上海市自然科学基金(99ZB14039)
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
- 相关作者：刘建民赵瑞赵文元黎莉霍克克更多>>
- 相关机构：第二军医大学复旦大学更多>>
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- 红藻氨酸致痫大鼠海马神经元中真核生物起始因子2α酶切片段的产生被引量：7
- 2005年
- 目的:研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)在红藻氨酸癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中,对其已知底物真核生物起始因子2(eIF2α)的作用。方法:制备红藻氨酸诱导大鼠癫痫模型,记录模型发作行为及脑电图表现,以TUNEL法检测模型癫痫发作终止后12、24、48、72和96h海马神经元凋亡情况,同时以Westernblot法检测模型鼠海马eIF2α的表达变化及其与细胞凋亡之间的相关性。结果:在癫痫发作后12h出现凋亡神经元,随时间延长,海马神经元凋亡数不断增加,72h达高峰;发作后24h海马神经元出现了Caspase3酶切eIF2α产生的片段,并逐渐变浓,至72h。结论:癫痫模型大鼠海马中Caspase3酶切eIF2α与神经元凋亡的发生时间一致,提示在癫痫模型大鼠海马神经元凋亡中eIF2α被Caspase3酶切。
- 赵瑞刘建民赵文元黎莉霍克克许奕黄清海
- 关键词：癫痫海马凋亡
- 体外培养大鼠海马神经元癫痫模型中神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3基因的表达(英文)被引量：1
- 2006年
- 背景:颞叶癫痫的发病与海马神经元丢失死亡有关,但其海马神经元丢失的具体方式和详尽机制还不清楚,难以确定海马神经元癫痫样放电与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteine-containingASPartate-specificprotease,Caspase-3)激活及神经元凋亡的必然联系。目的:观察体外培养大鼠海马神经元癫痫模型中神经元凋亡及Caspase-3基因的表达情况。设计:开放性实验。单位:解放军第二军医大学长海医院神经外科,解放军第二军医大学长征医院神经外科。材料:实验于2002-06/2003-06在解放军第二军医大学神经外科实验室完成。选取出生24h内的SD大鼠10只,雌雄不拘。Caspase-3流式检测试剂盒购自美国BD公司,PCR引物由上海皓嘉公司合成。方法:①将24h内新生SD大鼠断头取脑,解剖出双侧海马,制备海马神经元癫痫样放电细胞模型。通过全细胞膜片钳对细胞模型放电情况进行检测。以培养8d并经无镁处理的神经元细胞作为癫痫样放电模型组,以培养8d但未经无镁处理的神经元细胞作为空白对照组,记录电位变化。②采用反转录-聚合酶链法克隆大鼠全长caspase-3cDNA,并加以标记;采用原位杂交和流式细胞术检测caspase-3基因表达和神经元凋亡情况。主要观察指标:①Caspase-3基因cDNA的克隆结果。②Caspase-3原位杂交检测结果。③细胞凋亡检测结果。结果:①反转录-聚合酶链反应扩增的产物经12g/L琼脂糖凝胶电泳显示约800bpDNA片段区带,与预期值一致。DNA序列测定显示所得克隆的开放阅读框架长843bp。②杂交显示空白对照组海马阳性染色神经元少于10%,神经元突起饱满,形成广泛的突触联系。癫痫样放电模型组无镁处理3h后,染色阳性细胞明显增多;无镁处理12h后,有较多强阳性染色神经元,基本保持有神经元突起,但突起变得菲薄。③流式细胞分析显示,无镁处理6h后凋亡细胞开始明显增加,单位时间内凋亡细
- 刘建民赵文元赵瑞卢以成周晓平
- 关键词：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶癫痫神经元海马
- caspase-3在颞叶癫痫大鼠海马神经凋亡中作用的实验研究被引量：2
- 2006年
