目的观察高表达的衰老标记蛋白30(SMP30)对过氧化氢(H_2O_2)所致的正常人皮肤成纤维细胞(NHSF)衰老表型的影响。方法实验分为转染H_2O_2处理组(NHSF+SMP30+H_2O_2组)、转空载体H_2O_2处理组(NHSF+空载体+H_2O_2组)和转空载体组(NHSF+空载体组)。NHSF细胞分别转染人SMP30 c DNA或空载体pc DNA3.1(分别命名为NHSF+SMP30、NHSF+空载体),然后150μmol·L-1H_2O_2处理2 h。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法分析SMP30的表达,显微镜观察细胞形态,并检测与衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)、细胞活性氧(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果人SMP30 c DNA明显上调了NHSF中SMP30的表达。NHSF+空载体+H_2O_2组SMP30 mRNA和蛋白表达水平明显低于NHSF+空载体组(P<0.05);NHSF+SMP30+H_2O_2组SMP30 mRNA和蛋白表达水平高于NHSF+空载体+H_2O_2组(P<0.05)。NHSF+空载体+H_2O_2组较NHSF+空载体组SA-β-gal染色率明显增高(P<0.05);NHSF+SMP30+H_2O_2组较NHSF+空载体+H_2O_2组SA-β-gal染色率明显下降(P<0.05)。NHSF+空载体+H_2O_2组较NHSF+空载体组ROS活性明显增高(P<0.05),而SOD水平明显降低(P<0.05);NHSF+SMP30+H_2O_2组较NHSF+空载体+H_2O_2组ROS活性明显下降,而SOD水平明显上升(P<0.05)。结论高表达的SMP30能够抑制细胞SA-β-gal和ROS的表达,同时上调SOD的活性。
目的观察5-氨基酮戊酸-光动力疗法(ALA-PDT)对Ha Ca T细胞增殖活性、细胞凋亡、原卟啉IX(Pp IX)及活性氧(ROS)的影响。方法体外培养Ha Ca T细胞,分成4组,对照组不加任何刺激因素,ALA组单用1 mmol·L-1ALA溶液加入Ha Ca T细胞培养基中避光孵育3 h,PDT组单用红光治疗仪照射Ha Ca T细胞培养液30 min,ALA-PDT组在加入1 mmol·L-1ALA溶液于Ha Ca T细胞培养基中避光孵育3 h后,用红光治疗仪照射上述培养液30 min。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,荧光显微镜观察Pp IX的含量以及ROS检测试剂盒检测细胞内ROS的水平。结果对照组、ALA组、PDT组、ALA-PDT组细胞增殖活性分别为0.892±0.009、0.879±0.024、0.722±0.013、0.534±0.029;细胞凋亡率分别为(2.702±0.019)%、(2.697±0.031)%、(6.283±0.282)%、(32.601±1.897)%;ROS活性分别为(100.000±0.000)%、(101.333±3.786)%、(112.000±3.606)%、(135.000±16.000)%;PDT组细胞增殖活性、细胞凋亡率及ROS活性与对照组和ALA组比较差异有统计学意义(P<0.05);ALA-PDT组该3个指标与对照组、ALA组和PDT组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组和ALA组细胞内Pp IX的荧光比率分别为(4.000±1.000)%、(32.000±2.646)%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ALA诱导Ha Ca T细胞内Pp IX的累积,Pp IX在PDT作用下产生大量ROS,继而抑制Ha Ca T细胞增殖,导致细胞凋亡。
