浙江省中医药科学研究基金(2010ZA020)
- 作品数：4 被引量：28H指数：4
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- 相关机构：浙江中医药大学浙江省中医院更多>>
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- 右归饮对模拟人体内应力环境中成骨细胞碱性磷酸酶分泌的影响被引量：7
- 2013年
- 目的探究牵张应力作用下右归饮含药血清刺激大鼠成骨细胞后,对其碱性磷酸酶(ALP)分泌的影响,评价右归饮在模拟人体内应力环境中促进成骨细胞增殖分化的作用。方法随机将40只SD大鼠均分为右归饮组和生理盐水组,右归饮组每天按含生药量20 g/kg灌胃,生理盐水组灌以等量的生理盐水,连续灌胃1周;末次灌胃2 h后,常规麻醉,心脏取血,分离提取血清,-20℃保存2组血清;采用序列酶消化法培养成骨细胞,传至第4代将细胞等量接种为6组,每组6孔,分别标记为无血清培养基对照组、生理盐水血清组、右归饮含药血清组、无血清12%牵张形变组、生理盐水血清12%牵张形变组和右归饮含药血清12%牵张形变组,无血清培养基同步化培养24 h;将右归饮含药血清及生理盐水血清分别作用于右归饮含药血清组、右归饮含药血清12%牵张形变组和生理盐水血清组、生理盐水血清12%牵张形变组细胞,同时采用0.5 Hz频率、12%形变量的牵张力对相应无血清组细胞、右归饮血清组细胞及生理盐水血清组细胞进行力学加载。分别于12 h和24 h对各组细胞行ALP定量测定,检测各组细胞ALP活性;加力24 h后,行碱性磷酸酶染色(CAKP),显微镜镜检拍照,检测成骨细胞胞浆内CAKP颗粒数目及分布;并利用统计学软件对数据进行分析。结果 0.5 Hz、12%牵张应力条件下无血清组细胞与常规培养条件下无血清组细胞比较,前者ALP表达受抑制(P<0.05);牵张应力条件下右归饮血清培养液与生理盐水血清培养液,较常规培养条件下2种血清培养液比较,均能刺激成骨细胞ALP表达(P<0.05),且力学环境下右归饮组ALP值高于生理盐水血清组(P<0.05)。结论无血清条件下,牵张应力表现出抑制成骨细胞ALP表达现象;右归饮在模拟人体牵张应力环境下能促进成骨细胞的增殖分化。
- 汤小康应航倪哲吉樊燕华李敏童培建肖鲁伟
- 关键词：牵张应力成骨细胞碱性磷酸酶右归饮
- 骨细胞分离培养及其与成骨细胞鉴别比较的实验研究被引量：7
- 2013年
- 目的:建立比较稳定的骨细胞实验室分离培养方法,并将其部分生物学特性与实验室培养的成骨细胞进行比较研究,明确两者区别。方法:采用序列酶消化法,分别从3只3dSD乳鼠骨骼中分离培养骨细胞和成骨细胞,培养24h后进行细胞形态学观察。第1代细胞用碱性磷酸酶试剂盒采用重氮盐法(改良Kaplow氏法)染色,采用免疫细胞化学法对细胞的骨钙素(BGP)染色,测定碱性磷酸酶并计算其活性。结果:骨细胞多呈星状或树枝状,且有很多的突触;成骨细胞呈长梭形,有少量的突触。骨细胞碱性磷酸酶染色,胞浆内cAKP颗粒不明显;成骨细胞碱性磷酸酶染色,胞浆内可见众多cAKP颗粒。骨细胞BGP染色阳性明显,成骨细胞BGP染色阳性不如骨细胞明显。ALP在骨细胞中分泌较成骨细胞低,且有统计学差异。结论:实验室条件下能培养出骨细胞,该类细胞和成骨细胞有明显区别。
