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根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化体系的建立及优化被引量：13: 2012年; 基于根癌农杆菌介导的遗传转化方法的独特优点,研究黑曲霉转化过程中各主要影响因素,建立高效的黑曲霉遗传转化方法。构建双元载体pBI-hph,通过电转导入农杆菌LBA4404中,以黑曲霉TCCC41056为受体菌株,利用潮霉素B基因作为筛选标记,对影响转化效率的孢子悬液的新鲜程度及浓度、农杆菌菌液浓度、共培养时间、共培养温度这五个条件进行分析,建立根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化体系。实验结果表明,上述条件对黑曲霉的转化效率有较大的影响,通过优化,黑曲霉转化效率可达83个转化子/107分生孢子;整合到黑曲霉基因组的外源基因可以稳定遗传,在转接10代后遗传性能仍保持稳定,并在众多转化子中筛选得到了糖化酶活力提高18%的黑曲霉突变株。根癌农杆菌介导的黑曲霉转化体系的建立,为进一步研究黑曲霉的功能基因以及开发黑曲霉表达系统提供了有力的手段。; 黎明刘萌黄云雁周丽颖孙昕路福平; 关键词：根癌农杆菌黑曲霉糖化酶

谷氨酸棒杆菌发酵生产1,5–戊二胺的代谢流分析被引量：2: 2015年; 为了提高糖类的利用效率,加强糖类代谢向生成尸胺的方向流动,提高尸胺产量,对谷氨酸棒杆菌合成尸胺的代谢网络进行分析,找出影响尸胺合成的代谢流量分配规律和关键节点,并通过改变溶氧及添加辅酶NADPH对关键节点进行验证.结果表明:6–磷酸葡萄糖和丙酮酸是影响碳源流向尸胺合成的关键节点,增强磷酸戊糖途径(HMP)和三羧酸循环(TCA)可以弱化由6–磷酸葡萄糖生成6–磷酸果糖和由丙酮酸生成乳酸,促进碳源向合成尸胺的方向流动,从而有效地提高尸胺产量(产量增幅为77.8%).该研究为高产尸胺的谷氨酸棒杆菌工程菌种改造以及发酵控制提供了理论基础.; 黎明唐奇李东霞随树珍路福平; 关键词：代谢途径谷氨酸棒杆菌 NADPH

大麻纤维微生物脱胶菌株的筛选、鉴定及其应用被引量：5: 2017年; 为了筛选并获得高效的大麻纤维脱胶菌株,以沤麻液为筛选来源,采用选择平板进行初筛,再以摇瓶脱胶实验进行复筛,以脱胶麻的残胶率为指标,筛选大麻脱胶微生物.最终获得两株高效的脱胶菌株,经形态学和16S,rRNA鉴定均属于枯草芽胞杆菌.大麻分别经两株菌和两株菌混合脱胶4,d后,残胶率由原麻的50%,左右都降低到了13%,左右,纤维素含量由原麻的50%,都增长到82%,,肉眼观察纤维完全发散,色泽光亮洁白,在电镜下扫描观察没有明显的纤维损伤.这说明筛选到的两株枯草芽胞杆菌都具有应用到大麻脱胶工业的潜力,也为大麻的生物法脱胶提供了一定的依据.; 杨田随树珍刘逸寒黎明; 关键词：大麻微生物脱胶枯草芽胞杆菌残胶率

大肠杆菌糖酵解途径和三羧酸循环启动子的表征及其应用被引量：2: 2020年; 启动子是控制基因转录的重要元件,也是合成生物学研究和细胞工厂设计的关键环节。糖酵解途径和三羧酸循环是糖类分解代谢的中心代谢,受到包括启动子强度在内的严格调控。为了筛选一系列能满足合成生物学研究和细胞工厂设计需要的不同强度的内源性组成型启动子,利用报告基因——红色荧光蛋白m Cherry和在线分析软件,系统研究了大肠杆菌糖酵解和三羧酸循环中27个启动子的强度和核心结构元件。结果表明:这些启动子的强度范围变化很大,最强启动子Pgap A的强度是最弱启动子Pacn A强度的43. 6倍;启动子的-10序列和-35序列与它们的一致序列也不完全相同,两者之间的距离为17±3bp;但是,启动子的强度和启动子的结构特征基本一致。应用最强启动子Pgap A在重组大肠杆菌DH5αΔpck中分别表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因和丙酮酸激酶基因,它们的酶活性分别提高了0. 32和1. 57倍,柠檬酸产量也提高了124. 7%和75. 5%。这些不同强度的启动子为大肠杆菌的合成生物学研究和细胞工厂设计奠定了一定的基础。; 玄美娟张晓云高莹高丽影吴佳婧马梅王艳梅寇航路福平黎明; 关键词：启动子三羧酸循环磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶丙酮酸激酶

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国家自然科学基金(21176190)