国家科技重大专项(2008ZXl0004-002)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：张翠彩李秀文杨会棉聂一新蒋秀高更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京市疾病预防控制中心军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 致病性钩端螺旋体TaqMan Real-timePCR检测技术的建立及其应用被引量：5
- 2011年
- 目的建立致病性钩端螺旋体（钩体）TaqManReal-timePCR检测技术。方法以钩体16SrRNA基因的部分片段rrs基因作为靶基因，设计引物、TaqMan探针，PCR产物克隆到pMDl9-T载体，制作标准曲线，建立定量分析质控标准。利用中国15群15型致病性钩体参考菌株、16群21型非致病性钩体参考菌株、50株不同血清群致病性分离株及伯氏疏螺旋体、嗜肺军团菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌等27株其他常见致病菌检验引物、探针的灵敏性、特异性。将Real-timePCR、普通PCR同时应用于倍比稀释致病性钩体染色体DNA及25份现场鼠肾标本的检测。结果建立、优化致病性钩体Real-time PCR技术，致病性钩体扩增荧光信号阳性，非致病性钩体及其他非钩体菌均无扩增。对于倍比稀释的质粒标准品，Real-timePCR和普通PCR的最低检测下限分别是10copy／μl和10。copy／μl。对于倍比稀释的钩体染色体DNA，两者的最低检测下限分别为：100fg／μl和1ng／μl。25份现场鼠肾标本检测显示，两种方法的检测结果一致。结论以rrs为靶基因建立的Real-timePCR技术，具有较高的灵敏度和特异度，可用于致病性钩体的病原学检测。
- 张翠彩李秀文聂一新杨会棉蒋秀高
- 关键词：钩端螺旋体TAQMANREAL-TIMEPCR
- 不同类型样本在甲型H1N1流行性感冒诊断及研究中的意义被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨咽拭子、粪便、血等不同类型标本在甲型H1N1流行性感冒（简称流感）诊断、排毒规律研究中的意义.方法 采集2009年5-6月期间23例甲型H1N1流感确诊患者的135份样本,其中包括13例患者的99份咽拭子、14份粪便、11份血、1份气管抽取物和另10例患者的10份血.分别应用RT-PCR（采用荧光定量PCR方法）、血凝抑制试验检测甲型H1N1流感病毒核酸、血清抗体.结果 13例患者的99份咽拭子中,首次RT-PCR检测阳性的时间为发病后0～7 d,中位数为1 d;咽拭子RT-PCR检测阳性持续时间为1～15 d,中位数为3 d.4例患者呈现间歇排毒现象.1份气管抽取物RT-PCR检测阳性.14份粪便标本中,8份为RT-PCR检测阳性,阳性率为57.14%,RT-PCR检测阳性的时间为发病后1～4 d,中位数为3 d.21份血标本采集时间为发病后2～9 d,RT-PCR检测阳性为1份,采集时间为发病后7 d,阳性率为4.76%.发病后2～9 d采集的21份血标本血清抗体检测结果均为阴性.结论 咽拭子、粪便可用于甲型H1 N1流感患者的早期诊断;咽拭子RT-PCR检测阳性的持续时间比粪便长,且呈现间歇排毒情况.甲型H1N1流感存在少量的病毒血症,早期血标本（发病后9 d内）不能检测到抗体.
- 黄芳石伟先卢桂兰崔淑娟吕艳宁田丽丽钱海昆杨鹏王全意庞星火
- 关键词：流感病毒A型H1N1亚型逆转录聚合酶链反应
- 贝氏柯克斯体血清学反应蛋白芯片的研制
- 2011年
- 贝氏柯克斯体为Q热的病原菌。本研究对19个贝氏柯克斯体血清学反应阳性蛋白基因进行PCR扩增，将扩得的基因片段与表达载体连接，将重组质粒转化大肠杆菌并表达目的蛋白，采用Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白。将纯化的重组蛋白点在醛基化玻片上制备蛋白芯片。将贝氏柯克斯体新桥株实验感染小鼠血清分别对蛋白芯片进行血清学分析，结果显示能与贝氏柯克斯体感染1、2、3、4周小鼠血清反应的蛋白数分别是0、16、19和18个。结果说明该芯片上的重组蛋白具有贝氏柯克斯体感染血清反应特异性，该芯片分析有望用于Q热的血清学诊断。
- 熊小路王锡乐孟艳芬齐永温博海
- 关键词：贝氏柯克斯体Q热蛋白芯片
