安徽省自然科学基金(090413136)
- 作品数：10 被引量：46H指数：4
- 相关作者：邓松华潘卫曹洁陈秋莉王锦红更多>>
- 相关机构：安徽医科大学第二军医大学安徽省合肥市妇幼保健院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人巨细胞病毒先天性感染实验室诊断的研究进展被引量：22
- 2011年
- 人巨细胞病毒(HCMV)是引起先天性及围生期感染的重要病原微生物之一,HCMV活动性感染的孕妇可通过胎盘或产道感染胎儿和新生儿,导致胎儿宫内发育迟缓及新生儿小头畸形、智力低下、黄疸、肝脾肿大、听力或视力丧失等多脏器、多系统不可逆性损害。由于HCMV感染缺乏特异的临床症状和体征,且大多数呈隐性感染,故确诊HCMV感染主要依靠实验室检测。现对HCMV感染主要的实验室诊断方法予以综述,分析其优缺点,试图寻找更适合于临床上HCMV先天性感染的快速特异性检测方法,提高新生儿HC-MV先天性感染的诊断率。
- 金艳邓松华王明丽
- 产前筛查中位数和体重修正结果的临床意义被引量：5
- 2011年
- 目的探索合肥妇幼保健院产前筛查实验室中位数修正和体重修正结果。方法在合肥市妇幼保健院参加产前筛查且孕周为14~20＋6周的孕妇。选择甲胎蛋白、游离人绒毛膜促性腺激素作为血清标志物,采用时间分辨技术,统计中位数和体重中位数并分析结果。结果 2T-Risk软件计算阳性率为2.76%,换用中位数后筛查阳性率为5.03%,体重修正后筛查阳性率为5.47%,经验证,修正后确诊标本均能检出。结论建议每个实验室建立中位数和体重方程,提高筛查效率。
- 许晓红邓松华
- 关键词：唐氏综合征遗传筛查体重
- 构建SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库
- 2010年
- 目的构建免疫球蛋白结合分子金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)和链球菌蛋白G(SPG)单结构域随机组合噬菌体展示文库,为研究其分子功能与结构的关系奠定基础。方法 PCR扩增制备SPA的A、B、C、D、E结构域和SPG的B2结构域核苷酸片段,在片段两端通过引物引入XbaⅠ酶切位点和保护碱基,3'端引入3个氨基酸大小的随机连接肽核苷酸序列,各结构域核苷酸片段经XbaⅠ酶消化,在T4连接酶作用下随机相互连接并克隆于噬菌体展示载体pCANT-AB5S,克隆产物转化E.coliDH5α,提取原代库质粒转化E.coliTG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建成SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库。结果该噬菌体展示文库库容量为1.87×107cfu,滴度为1.3×1014TU/ml,文库的片段插入率近100%,其中插入多个结构域的阳性克隆占21.7%,序列分析显示各结构域之间的连接和随机连接肽序列具有随机性。结论成功地构建了SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库,该文库在库容量、多样性和随机性方面满足体外分子进化研究的要求。
- 黄德圣潘卫曹洁庞强唐萍廖文婷李存枚陈秋莉邓松华
- 基孔肯雅病毒包膜蛋白E2的全基因合成及原核表达被引量：3
- 2012年
- 目的通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1～404 aa)及其跨膜疏水区(351～378 aa)缺失突变体E2(1～350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响。方法利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析,根据GenBank数据库中CHIKV-E2氨基酸序列获得其对应的基因序列。结合重叠延伸PCR(OE-PCR)原理设计用于全基因合成的核酸引物对CHIKV-E2全长基因(404 aa)进行体外合成,构建全长E2蛋白及其缺失突变体原核表达质粒,将序列正确的两种重组质粒分别转至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组质粒的表达情况。结果 OE-PCR法成功合成了大小为1 212 bp的编码CHIKV-E2(1～404 aa)蛋白的全长基因,构建了全长E2蛋白及其缺失突变体重组表达质粒pET21b-E2(1～404)和pET21b-E2(1～350),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示缺失突变体pET21b-E2(1～350)融合蛋白表达量较pET21b-E2(1～404)有明显提高。结论 E2蛋白跨膜疏水区(351～378 aa)对该蛋白的原核表达具有重要影响,缺失该疏水区的突变体在大肠杆菌中表达量比全长E2蛋白表达量明显提高。
- 章萍萍潘卫曹洁陈秋莉王锦红张华群葛宜兵祁培培刘超邓松华
- 关键词：缺失突变体原核表达
