卫生部科技专项基金(2007353)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 相关作者：孙秀珍刘昀吴媛媛方萍陶爱林更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第二附属医院广州医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科技专项基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 法桐花粉主要过敏原基因Pla a1重组表达及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的:表达、纯化和鉴定法国梧桐花粉主要变应原基因Platanus acerifolia pollen allergen1(Pla a1)。方法:首先根据文献查找并在GenBank获取法国梧桐花粉主要变应原基因序列Pla a1,利用DNAStar软件进行密码子优化;合成全基因;将Pla a1与载体pET-44a连接后转入大肠杆菌Rosetta中进行诱导并优化目的蛋白表达;利用亲和层析法纯化该外源表达蛋白;应用Western blot,利用法桐花粉过敏患者血清鉴定纯化后的目的蛋白的抗原性。结果:成功构建了pET44a-Pla a1阳性质粒;获得了法桐花粉主要变应原重组蛋白Pla a1;对该重组蛋白进行了亲和层析纯化;免疫印记法表明重组蛋白具有一定的抗原性。结论:首次利用密码子优化的方法获得融合Strep TagⅡ的法桐花粉过敏原重组蛋白Pla a1,为制备高纯度变应原、重组低致敏过敏原及变应原核酸疫苗奠定基础。
- 王贵佐陶爱林孙秀珍李满祥刘昀邹泽红吴媛媛
- 关键词：密码子优化纯化
- 法国梧桐花粉变应原cDNA表达文库的构建和初步鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的构建法国梧桐花粉变应原c DNA表达文库并初步鉴定。方法利用Trizol法抽提法国梧桐花粉总RNA,经过Oligo(d T)纤维素柱纯化后分离mRNA,反转录合成ds c DNA,连接EcoRⅠ接头,末端磷酸化,XhoⅠ消化,电泳分离并凝胶回收大于500 bp以上的c DNA片段,与Uni-ZAP XR Vector连接,经过体外包装,感染宿主菌,构建c DNA文库,检测文库容量和重组率,并采用PCR方法对插入的c DNA片段大小进行分析。结果成功构建了一个文库容量为3.5×106pfu/ml,重组率为94%,平均插入片段长度约为0.7 kb的法国梧桐花粉变应原c DNA表达文库。结论所建文库容量及插入片段大小合适,适用于筛选目的 c DNA,为进一步研究法国梧桐花粉主要变应原基因并制备重组标准化法国梧桐花粉主要变应原疫苗奠定基础。
- 刘昀孙秀珍徐晶吴媛媛史红阳方萍
- 关键词：变应原CDNA表达文库
