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天津市高等学校科技发展基金计划项目(20102217)
作品数:
2
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相关作者:
杨菊红
李梦辰
王静宇
张祎
韩菲
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天津医科大学代谢病医院
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SIRT1对高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞炎性反应激活的影响
被引量:2
2013年
目的分析高糖、高脂环境下胰岛微血管内皮细胞(IMVC)分泌E-选择素、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的变化,研究沉默信息调节蛋白1(SIRT1)/核因子-kβ信号途径异常在内皮细胞炎性反应激活中的作用。方法合成含绿色荧光蛋白报告基因的小鼠SIRT1基因重组质粒,以Lipofectamine2000转染IMVC。之后将IMVC分为4组:正常对照组、高糖高脂组、高糖高脂+SIRT1基因转染组、高糖高脂+基因转染对照组。高糖高脂组以33.3mmol/L葡萄糖+0.5mmol/L棕榈酸处理48h。高糖高脂+SIRT1基因转染组在高糖高脂处理前以SIRT1基因重组质粒预处理48h;高糖高脂+基因转染对照组在高糖高脂处理前以空质粒进行预处理48h。应用实时荧光定量PCR法检测SIRT1基因转染效果及各组核因子-kβ的mRNA水平,应用酶联免疫吸附法测定细胞培养上清中TNF—α、IL-1β、E-选择素的水平。结果与正常对照组相比,高糖高脂组SIRT1 mRNA表达明显下降(0.58±0.12,P〈0.01);而高糖高脂+SIRT1基因转染组的SIRT1基因表达明显升高,与高糖高脂组相比差异显著[(1.55±0.43)比(0.65±0.37),P〈0.01]。与正常对照组相比,高糖高脂组核因子-kβ mRNA(1.59±0.32,P〈0.01)、E-选择素[(48.46±1.04)比(67.12±0.57)ng/L,P〈0.01]、TNF—α[(467.46±8.98)比(621.14±11.26)ng/L,P〈0.01]、IL-1β[(63.32±1.48)比(118.43±1.40)ng/L,P〈0.01]的水平明显升高(P〈0.01)。与高糖高脂组相比,高糖高脂+SIRT1基因转染组核因子-kβ mRNA(0.95±0.31,P〈0.01)及TNF-α[(451.38±15.91)比(618.89±7.23)ng/L,P〈0.01]明显下降(P〈0.01),E-选择素、IL-1β无明显变化(P〉0.05)。结论高糖高脂环境下,IMVC存在炎性反应激活,可释放大量炎性反应细胞因子。SIRT1-核因
陈丽琴
李梦辰
孙承军
周均
李双
杨菊红
关键词:
SIRT1
炎症
细胞因子
2型糖尿病
SIRT1对高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞eNOS表达及活性的影响
被引量:1
2016年
目的分析高表达组蛋白去乙酰化酶(sirtuin 1,SIRTl)对高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞(islet endothelialcells,IEC)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达及活性的影响。方法合成含绿色荧光蛋白报告基因的小鼠SIRTl基因重组质粒,以Lipofectamine2000转染IEC后以高脂或高糖高脂处理48h。高脂组以0.5mmol/L棕榈酸处理;高脂高糖组以33.3mmol/L葡萄糖+0.5mmol/L棕榈酸处理。应用Westem印迹法检测SIRrll基因转染效果;应用实时荧光定量PCR及Western印迹法检测eNOS的基因及蛋白水平;应用硝酸还原酶法检测培养细胞上清中NO的水平。结果相对于正常对照组,高脂培养IECeNOS基因及蛋白水平无明显变化;但高脂高糖环境下,eNOS的基因及蛋白水平明显下降。高表达SIRT1不仅可升高高脂培养内皮细胞eNOS蛋白表达,且可升高高脂高糖培养内皮细胞eNOSmRNA及蛋白表达。相对于正常对照组,高脂培养使内皮细胞分泌NO水平明显下降,高糖高脂培养使内皮细胞NO水平进一步下降,高表达SIRT1不仅可升高基础状态下内皮细胞的NO水平,且可升高高脂、高脂高糖培养内皮细胞的NO水平,差异具有统计学意义。结论SIRT1可改善高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞的eNOS表达及活性,使内皮源性NO分泌增加,因而可能有助于改善胰岛B细胞功能,在糖尿病的药物开发、基因治疗及胰岛移植治疗中具有广阔的前景。
杨菊红
陈莉明
常宝成
王静宇
韩菲
杨笑云
张祎
郑妙艳
王颖
任惠珠
单春艳
关键词:
组蛋白去乙酰化酶
内皮型一氧化氮合酶
一氧化氮
胰岛B细胞
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