国家重点基础研究发展计划(2007CB512904) 作品数:7 被引量:17 H指数:3 相关作者: 施光峰 李宁 陈明泉 李谦 张玉杰 更多>> 相关机构: 复旦大学 上海市公共卫生临床中心 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 上海市基础研究重大(重点)项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
慢性乙型重型肝炎患者外周血单个核细胞衍生的树突状细胞表型与功能 被引量:4 2010年 目的 通过检测慢性乙型重型肝炎(CSHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)衍生的树突状细胞(MoDC)经聚肌胞苷酸刺激后表型变化及细胞因子分泌情况,了解MoDC的免疫调节功能及其在慢性乙型肝炎(CHB)重症化中的作用.方法 采集CSHB组患者37例、CHB组患者20例和健康对照者20例的外周血,分离PBMC,免疫磁珠细胞分选法获得纯化的PBMC,体外培养诱导为未成熟树突状细胞(iDC),聚肌胞苷酸刺激为成熟树突状细胞(mDC).流式细胞术检测iDC及mDC细胞表面人类白细胞DR抗原(HLA-DR)、CD83、CD86、CD80的平均荧光强度(MFI);ELISA测定聚肌胞苷酸刺激后12、24、48 h的MoDC培养上清液中IL-12、IL-6、TNF-α分泌水平.多组间比较采用单因素方差分析,并进行方差齐性检验.结果 3组iDC表面HLA-DR、CD83、CD86、CD80的MFI比较,差异无统计学意义.CSHB组患者mDC表面HLA-DR、CD83、CD86、CD80的MFI与CHB组、健康对照组比较,显著低下(F值分别为59.73、13.95、34.80和73.02,均P<0.05).聚肌胞苷酸刺激12、24、48 h时IL-12分泌量为:健康对照组>CHB组>CSHB组(F值分别为151.34、126.65、72.76,均P<0.05),其中24 h时分泌量最高,分别为(48.2±7.6)、(56.7±11.8)、(97.8±16.2)ng/L.IL-6在上述3个时间点的分泌量为:CSHB组>CHB组>健康对照组(F值分别为92.50、86.89、64.57,均P<0.05),其中12 h分泌量最高,分别为(1698.3±340.4)、(965.8±231.7)、(697.8±213.6)ng/L.TNF-α在上述3个时间点的分泌量为:CSHB组>CHB组>健康对照组(F值分别为58.66、122.36、44.73,均P<0.05),24 h表达量分别为(19 672.7±4214.7)、(9946.1±2586.5)、(6659.2±955.8)ng/L.结论 CSHB患者MoDC成熟障碍,表现为IL-12分泌低下,而IL-6及TNF-α分泌亢进,可能是加剧肝脏炎性反应致重型肝炎的重要因素. 钱志平 李宁 郑建铭 张玉杰 李谦 陈明泉 王介非 施光峰关键词:树突细胞 细胞因子类 肝脏自然杀伤细胞在慢性肝病中的作用 2011年 肝脏自然杀伤细胞(NK)是一种与外周血NK细胞不同的肝脏免疫细胞。近年来研究表明肝脏NK细胞在各种慢性肝脏疾病中起重要作用。包括对抑制病毒感染和肿瘤细胞生长,对抗肝纤维化均有益处,但同时其又刺激肝损伤和抑制肝再生(肝细胞增殖)。本文就肝脏NK细胞的特征、功能以及在各种常见慢性肝病中作用进展作一综述。 程琦 施光峰关键词:杀伤细胞 肝细胞 肝疾病 慢性乙型重型肝炎患者外周血树突状细胞核因子-κB及其激活因子的表达及意义 被引量:2 2010年 目的 探讨慢性乙型重型肝炎(CSHB)患者外周血单个核细胞衍生的树突状细胞核因子(NF)-κB、肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-6与疾病严重程度及预后的相关性.方法 采集37例CSHB患者、20例慢性乙型肝炎(CHB)患者和20例健康对照者的外周血,分为CSHB组、CHB组与对照组并分别用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,用免疫磁珠细胞分选法获得纯化的单核细胞,体外培养6 d为未成熟的树突状细胞,用聚肌胞刺激48 h为成熟的树突状细胞(mDC).用实时定量PCR检测mDC NF-κB p50表达;用酶联免疫吸附试验测定培养mDC上清液中TNF α、IL-6的分泌水平.两组间比较采用t检验,3组间比较采用One-Way ANOVA分析法,相关分析采用直线相关分析法.结果 3组研究对象mDC表达NF-κB p50,表达量CSHB组为2.63±0.94、CHB组为2.03±0.39、对照组为1.41±0.40,3组比较,F=19.01,P〈0.01,差异有统计学意义.mDC分泌TNF α,CSHB组、CHB组、对照组分别为(15 317.69±4124.90)pg/ml、(9670.29±3654.68)pg/ml、(6547.43±1027.20)pg/ml,3组比较,F=45.77,P〈0.01,差异有统计学意义; IL-6分泌量分别为(1423.78±375.14)pg/ml、(862.68±93.68)pg/ml、(567.26±167.04)pg/ml,3组比较,F=67.60,P〈0.01,差异有统计学意义.3组研究对象mDCNF-κB p50表达与TNF α、IL-6水平呈正相关(r=0.52,P〈0.01;r=0.65,P〈0.01).CSHB组mDC表达TNF α、IL-6与凝血酶原活动度呈负相关(r=-0.41,P=0.01;r=-0.40,P=0.01),与ALT、总胆红素、HBV DNA无相关性(r=-0.03,P=0.85,r=0.01,P=0.93,r=0.01,P=0.95;r=-0.09,P=0.58,r=0.16,P=0.34,r=0.09,P=0.59).CSHB 存活组与死亡组mDC表达TNF α、IL-6差异无统计学意义(t=0.42,P=0.67;t=0.76,P=0.45).结论 CSHB患者树突状细胞衍生的NF-κB及其激活产物TNF α、IL-6表达增加,可能与CSHB疾病严重程度相关. 钱志平 李宁 朱梦琪 郑建铭 张玉杰 李谦 陈明泉 王介非 施光峰关键词:细胞因子类 树突细胞 核因子-ΚB 调控慢性乙型肝炎患者Ⅰ型干扰素信号通路的microRNA的筛选及鉴定 被引量:8 2012年 目的探讨microRNA在调控慢性乙型肝炎(CHB)患者Ⅰ型干扰素(IFN)分泌紊乱中的可能作用及临床意义。方法选择20例CHB患者作为试验组,20名健康人作为对照组,分析IFN合成通路上关键分子的3′非翻译区,筛选出主要靶向I型干扰素信号通路的microRNA,并经过实时荧光定量PCR验证两组中microRNA的表达差异。