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戊型肝炎病毒感染孕妇的致病机制研究被引量：1: 2015年; 戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是引起急性肝炎的主要原因之一。戊型肝炎通常是一种自限型疾病,但对孕妇和胎儿存在十分严重的危害,妊娠晚期孕妇感染HEV后死亡率高达25%,并极易造成胎儿早产、流产或死胎。目前HEV感染导致孕妇较高死亡率的原因还不清楚,本文将对HEV感染孕妇的流行病学及可能的致病机制作一综述。; 毕艳红杨臣臣崔成成井申荣黄芬; 关键词：戊型肝炎病毒孕妇胎儿高死亡率

锌指抗病毒蛋白基因真核表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的表达: 2013年; 目的构建锌指抗病毒蛋白(zinc finger antiviral protein,ZAP)基因真核表达质粒,并在人肝癌细胞系HepG2细胞中表达。方法化学合成含第4个CCCH锌指基序的ZAP基因片段,经PCR扩增后,插入pcDNA3.1(+)载体,并在ZAP下游插入报告基因EGFP,构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-ZAP/EGFP。在脂质体Genfectin介导下将重组表达质粒转染HepG2细胞,转染后24 h,荧光显微镜观察EGFP的表达;转染后48 h,RT-PCR法检测转染细胞中ZAP基因和内参GAPDH基因mRNA的转录。结果重组表达质粒pcDNA3.1(+)-ZAP/EGFP经双酶切和测序证实构建正确;转染后24 h,pcDNA3.1(+)-ZAP/EGFP质粒转染的HepG2细胞在荧光显微镜蓝色激发光下可见胞质内有较强的黄绿色荧光;转染后48 h,pcDNA3.1(+)-ZAP/EGFP质粒转染的HepG2细胞可扩增出288 bp的ZAP基因条带和100 bp的内参GAPDH基因条带。结论成功构建了含第4个CCCH锌指基序的ZAP基因真核表达质粒,并在HepG2细胞中获得表达,为下一步深入研究ZAP对肝炎病毒是否具有抗病毒作用以及利用ZAP作为抗病毒治疗的一种新手段奠定了基础。; 赵显晨黄芬井申荣曾韦锟; 关键词：HEPG2细胞基因表达

天然免疫抗病毒因子RIG-I过表达对HEV复制的抑制作用被引量：2: 2019年; 视黄酸诱导基因I(retinoic acid inducible gene-I, RIG-I)在宿主天然免疫过程中具有抑制多种RNA病毒复制的作用.为了探究HEV感染过程中宿主天然免疫抗病毒因子RIG-I是否能够抑制HEV的复制,本文采用A549细胞及Huh7.5.1细胞接种HEV;瞬时转染RIG-I真核表达质粒;通过荧光显微镜、Real-time qPCR及Western-blot方法,分析细胞中RIG-I、IRF3和I型干扰素等细胞因子及HEV表达水平变化.结果显示细胞感染HEV后,RIG-I的表达水平显著上升;当细胞中RIG-I过表达时,可显著抑制HEV的复制;RIG-I可上调IRF3的表达,进而刺激I型干扰素的产生进行抗HEV作用.本研究明确了RIG-I过表达具有抑制HEV复制的作用,为今后进一步探究宿主天然免疫防御HEV感染提供了依据.; 曹文涛郝先辉赵勇琴司徒健文何秋霞纪汉斌杨伟敏黄芬; 关键词：天然免疫 RIG-I

病毒感染对男性生殖系统的影响: 2018年; 男性生殖系统受损是影响生殖健康的主要因素。病原体或病毒感染男性生殖系统后,会造成生殖系统不同程度的损伤。目前,感染男性生殖系统的病毒,以及病毒感染后对生殖系统的影响还没有系统的文献报道。本文将对人类免疫缺陷病毒（HIV）,寨卡病毒（ZIKV）,人类巨细胞病毒（HCMV）,人乳头瘤病毒（HPV）,肝炎病毒（HV）等病毒感染后对生殖系统的损伤情况进行综述。; 司徒健文龙飞燕孙鹥黄芬禹文海; 关键词：病毒男性生殖系统生殖系统损伤

人星状病毒非结构蛋白基因nsP1a/1真核表达载体构建及其在293T细胞中的表达: 2015年; 目的将人星状病毒非结构蛋白ns P1a/1基因连接到真核表达载体上,转染人胚肾上皮细胞48 h后检测其表达。方法设计特异性引物PCR扩增人星状病毒非结构蛋白ns P1a/1片段,分别插入真核表达载体pc DNA3.1(+)和p EGFP-N2载体,构建重组表达质粒pc DNA3.1(+)-ns P1a/1-His和p EGFP-N2-ns P1a/1。在转染试剂PEI的介导下将重组表达质粒分别转染293T细胞,转染48 h后分别在荧光显微镜下观察EGFP的表达以及通过Western blot检测ns P1a/1基因的表达。结果重组表达质粒pc DNA3.1(+)-ns P1a/1-His和p EGFP-N2-ns P1a/1构建成功;转染p EGFP-N2-ns P1a/1后48 h能够在荧光显微镜蓝色激发光下观察到较强的黄绿色荧光;转染pc DNA3.1(+)-ns P1a/1-His后48 h收集细胞进行Western blot检测,能够检测到ns P1a/1-His融合报告基因的表达。结论成功构建了人星状病毒非结构蛋白ns P1a/1基因真核表达质粒,并在人胚肾上皮细胞293T细胞获得表达,为进一步深入研究ns P1a/1在人星状病毒抵御宿主细胞抗病毒天然免疫中是否发挥作用奠定了基础。; 毕艳红崔成成黄芬井申荣; 关键词：293T细胞

