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排序方式：

盐度和甜菜碱对鲈鱼BHMT mRNA表达的影响被引量：5: 2011年; 甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(BHMT,EC2.1.1.5)催化甜菜碱的甲基转移给高半胱氨酸(Hcy),而分别生成二甲基甘氨酸和蛋氨酸。利用RT-PCR和SMART RACE的方法从鲈鱼(Lateolabrax japonicus)肝脏中克隆了BHMT全长cDNA。该序列全长1461bp,5'端非翻译区72bp,3'端非翻译区183bp,开放阅读框1206bp,可编码一个由401个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白质相对分子质量为44.32kD,等电点为7.21。氨基酸序列分析表明,BHMT具有较高的保守性,鲈鱼BHMT与人、小鼠等9个物种的同源性为77%～93%,其中与黄鲈(Percaflavescens)同源性最高,为93%。用RT-PCR分析BHMT基因在10个组织中的表达结果表明,只有在肝、肠和肾中有较高的表达。RT-PCR和定量PCR表明,鲈鱼从盐度25的海水转入盐度12的海水后,肝、肠和肾BHMT基因表达量有增加,而将鲈鱼从盐度为25的海水转入盐度为29的海水后,肝、肠和肾的BHMT基因表达则减少。腹腔注射甜菜碱可增加鲈鱼BHMT基因在肝、肠和肾三个组织中的相对表达量。这些结果表明,甜菜碱可诱导鲈鱼BHMT基因表达,而BHMT在适应鱼类环境渗透压变化中起重要作用。; 钱云霞宋娟娟; 关键词：鲈鱼克隆盐度

大黄鱼PPAR β全长cDNA的克隆和组织表达被引量：3: 2010年; 利用RT-PCR和SMART RACE的方法从大黄鱼肝脏中克隆了PPARβ全长cDNA。该序列长3390bp,5′端非翻译区146bp,3′端非翻译区1711bp,开放阅读框1533bp,可编码一个由510个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白质分子量为57.2kDa、等电点为6.46。氨基酸序列分析表明,PPARβ基因具有较高的保守性,大黄鱼PPARβ与花鲈、金头鲷、欧鲽、大西洋鲑、红鳍东方鲀、人、黑猩猩、牛、兔及小鼠等10个物种的同源性为72%~91%,其中与花鲈同源性最高,为91%。用RT-PCR法检测PPARβ基因的组织表达,结果表明该基因在大黄鱼肌肉、眼、脾、肾、肝、鳃、心、肠和脑等9个组织中均有表达,其中肝脏组织表达量最大,肌肉最少。; 钱伦钱云霞童丽娟; 关键词：大黄鱼克隆

鲈PPARγ基因的克隆、组织表达及其抗体制备被引量：6: 2010年; 根据GenBank上其他物种的PPARγ基因序列设计兼并引物,从鲈肝脏cDNA中扩增得到鲈PPARγ基因cDNA序列1588bp,分析表明该基因的开放阅读框为1569bp,编码522个氨基酸,理论等电点6.06,分子量59.02ku。将鲈PPARγ氨基酸序列比对后发现与欧洲鲈同源性最高,为93.1%;与金头鲷的同源性为92.3%,与人同源性也达到为61.8%。用RT-PCR分析该基因组织表达模式,结果表明,鲈PPARγ主要分布于肝脏、鳃和脂肪组织。将鲈PPARγ开放阅读框1569bp序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)构成pET-28a-PPARγ1569重组体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),以终浓度1mmol/L的IPTG对其进行诱导表达4h,SDS-PAGE电泳分析表明,pET-28a-PPARγ1569菌株在66ku处有1条特异的蛋白带,Western-blotting检测表明该蛋白为鲈PPARγ融合蛋白。用镍离子亲和柱纯化的鲈PPARγ融合蛋白免疫小鼠得到其多克隆抗体。用间接ELISA法检测鲈PPARγ抗体的抗体效价约为1∶16000。实验结果为进一步研究鲈PPARγ蛋白的生物学特性及功能奠定了基础。; 钱云霞杨孙孝梁洪钱伦钱凯先; 关键词：抗体

大黄鱼CYP1A基因cDNA的克隆与表达分析被引量：1: 2011年; 由于外源化合物能诱导鱼类CYP1A(P4501A)的表达,因而它广泛被用作评价水环境污染生物标记物。利用RT-PCR结合RACE技术从大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏克隆了CYP1A基因全长cDNA序列。经分析,该cDNA的5'末端有175 bp的非翻译区,开放阅读框为1 566 bp,编码521个氨基酸和一个终止密码子,3'末端有857 bp的非翻译区,3'非翻译区有一个多聚腺苷酸信号及两个与mRNA的快速降解有关的AUUUA序列。推测大黄鱼CYP1A的氨基酸序列和欧洲鲈鱼的相似度最高达89.6%。用RT-PCR检测大黄鱼CYP1A的表达特征发现,在所检测的9个组织中均有表达,以肝脏、消化道、脾脏和肾脏的表达量较高。; 宋娟娟钱伦钱云霞; 关键词：大黄鱼克隆 RACE

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宁波市自然科学基金(2006A610088)