广东省博士启动基金(04300193)
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- 分化抑制因子1相互作用蛋白AGGF1的筛选
- 2007年
- 目的利用酵母双杂交方法,筛选成人肺组织文库中与分化抑制因子1(Id1)相互作用的蛋白。方法PCR方法扩增Id1的编码序列并定向克隆入诱饵质粒pHybLex/Zeo,构建重组诱饵质粒pHybLex/Zeo-Id1,酶切鉴定后转化入酵母株EGY48/pSH18-34,检测重组诱饵质粒有无非特异激活报告基因Leu2、LacZ作用;扩增并提取成人肺组织文库质粒,将文库质粒及重组诱饵质粒转化入酵母细胞,依次筛选Leu2+,Leu2+LacZ+克隆;设置阴性及阳性对照,重复筛选Leu2+LacZ+克隆并排除假阳性克隆,获取真阳性文库质粒,进行测序和同源性比对。结果酶切证实,重组诱饵质粒构建成功。重组诱饵质粒转化入酵母细胞后,经检测无非特异激活报告基因作用。扩增并筛选成人肺组织文库,获得198个Leu2+及19个Leu2+LacZ+克隆。经排除假阳性克隆,最终获得1个Leu2+LacZ+真阳性克隆,经测序和同源性比较证实该克隆与蛋白AGGF1高度同源(556/559,99.5%),Western blotting证实其在酵母细胞中有表达。结论利用酵母双杂交方法,通过筛选成人肺组织文库,发现Id1与AGGF1存在相互作用。
- 贾思远罗向东齐洁
- 关键词：酵母双杂交内皮细胞