- 小鼠白介素17基因的克隆、表达及其活性鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的通过基因工程技术获得有活性的重组小鼠白介素17(rmIL-17)蛋白,为研究IL-17的生物学作用及其作用机制提供基础。方法用RT-PCR技术得到小鼠IL-17编码基因,将其克隆入原核表达载体pET32a,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过亲和层析得到纯化的rmIL-17蛋白,免疫家兔,制备多抗,Westernblot和酶联免疫吸附实验鉴定该蛋白免疫原性;用该蛋白进行体外细胞刺激实验、体内中性粒细胞招募实验鉴定蛋白的生物学活性。结果成功构建了重组质粒pET32a-mIL17并在大肠杆菌中表达。过柱得到纯化的rmIL-17蛋白,Westernblot和酶联免疫吸附实验证实其具有良好的免疫原性;体外细胞刺激实验显示该蛋白可刺激小鼠3T3成纤维细胞产生白介素6(IL-6)且具有量效关系;体内细胞招募实验显示纯化的rmIL-17蛋白具有招募中性粒细胞的作用。结论小鼠IL-17基因在体外成功表达,且表达的重组蛋白具有明显的生物学活性。
- 王金萍王萍吴昊刘淼张玉侠陈伟沈际佳邓松华
- 关键词：白细胞介素17基因表达
- 静脉转位在撕脱性断指再植术中的应用被引量：2
- 2010年
- 目的探讨静脉血管转位在撕脱性断指再植中的应用及临床疗效。方法对近端静脉血管缺如的11例断指采用健指背侧静脉血管转位完成血液回流。结果 11例再植手指全部成活,患指恢复了良好外观、功能、感觉。根据中华医学会手外科学会断指再植功能评定试用标准,优9例,良2例。结论应用健指背侧静脉血管转位完成患指血液回流是治疗手指离断伤特别是患指近端静脉撕脱缺如的理想方法。
- 马传亮彭俊才陈贻玲邓松华
- 关键词：再植术显微外科手术
- 荧光定量PCR法和巢式PCR法检测新生儿脐血人巨细胞病毒DNA的比较被引量：6
- 2011年
- 目的比较荧光定量PCR法和巢式PCR法在检测新生儿人巨细胞病毒(HCMV)先天性感染中的灵敏度,为HC-MV先天性感染的快速特异性检测提供实验依据。方法随机收集36例脐血标本,分离单核细胞,提取总DNA,进行巢式PCR和荧光定量PCR检测。结果巢式PCR法检测HCMV糖蛋白(gB)DNA的阳性率为22.2%(7/36),荧光定量PCR法检测HCMV DNA的阳性率为30.6%(11/36),两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。两种检测方法的一致率为88.9%。结论荧光定量PCR法检测脐血HCMVDNA的灵敏性高于巢式PCR法,更适用于临床新生儿HC-MV先天性感染的检测。
- 金艳王明丽赵俊甘霖刘辉邓松华
- 关键词：脐血
- 噬菌体展示HIV-1 Tat38-61碱性区51和55位随机突变体文库的构建被引量：4
- 2011年
- 为了构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库,进一步研究HIV-1 Tat38-61表位的分子进化筛选,采用含随机核苷酸序列的引物,通过Overlap PCR的方法获得51和55位氨基酸随机突变的全长Tat编码序列,再以此为模板PCR扩增出两端含有Xba I识别序列的Tat38-61突变体片段HIV-1 Tat38-61(51N/55N),克隆至噬菌体展示载体pCANTAB5S上,转化大肠杆菌TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库。结果显示文库的库容量为5.0×106,滴度为2.65×1012 TU/mL,阳性克隆率为56.50%;序列分析显示文库中51、55位核苷酸与氨基酸均呈随机性分布,达到了对文库进行分子进化筛选的要求,为获得可用作疫苗候选物的新型Tat突变体奠定基础。
- 葛宜兵杨旭芳杜哲明庞强曹洁陈秋莉王锦红张华群廖文婷祁培培刘超章萍萍邓松华潘卫
- 关键词：HIV-1TAT随机突变噬菌体展示
- 体内外连续筛选建立人前列腺癌高转移细胞亚系及其生物学特性
- 2009年
- 目的建立人前列腺癌小鼠转移模型,筛选前列腺癌高转移细胞亚系。方法采用DU145细胞悬液原位注射法接种BNX小鼠,建立前列腺癌小鼠COI模型,取肺转移灶体外培养并采用侵袭小室体外筛选高侵袭性细胞,扩增后进行原位注射,如此将肺转移灶癌细胞在小鼠体传代2次,筛选高转移细胞亚系。结果(1)原位细胞悬液注射法接种10只小鼠均成瘤,并都伴有肠系膜、腹股沟淋巴结,其中3只发现肺转移。(2)获得高转移前列腺癌细胞亚系DU145-M3,其侵袭能力强,肿瘤转移相关基因MAPK4和TIPM-2低表达,MMP-2高表达。结论COI法是有效的前列腺癌转移模型制作方法;体内外连续筛选可获得高转移细胞亚系。
- 张玉侠朱秀王金萍
- 关键词：前列腺肿瘤疾病模型
- 用兔IgG筛选噬菌体展示免疫球蛋白结合分子组合文库被引量：1
- 2009年
- 目的应用噬菌体展示免疫球蛋白(Ig)结合分子组合文库,进化筛选获得与兔IgG结合的代表性序列,测定其与兔IgG及人IgG结合活性的差异,以判断筛选获得的代表性序列对不同种属Ig的结合是否存在倾向性的差别。方法应用包含Ig效应子结合蛋白Protein A的D结构域(PA-D)、A结构域(PA-A),Protein G的B2结构域(PG-B2)及protein L的B3结构域(PL-B3)的单结构域随机组合文库,以兔IgG对该组合文库进行进化筛选,序列比较分析筛选获得的代表性序列与人IgG进化筛选文库所得代表性序列的异同性;用ELISA和竞争抑制试验分别测定阳性噬菌体克隆与兔IgG及人IgG的结合活性。结果以兔IgG经4轮分子进化筛选,获得在天然细菌蛋白中不存在的新的结构形式PA-A—PA-A,该结果与人IgG进化筛选所得代表性序列PA-A—PG有显著差异;兔IgG筛选序列PA-A—PA-A和人IgG筛选序列PA-A—PG分别显示出与兔Ig和人Ig结合力更强的特性。结论该研究首次应用噬菌体展示技术研究不同种属抗体效应子构象的不同,证实兔IgG和人IgG两者效应子构象之间确实存在差异。这一结论有助于阐明抗体效应子构象在不同种属之间的差异性。
- 唐萍潘卫曹洁廖文婷陈秋莉黄德圣庞强王锦红邓松华
- 关键词：免疫球蛋白类免疫球蛋白G
