否出现了胰岛素抵抗和葡萄糖耐量损伤。实时荧光定量RT-PCR比较肥胖组小鼠(n=10)与正常组小鼠(n=5)白色脂肪细胞Retn基因的表达。最后将抵抗素蛋白与小鼠骨骼肌细胞共培养,测定其对肌肉组织葡萄糖摄取率的影响。结果采用高脂饲料成功地诱导出了肥胖伴胰岛素抵抗的小鼠模型;肥胖小鼠的白色脂肪组织内Retn基因的表达显著高于正常小鼠(P<0.01);将抵抗素蛋白与小鼠肌肉组织在体外共培养,不论是否有胰岛素刺激,均能显著抑制小鼠肌肉组织对葡萄糖的摄取率(P<0.05)。结论肥胖小鼠体内Retn基因的高表达可能是导致骨骼肌对葡萄糖的摄取率降低,进而诱发胰岛素抵抗的因素之一。; 李雅慧黎怀星董诗源姜雨马莉; 关键词：抵抗素小鼠肥胖葡萄糖摄取

phP53-luc质粒的构建及其用于检测化学物质遗传毒性的初步分析: 2004年; 目的 :构建 2个分别由 p5 3基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒 ,并探讨其用于检测遗传毒性化学物质的可行性。方法 :通过 PCR扩增人 p5 3基因启动子片段 ,然后采用重组 DNA技术克隆入 p GL3- BASIC的荧光素酶报告基因的上游而获得 ph P5 3- luc表达质粒。用脂质体转染法将 ph P5 3- luc转染入 NIH3T3细胞并分别用 5 -氟尿嘧啶 (5 -FU)处理 ,最后裂解细胞用 Dual- L uciferase Reporter Assay System检测荧光素酶报告基因表达。结果 :构建了 2个分别由p5 3基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒 ,位于这 2个质粒上的荧光素酶报告基因在 NIH3T3细胞内的表达显著地受遗传毒性化学物质的诱导 ,其表达比对照的 p GL 3- BASIC载体上的荧光素酶报告基因高近 2 4 0倍。结论 :基于人 p5; 施柯黎怀星吴丹李雅慧孙树汉; 关键词：P53基因

小鼠Retn基因siRNAs的设计及其稳定表达载体的构建被引量：1: 2004年; 目的 :设计小鼠 Retn基因特异性的 si RNAs,并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些 si RNAs的表达质粒 ,以便为在体外研究 Retn基因的功能打下基础。方法 :(1 )设计并合成小鼠 Retn基因特异性的一组寡核苷酸片段 ,并克隆到 p Silencer EM 1 .0 - N eo载体 ;(2 )用电穿孔转染和 G4 1 8筛选等方法建立能稳定表达相应 si RNAs的一组 3T3- L1细胞克隆 ;(3)诱导细胞分化为脂肪细胞 ,并用 RT- PCR分析这些脂肪细胞内 Retn基因的 m RNA水平。结果 :设计并构建了 4个小鼠Retn基因特异性的 si RNAs表达质粒 ,并证明其中的 2种质粒能在脂肪细胞内稳定表达相应的 si RNAs,显著地抑制了这些脂肪细胞内 Retn基因的 m RNA水平。结论 :本研究设计并构建出的小鼠 Retn基因特异性的 si RNAs表达载体 ,所表达的 si R-NAs具有较强的 RNA干涉功能 ,为; 李雅慧黎怀星吴丹施柯蔡东联孙树汉; 关键词：小鼠 SIRNAS 基因表达脂肪细胞

Retn基因表达对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响及其机制探讨: 2006年; 目的:观察Resistin蛋白对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响并探讨其引发胰岛素抗性的可能机制。方法:(1)采用放射免疫测定法检测低、正常及高表达Retn基因的3T3-L1脂肪细胞在基础状态及胰岛素刺激下的葡萄糖摄取水平。(2)采用RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR法测定低、正常和高表达Retn基因的3T3-L1脂肪细胞中几种葡萄糖转运信号蛋白,包括胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)、丝/苏氨酸激酶2(AKT-2)、葡萄糖转运子4(GLUT-4)、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)及糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的表达。结果:(1)在基础状态及胰岛素刺激下,3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取随Retn基因表达的升高而降低。(2)PI-3K和AKT-2两个信号蛋白mRNA的表达随着细胞内Retn基因表达水平的升高而降低;GSK-3β和p38MAPK两个信号蛋白mRNA的表达随着细胞内Retn基因表达水平的升高而升高。结论:(1)Resistin蛋白可以导致脂肪细胞产生胰岛素抗性,其机制可能与胰岛素信号通路中的PI-3K和Ras通路中一些信号蛋白表达的变化有关。; 李雅慧黎怀星董诗源余超姜雨孙树汉; 关键词：胰岛素葡萄糖摄取 3T3-L1细胞

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国家自然科学基金(30370802)