结果 miR-548家族20个成员的作用靶位全部位于Ⅰ型IFN合成通路上,经定量分析比较,发现7个成员在CHB组中显著上调,其中miR-548c5p在CHB组较健康对照组上调了11.58倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-548家族成员,尤其是miR-548c5p与CHB患者Ⅰ型干扰素分泌紊乱密切相关。 李宁 陈明泉 程琦 朱梦琪 施光峰关键词:MICRORNA 慢性乙型肝炎 Construction of shRNA of Fulminant Hepatitis Related Gene mfgl2 and Investigation of Its Biological Effects in vitro 被引量:1 2007年 This study was designed to explore the RNA interference technique in inhibition of the expression of the mouse fibrinogen like protein 2(mfgl2),which has been reported to be involved in the development a variety of diseases including fulminant viral hepatitis.A plasmid named p-mfgl2shRNA,complementary to the sequence of mfgl2 was constructed,while another short hairpin RNA(shRNA) which was a mutated form of the mfgl2shRNA sequences was used as a control.A plasmid named pEGFP-mfgl2 expressing the mfgl2-EGFP fusion protein was also constructed for the screening of the effect of p-mfgl2shRNA on mfgl2 expression.By cotransfection of p-mfgl2shRNA and pEGFP-mfgl2 or pcDNA3.1-mfgl2 expression construct into CHO cells or HeLa cells,the inhibition of mfgl2 expression by mfgl2shRNA was analyzed by direct observation through fluorescent microscopy,FACS,RT-PCR and immunohistochemistry staining.The experiments showed the significant inhibitory effect of p-mfgl2shRNA on mfgl2 expression at 48h post-transfection in both CHO and Hela cell lines with the inhibitory efficiency as high as 80.1%.The study demonstrated that the construct of p-mfgl2shRNA successfully interfered with the mfgl2 expression in vitro. Dong XI Zhi-Mo WANG Sui GAO Chuan-Long ZHU Jian-Wen GUO Xiao-Ping LUO Qin Ning关键词:爆发性肝炎 SHRNA RNA干涉 Toll样受体介导的抗病毒天然免疫应答 2009年 天然免疫系统是抵御病原体的第一道防线,可保护宿主免受病毒等病原微生物的侵扰。宿主体内,树突状细胞(dendritic cell,DC)、巨噬细胞等抗原提呈细胞表达多样的模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRR)能识别微生物结构,如脂质、核酸、碳水化合物中特殊的病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMP), 李宁 施光峰关键词:天然免疫应答 抗病毒 受体介导 TOLL 病原相关分子模式 天然免疫系统 慢性乙型肝炎患者树突状细胞Toll样受体3触发后Ⅰ型干扰素的表达 被引量:5 2009年 目的了解慢性乙型肝炎(cHB)患者外周血单个核细胞来源的树突状细胞Toll样受体3(TLR3)触发后I型IFN表达情况。方法选取CHB患者26例,健康对照者18例,抽取外周血用免疫磁珠细胞分选法获得纯化的单核细胞(同时留取血浆),体外培养诱导为未成熟的树突状细胞,给予聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激,在刺激0、24h收集细胞培养上清液,用ELISA法测定血浆及细胞培养上清液中Ⅰ型IFN(IFN—α、IFN—β)表达水平。均数间两两比较采用t检验。结果在血浆中,两组Ⅰ型IFN表达水平的差异无统计学意义。刺激前(0h),CHB组单个核细胞来源的树突状细胞表达的IFN—α、IFN-β分别为(80.00±16.15)ng/L和(36.39±13.90)ng/L,对照组分别为(76.76±15.90)ng/L和(37.14±13.68)ng/L,差异均无统计学意义(t=1.651,t=0.178;均P〉0.05)。两组刺激后24h的IFN—α表达水平均比刺激前(0h)升高,但差异无统计学意义(t=1.534,t=1.243;均P〉0.05)。刺激后24h,对照组IFN—β水平为(54.57士16.80)ng/L,显著高于刺激前(Oh)的(37.14±13.68)ng/L(t=4.061,P〈0.05);但在CHB组,两者的差异无统计学意义(t=1.796,P〉0.05)。刺激后24h,两组的IFN-α表达水平差异无统计学意义(t=0.792,P〉0.05),而IFN-β水平在对照组为(54.57±16.80)ng/L,显著高于CHB组的(41.64±12.57)ng/L(t=2.921,P%0.05)。结论CHB患者单个核细胞来源的树突状细胞存在功能障碍,不能正常表达I型IFN TLR3触发后单个核细胞来源的树突状细胞表达的I型IFN以IFN-β为主。 张玉杰 施光峰 李谦 李宁 陈明泉关键词:肝炎 乙型 肝炎病毒 乙型 干扰素I型 树突细胞 受体 细胞表面