- 汤小康程婉许兵应航童培建肖鲁伟
- 关键词：骨细胞成骨细胞细胞分离
- 牵张应力环境下六味地黄汤含药血清对成骨细胞增殖分化影响的实验研究被引量：10
- 2013年
- 目的:探讨不同时间、不同形变量的牵张应力环境下,六味地黄汤含药血清对体外培养的新生SD大鼠成骨细胞增殖分化的作用。方法:制备血清后,将六味地黄汤含药血清及空白对照血清分别作用于2组成骨细胞24h,然后采用频率0.5Hz、形变量分别为6%和12%的牵张应力,对六味地黄汤含药血清组及空白血清对照组的成骨细胞进行力学加载,分别于12、24h行碱性磷酸酶(ALP)活性测定(检测各组碱性磷酸酶活性)和MTT检测(检测受力后各组成骨细胞增殖的情况),并利用统计学软件对相关数据进行分析。结果:①在牵张应力环境下以0.5Hz的频率牵拉成骨细胞24h,6%与12%的形变量均能刺激成骨细胞增殖与分化,其中12%的形变量作用优于6%的形变量。②六味地黄汤含药血清短时间刺激对体外培养的SD大鼠成骨细胞尚未见促进增殖分化作用。结论:牵张应力环境能促进体外培养的成骨细胞增殖和分化,短时间六味地黄汤含药血清作用对成骨细胞影响不明显。
- 程婉汤小康应航李敏
- 关键词：成骨细胞细胞增殖补肾药
- 牵张应力环境下六味地黄汤对成骨细胞增殖分化影响的实验研究
- 目的探讨不同时间、不同形变量的牵张应力环境下,六味地黄汤含药血清对体外培养的新生SD大鼠成骨细胞增殖分化的作用。方法制备血清后,将六味地黄汤含药血清及空白对照血清分别作用于两组成骨细胞24 h,然后采用0.5 hz频率、...
- 汤小康程婉童培建应航李敏
- 关键词：牵张应力六味地黄汤成骨细胞细胞增殖细胞分化
- 文献传递
- Ⅰ型与Ⅱ型胶原酶在原代成骨细胞培养中消化效果的对比研究被引量：6
- 2013年
- 目的:比较Ⅰ型与Ⅱ型胶原酶在原代成骨细胞培养中的消化效果。方法:取6只新生24 h内的SD大鼠,处死后取出颅盖骨并制成碎骨片。将碎骨片等分成2份,标记为Ⅰ组和Ⅱ组,分别用0.1%Ⅰ型胶原酶和0.1%Ⅱ型胶原酶在37℃消化2次,每次1 h。将2次消化所得到的细胞悬液混匀后进行细胞培养,并对2组细胞分别进行细胞计数,观察细胞形态、细胞增殖情况及碱性磷酸酶染色情况,并测定碱性磷酸酶含量。结果:①细胞计数。Ⅰ组细胞3次细胞计数结果分别为6.20×105个.mL-1、6.00×105个.mL-1、5.90×105个.mL-1;Ⅱ组细胞3次细胞计数结果分别为3.20×105个.mL-1、3.40×105个.mL-1、2.90×105个.mL-1。Ⅰ组细胞总量为Ⅱ组细胞总量的2倍左右。②细胞形态。2组细胞多呈梭形,表面有2～3个突触与周围细胞相联系,2组细胞形态无明显差异。③细胞增殖。Ⅰ组光密度(0.492±0.001)与Ⅱ组光密度(0.491±0.002)比较,差异无统计学意义(t=0.379,P=0.713)。④碱性磷酸酶染色。2组细胞用苏木素染色后,胞浆内均可见明显的咖啡色和红棕色颗粒。⑤碱性磷酸酶含量。Ⅰ组碱性磷酸酶含量[(2.929±0.024)金氏单位]与Ⅱ组[(2.933±0.024)金氏单位]比较,差异无统计学意义(t=0.389,P=0.706)。结论:Ⅰ型胶原酶和Ⅱ型胶原酶均适用于成骨细胞的原代消化,但在消化1 h×2次条件下用Ⅰ型胶原酶容易获得更多的成骨细胞。
- 汤小康应航李敏包洁童培建
- 关键词：成骨细胞细胞培养技术胶原酶类动物实验
