国家自然科学基金(30671079)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 过表达ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1保护小鼠胚胎成纤维细胞避免凋亡被引量：1
- 2011年
- 由于膳食原因,人体摄入ω-6PUFAs/ω-3PUFAs比例过高,脂类代谢严重失衡.鉴于ω-3PUFAs获取困难而且人体无催化ω-6PUFAs向ω-3PUFAs转化的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,本研究体外扩增来源于秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因(fat-l)cDNA,构建了真核表达载体pEGFPC1-fat-1,将该基因转染入小鼠胚胎成纤维细胞;激发荧光与RT-PCR方法检测转染pEGFPC1-fat-1细胞表达该基因,气相色谱分析显示该转染细胞中ω-6PUFAs/ω-3PUFAs的比例降低;细胞抑制率实验显示转染细胞的MTT吸光值升高(P<0.05);双染法流式细胞仪分析转染细胞凋亡降低,结果表明fat-1基因即使在高浓度ω-6PUFAs的细胞毒作用下,依然能够发挥将ω-6PUFAs脱氢转化为与ω-3PUFAs的生理功能,抑制3T3细胞凋亡,促进细胞生长增殖,实现了较强的细胞保护功能.
- 李芳芳葛银林薛美兰张金玉李泉单虎
- 关键词：胚胎成纤维细胞
- 转基因小鼠模型的载体构建和在人肝癌HepG2细胞中的表达
- 2009年
- 目的:构建转基因小鼠模型的载体并检测在人肝癌HepG2中的表达效果。方法:将n-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1插入到真核表达载体(pcDNA3.1(+)myc-His A)中,构建重组表达载体pcDNA3.1(+)myc-His A-fat-1,用脂质体介导的方法转染到人肝癌HepG2细胞中,RT-PCR检测fat-1基因的表达,MTT法分析fat-1基因对HepG2细胞增殖的影响,气相色谱分析检测fat-1基因对HepG2细胞n-6/n-3多聚不饱和脂肪酸(PUFAs)比例的影响。结果:成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)myc-HisA-fat-1,并能在HepG2细胞内有效异源表达,48h后可检测到fat-1mRMA的条带。与对照细胞相比,fat-1基因有效地抑制了人肝癌细胞HepG2细胞的增殖(70%,p<0.01),降低了n-6/n-3PUFAs比例。结论:pcDNA3.1(+)myc-His A-fat-1重组载体构建成功并能在肝癌细胞中有效的表达,可以作为下一步转基因小鼠的合适载体。
- 秦伟伟葛银林李芳芳薛美兰徐宏伟
- 关键词：多不饱和脂肪酸基因表达
- n-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1在人肺癌细胞H460内的表达被引量：2
- 2011年
- n-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1来自于秀丽线虫(C.elegans)。为检测该基因在人肺癌细胞H460中的表达效果,本项研究构建了哺乳动物表达载体pcDNA3.1(+)myc-HisA-fat-1,以Xfet polymer介导法转染到人肺癌细胞H460中,RT-PCR检测到有效的异源基因表达,MTT法证实基因表达能有效地抑制肺癌细胞的增殖率(P<0.05),气相色谱分析基因表达前后细胞中n-6/n-3多不饱和脂肪酸比例降低(P<0.05),为将该基因用于癌症的转基因治疗奠定了基础。
- 李芳芳葛银林李艳君单虎
- 关键词：基因表达
