江苏省科技支撑计划项目(SBE201077545)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
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- 保护剂对胆固醇氧化酶稳定性机理的研究被引量：3
- 2013年
- 利用荧光光谱、圆二色性光谱及凝胶电泳等方法,研究液态胆固醇氧化酶失活机理。根据失活机理,选择添加两种不同保护剂提高酶稳定性,研究提高酶稳定性的机理。37℃下,添加15%甘油的液态酶稳定性较佳,45 h后酶活保留率提高58%,核黄素对酶基本无保护作用。经研究分析,甘油主要通过有效抑制分子间聚集,维持二级结构,增强酶稳定性;核黄素不能抑制酶自身聚集,对酶保护作用不明显。
- 陈亦辛瑜杨海麟张玲张玉然仝艳军王武
- 关键词：胆固醇氧化酶稳定性保护剂
- His-tag对胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中表达的影响被引量：1
- 2012年
- 为考察组氨酸标签(His-tag)对Brevibacterium sp.DGCDC-82中胆固醇氧化酶基因(Cho-A_b)在大肠杆菌中表达的影响,将PCR扩增后得到的结构基因与pET28a(+)连接,构建重组质粒pETChoA_b(不带His-tag),pETChoA_bn(His-tag位于N端)和pETChoA_bc(His-tag位于C端)并在大肠杆菌中进行表达。对重组酶进行酶活检测,结果表明His-tag位于ChoA_6的C端和N端,COD单位体积酶活由未带标签时的1.72 U/mL分别提高到4.03 U/mL和11.36 U/mL。利用软件QuantityOne对SDS-PAGE电泳条带进行灰度分析,结果显示与不带His-tag的COD相比,His-tag位于ChoA_b的C端和N端,COD表达量由8.8%增加到16.4%与72.3%。同时菌体浓度分别提高了1.2倍和3.2倍。作为纯化标签,该研究结果对His-tag用于诊断用酶COD的分离纯化可以提供一定的理论指导。
- 程晨辛瑜张玲王武杨海麟
- 关键词：组氨酸标签胆固醇氧化酶大肠杆菌
- 不同功能单体合成的谷胱甘肽分子印迹聚合物的研究被引量：3
- 2012年
- 采用分子印迹技术,以谷胱甘肽为模板分子,以丙烯酰胺、甲基丙烯酸为功能单体制备分子印迹聚合物;通过静态吸附试验,探讨了合成分子印迹聚合物时模板分子与功能单体的物质的量比、上样液pH值、吸附平衡时间、上样液浓度对聚合物吸附性能的影响;实验结果表明:以丙烯酰胺、甲基丙烯酸为功能单体制备谷胱甘肽分子印迹聚合物时,谷胱甘肽与丙烯酰胺、甲基丙烯酸的最适摩尔比分别为1∶5和1∶4,以及最适静态吸附条件为:上样液pH值分别为3.0和5.0左右;上样液浓度分别为1.50～2.00 g/L和1.00～1.50 g/L;静态吸附平衡时间为18和20 h左右.同时也探讨了分子印迹聚合物对谷胱甘肽结构类似物的吸附性能,结果表明,所合成的分子印迹聚合物对谷胱甘肽具有良好的选择性吸附能力.同时也研究了分子印迹聚合物对酵母抽提物中谷胱甘肽的吸附性能,以丙烯酰胺和甲基丙烯酸为功能单体制备的分子印迹聚合物对混合体系中谷胱甘肽的一次性提取率分别为41%和77%.分子印迹聚合物均表现出了较好的吸附特性,为分离提纯谷胱甘肽提供一种可选择的途径.
- 辛瑜仝艳军杨海麟张玲张玉然陈亦王武
- 关键词：分子印迹谷胱甘肽
