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广东汉族人群HLA单倍型遗传中基因重组的研究被引量：2: 2010年; 目的分析广东汉族人群人类白细胞抗原（HLA）Ⅰ、Ⅱ经典5位点A、Cw、B、DRB1及DQB1的连锁单倍型及单倍型遗传中基因重组事件.方法采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针（PCR-SSO）法及聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）法,分别对2000年8月至2009年12月深圳市血液中心进行HLA配型的198个广东汉族家系共939名个体的外周血样本进行HLA-A、B、DRB1位点及HLA-Cw、DQB1位点的低分辨基因分型,再通过遗传家系分析确定HLA基因重组相关位点对其中发生基因交换重组的52名家系成员的样本进一步采用基因测序分型（SBT）技术进行序列分析,以判断重组交换是否发生在某基因座位上.结果 198个广东汉族家系543名子一代个体中,发现有9名个体HLA单倍型基因座位发生了交换重组,频率为1.657%.3例为A/Cw座位间的交换,6例为B/DRB1座位间的交换.其中4例重组事件发生在广东汉族人群最常见的单倍型A＊3303-Cw＊0302-B＊5801-DRB1＊0301-DQB1＊0201上.在9例重组事件中有5例来自母系染色体交换,4例来自父系染色体交换 3例表现为A/Cw座位间交换的个体均为女性,6例表现为B/DRB1座位间交换的个体中5例为男性、1例为女性.结论 HLA连锁单倍型遗传过程中的基因重组主要见于A/Cw座位间及B/DRB1座位间,且基因重组的发生具有单倍型特异性及性别特异性.; 邹红岩金士正李桢高素青王大明徐筠娉何柳媚魏天莉程良红邓志辉; 关键词：HLA抗原单倍型

HLA-Cw基因全长序列分子克隆及测序方法的建立被引量：11: 2009年; 目的建立可靠的HLA-Cw基因全长序列的分子克隆和测序技术。方法设计合成HLA-Cw基因全长序列PCR引物和探索PCR反应体系，采用长距离PCR技术，扩增HLA-Cw基因非翻译区（untranslatedregion，5′-UTR）区、8个外显子、7个内含子和3′-UTR区，全长约4．5kb。PCR产物纯化后进行分子克隆，筛选阳性克隆，提取质粒DNA，采用自行设计的测序引物进行全长双向测序。12份已经AlleleSEQRHI。A-Cw测序分型试剂盒进行PCR产物直接测序、基因型已知的样本，分别用TaKaRaLATaq酶和StratagenePfuTaqDNA聚合酶进行HI，A-Cw基因全长扩增，以及PCR产物分子克隆和序列测定，克隆测序结果分别与PCR产物直接测序结果进行对比分析。结果PCR扩增获得了特异性目的片段，测序获得了HLA-Cw基因-962～3576位碱基全长序列。克隆测序结果的对比表明，Pfu酶保真性高于LATaq酶。比较本文测定的Cw＊010201与Cw＊07020101等位基因序列，在5′上游-962～-284位碱基区域存在11个单核苷酸多态（single nucleotide polymorphisms，SNPs）和2个插入（或）缺失多态性位点；3′-UTR下游3067～3576位碱基区域存在11个SNPs和1个插入（或）缺失。结论建立了HLA—Cw基因全长序列分子克隆及测序方法，在HLA—Cw基因全长序列分子多态性及表达调控等研究领域，具有广泛应用前景。; 邓志辉徐筠娉高素青李大成喻琼苏宇清曾健强杨宝成; 关键词：人类白细胞抗原克隆测序

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广东省科技计划工业攻关项目(20088030301277)

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