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广东省肇庆市科技创新计划项目(2010E286)
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1
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陈雄毅
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磁珠分离纯化技术在实时荧光定量PCR检测HBVDNA中的应用
被引量:5
2011年
目的评价磁珠分离纯化技术(简称磁珠法)提取核酸的重复性、提取效率一致性、线性范围、灵敏度及抗干扰性,初步探讨其在实时荧光定量PCR检测HBVDNA中的应用价值。方法采用磁珠法提取HBVDNAlog值分别为4。16,5.23和7.04的质控血清进行重复性试验,HBVDNA阳性血清10倍梯度稀释的系列标本评价其提取效率一致性,HBVDNA强阳性血清作10倍系列稀释后检测其线性范围,HBVDNA标准血清与舍干扰成分(溶血、黄痘和脂血)的HBVDNA阴性血清,按4:0,3:1,2:2,1:3和0:4比例分别混合成5个不同浓度标本用于千扰试验。以提取方法为沉淀煮沸法的PCR荧光诊断试剂作对照,应用磁珠法及配套扩增试剂检测288份乙型肝炎患者血清HBVDNA含量,并比较测定结果。结果磁珠法批内和批间平均变异系数分别为3.66%和4.75%;HBVDNA含量不同的血清提取效率均在98%以上;在1.28×10^2 IU/L~1.28×10^9IU/L之阍有良好的线性关系;最低检出限为60.5IU/L;不同浓度的黄疸和脂血对扩增曲线和实验结果无明显影响;血清中血红蛋白浓度至50g/L时,HBVDNA结果相差约0.5~1.0个数量级。磁珠法和沉淀煮沸法的阳性率分别为88.19%和82.64%。当沉淀煮沸法检测结果log值处在2.699~4.000之间时,两法检测相应标本结果差异有统计学意义。结论磁珠法高效、快速和易于自动化,应用于HBVDNA检测对乙型肝炎患者的临床诊断和疗效监测将有十分重要的意义。
李成德
岑丽莲
陈金强
黄玉环
梁梅芳
梁洁玲
黄晓佳
陈雄毅
李海珠
关键词:
乙型肝炎病毒
脱氧核糖核酸
实时荧光PCR
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