湖北省自然科学基金(2008CBB099)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- 斑点叉尾鮰病毒多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定被引量：1
- 2011年
- 利用斑点叉尾鮰卵巢细胞增殖斑点叉尾鮰病毒,然后将经过超速离心纯化的病毒免疫4周龄BABL/C雌鼠。每2周免疫1次,第4次免疫2周后,经眼眶采血,分离血清,通过酶联免疫吸附试验检测其抗体效价,并利用间接免疫荧光试验和与病毒孵育试验检测所制备多克隆抗体的生物活性。结果表明,制备的多克隆抗体ELISA效价为1∶25 600,间接免疫荧光试验证明该多克隆抗体特异性良好,同时与病毒的孵育试验证明该多克隆抗体具备中和活性,能够有效阻断斑点叉尾鮰病毒对细胞的感染。
- 吴兵罗宇良王敏曹胜波王卫民陈龙黄锋涛刘学芹
- 关键词：多克隆抗体效价生物活性
- 斑点叉尾病毒囊膜蛋白ORF6在昆虫细胞中的表达被引量：4
- 2010年
- 为构建基于杆状病毒表达系统的CCV新型亚单位疫苗,将CCV的囊膜蛋白基因ORF6克隆至杆状病毒转座载体pFastBacTM 1质粒中,并将阳性重组转座质粒转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,获得重组子rBacmid-ORF6。在脂质体介导下将该重组子转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒AC-ORF6。AC-ORF6感染的sf9昆虫细胞,经超薄切片电镜观察,可见重组杆状病毒呈多粒包埋,经间接免疫荧光、Western-blotting检测,CCV的ORF6蛋白可以在感染了AC-ORF6的sf9细胞中表达。研究表明,获得了插入ORF6基因的重组杆状病毒,并且该基因可以在重组杆状病毒介导下在昆虫细胞中表达,从而为基于CCV ORF6的杆状病毒亚单位疫苗研究奠定了基础。
- 黄锋涛熊海林曹胜波熊传喜王敏王卫民吴兵刘玉林刘学芹
- 关键词：杆状病毒昆虫细胞
- 斑点叉尾鮰病毒“自杀性”DNA疫苗的构建及其体外表达检测被引量：2
- 2011年
- 根据CCVORF6基因序列,设计合适的引物,扩增ORF6基因,分别将其克隆到"自杀性"DNA疫苗载体pS-FV与常规DNA疫苗载体pcDNA3.1(+)中,转化感受态细胞DH5α后提取质粒,构建斑点叉尾鮰(Ictalurus punc-tatus)"自杀性"DNA疫苗ps-ORF6与常规DNA疫苗pcd-ORF6,利用转化后的大肠杆菌菌液为模板进行PCR扩增、提取质粒酶切鉴定以及序列测定等方法证实重组质粒构建正确。将重组质粒转染人胚肾细胞(293T),间接免疫荧光试验表明ORF6均获得表达,但"自杀性"DNA疫苗的表达效果不如常规DNA疫苗,该研究为这2种疫苗进一步的鱼体试验奠定了基础。
- 熊海林尹殿卯王卫民王敏李莉娟刘玉林刘学芹吴兵黄锋涛
- 斑点叉尾鮰病毒对几种淡水鱼类细胞系感染性的初步研究被引量：3
- 2009年
- 研究斑点叉尾鮰病毒(Channel Catfish Virus,CCV)是否感染斑点叉尾鮰以外的鱼类,以评价CCV对我国珍稀、重要经济鱼类的潜在危害性。选择大眼鲑、草鱼、鲤、白鲟的细胞系为材料,从细胞病变、病毒增殖滴度等方面验证CCV对这些细胞系的感染性。实验表明,CCV对上述细胞系均可以感染,但细胞病变出现时间、病变程度和增殖滴度各有差异。其中,草鱼鳍条细胞系(GCF)、鲤上皮瘤细胞系(EPC)对CCV高度敏感。CCV在EPC中的增殖滴度与在斑点叉尾鮰卵巢细胞系(CCO)中相当,在GCF中的增殖滴度甚至高于CCO。研究结果表明,CCV除了感染CCO以外,还可以感染其它多种鱼类的细胞系,说明CCV病毒可能对斑点叉尾鮰以外的淡水鱼类具有感染性和潜在的危害性。
- 刘学芹王敏王卫民Yuanan Lu
- 关键词：感染性细胞系