云南省猪戊型肝炎病毒全基因组扩增及进化分析被引量：1: 2015年; 目的对猪戊型肝炎病毒全长基因组进行扩增,分析其进化关系,为HEV的感染性克隆研究奠定基础。方法利用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-nPCR)和RACE技术对猪粪便中HEV样品进行全基因组扩增,利用DNAStar和MEGA4.0软件进行同源性比较和进化树分析。结果 RT-nPCR方法扩增出HEV的5段目的基因序列和RACE技术扩增出HEV的5′和3′端,序列比对结果正确,HEV全长扩增成功。同源性分析显示其与新疆株(GU119961)同源性较高(96.1%)。系统进化树显示该病毒属于基因4型h亚型猪HEV。结论 HEV全基因组序列扩增成功,为深入研究HEV奠定基础。; 杨臣臣龙飞燕毕艳红李云龙王珏禹文海井申荣黄芬; 关键词：猪戊型肝炎病毒

携带EGFP基因的戊型肝炎病毒重组质粒的构建及其感染性的验证被引量：1: 2016年; 为了构建携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)重组质粒,转染人肺癌细胞A549细胞验证其感染性,PCR法分两段扩增HEV全基因组序列和EGFP基因序列,将EGFP报告基因插入到HEV ORF2基因下游,并克隆到体外转录表达载体pGEM-7Zf(+)上。然后利用脂质体转染法将重组质粒转入A549细胞,24h后在荧光显微镜下观察EGFP的表达;转染72h后,利用免疫荧光法检测HEV ORF2蛋白的表达。转染7d后将发生病变的A549细胞收集作为接种物,接种A549细胞验证携带EGFP的HEV-EGFP重组病毒的感染性。结果显示经酶切和测序鉴定携带EGFP的HEV重组表达质粒pGEM-HEV-EGFP构建成功;EGFP基因与HEV在A549细胞中可融合表达;携带EGFP的HEV重组表达质粒转染A549细胞7d后出现病变,并且连续传代3代仍具有感染性。本研究成功构建了携带EGFP的HEV全基因组重组质粒pGEM-HEV-EGFP,并成功感染A549细胞,为进一步研究HEV的复制机制及致病机理奠定基础。; 李云龙龙飞燕杨臣臣禹文海毕艳红王珏姜典财彭福春井申荣黄芬; 关键词：感染性

红嘴鸥中肠致病性大肠埃希菌快速检测及其系统进化分析被引量：1: 2014年; 目的用PCR法快速检测红嘴鸥(Larus ridibundus)中的肠致病大肠埃希菌(Enteropathogenic Escherichia coli,EPEC),调查昆明红嘴鸥中致病性大肠埃希菌(EPEC)的流行情况并对其进行系统进化分析。方法采集87份新鲜红嘴鸥粪便样品,PCR方法扩增EPEC bfpA基因,对所分离到的菌株进行测序,并对其中1株菌的核苷酸序列进行系统进化分析。结果 87份红嘴鸥粪便中检测到34份阳性样品,阳性率为39.08%。利用PCR方法检测EPEC特异性强、敏感性高。系统进化分析表明本研究所检测到的大肠埃希菌为EPEC。结论利用PCR法首次从红嘴鸥粪便中检测到EPEC,并且具有较高的感染率。调查结果表明EPEC可能是导致红嘴鸥腹泻的病原菌之一。本研究为EPEC的监测及流行病学调查提供了一种简便而快速的检测手段。; 赵显晨罗永彬黄芬井申荣曾韦锟杨祖顺; 关键词：红嘴鸥 PCR方法系统进化分析

信号调节蛋白-α基因真核表达质粒的构建及其在A549细胞中的表达: 2015年; 目的构建信号调节蛋白-α(signal regulatory protein-α,SIRP-α)基因真核表达质粒,并于A549细胞中进行表达。方法提取Hep G2细胞总RNA,RT-PCR扩增SIRP-α基因片段,克隆至真核表达载体pc DNA3.1(+)-EGFP中,构建真核表达质粒pc DNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP。将重组表达质粒转染A549细胞,转染24 h后,荧光显微镜下观察转染情况;转染48 h后,RT-PCR检测SIRP-α基因的转录水平;转染72 h后,Western blot法检测SIRP-α蛋白的表达。结果经双酶切和测序鉴定真核表达质粒pc DNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP构建正确;转染pc DNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP的A549细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光;RT-PCR检测结果可见243 bp目的条带,Western blot检测显示SIRP-α存在。结论成功构建了真核表达质粒pc DNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP,并于A549细胞中有效表达,为进一步研究SIRP-α与肺癌的相关性奠定了基础。; 杨臣臣毕艳红曾韦锟井申荣黄芬; 关键词：A549细胞基因表达肺癌

昆明地区人输血传播病毒分子流行病学研究被引量：2: 2014年; 目的检测昆明市体检人群血清输血传播病毒,研究该地区第4和第5组群输血传播病毒分子流行病学特征。方法聚合酶链反应检测血清输血传播病毒,阳性样品测序后进行同源性和系统进化分析。结果检测了224份血清,通过序列测定和比对确定了151份阳性样品,病毒感染率为67.41%(151/224),第4组群和第5组群分别检测到48份和79份,混合感染10份,两组群输血传播病毒流行率为21.43%(48/224)和35.27%(79/224),混合感染率为4.46%(10/224)。结论获得了昆明地区第4和第5组群输血传播病毒流行病学数据,为昆明地区输血传播病毒的预防奠定基础。; 李攀张成崔成成杨思达曾韦锟黄芬井申荣; 关键词：输血传播病毒分子流行病学

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