- 目的构建癫痫模型大鼠海马凋亡神经元的cDNA文库,采用酵母三杂交技术从中寻找caspase-3潜在的酶切底物。方法制作海人藻酸大鼠癫痫模型,取其海马组织制作酵母三杂交cDNA文库,克隆获得caspase-3的P12、P17两亚基,然后分别定向插入同一pBridge质粒,构建caspase-3的酵母三杂交诱饵载体并进行验证,然后对所构建文库进行筛库。结果成功构建癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了caspase-3酵母三杂交诱饵载体,并通过caspase-3与eIF2α之间的相互作用验证,经筛库获得caspase-3的底物MIZ1。结论酵母三杂交技术可用于寻找caspase-3下游底物,从癫痫模型大鼠海马的cDNA文库中筛库获得caspase-3的底物MIZ1,为进一步研究caspase-3在癫痫发作引起的海马神经元损伤中的作用奠定了基础。
- 赵瑞刘建民赵文元黎莉霍克克王文仲
- 关键词：癫痫凋亡底物CASPASE-3
- 海人藻酸致痫大鼠海马神经元凋亡中caspase-3作用的实验研究被引量：4
- 2005年
- 目的阐明癫痫模型大鼠海马神经元凋亡中caspase-3的作用机制。方法以TUNEL法检测KA致痫大鼠海马神经元凋亡情况,以WesternBlot方法检测其海马神经元中eIF2α的表达变化。取模型鼠海马组织制备cDNA文库,以caspase-3的大小亚单位构建酵母三杂交诱饵载体,并进行酵母三杂交筛库实验。结果在癫痫发作后12h海马出现凋亡神经元,72h达高峰;发作后24h海马神经元出现eIF2α被caspase-3酶切的片段,逐渐增加至72h。成功制备癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了caspase3酵母三杂交诱饵载体,验证了caspase3与eIF2α之间的相互作用,并经筛库获得caspase3的新底物PIAS1。结论在癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中eIF2α被caspase3酶切。酵母三杂交技术可用于筛库寻找caspase3下游底物,从癫痫大鼠海马中获得caspase3的新底物PIAS1,为进一步研究在癫痫发作致神经元损伤中caspase3的作用建立了基础。
- 赵瑞刘建民赵文元黎莉霍克克周晓平
- 关键词：海马CASPASE-3EIF2Α
- Caspase-3在癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡中作用的研究被引量：9
- 2005年
- 目的对癫痫模型海马神经细胞凋亡中caspase-3的作用机制进行实验研究。方法以TUNEL法检测KA致痫大鼠海马神经细胞凋亡情况,以Western blot法检测其中eIF2α的表达变化。取模型鼠海马组织构建cDNA文库,构建caspase-3的酵母三杂交诱饵载体,进行筛库实验。结果在癫痫发作后12 h TUNEL阳性神经元增加,72 h达高峰;发作后24 h出现eIF2α被caspase-3酶切的片段,逐渐增加至72 h。制作成功cDNA文库,构建了caspase-3的酵母三杂交诱饵载体,筛库获得caspase-3的新底物Miz1。结论在癫痫大鼠海马神经细胞凋亡中eIF2α被caspase-3酶切。酵母三杂交寻找caspase-3下游底物有可行性,从癫痫大鼠海马中获得caspase-3的底物Miz1。
- 赵瑞刘建民周晓平黎莉赵文元霍克克
- 关键词：CASPASE-3大鼠海马癫痫模型神经细胞凋亡海马神经细胞发作后
- 大鼠海马神经元癫模型中神经元凋亡及caspase3基因的表达
- 2005年
- 目的:探讨体外培养大鼠海马神经元癫模型中神经元丢失的分子机制。方法:制备大鼠海马神经元癫样放电细胞模型,以膜片钳全细胞记录对模型放电进行检测,采用RT PCR法克隆大鼠全长caspase 3 cDNA,采用原位杂交和流式细胞术检测模型中caspase 3基因表达和神经元凋亡情况。结果:成功克隆获得大鼠全长caspase 3 cDNA,其序列与文献报道一致。模型组海马神经元癫样放电3 h后caspase 3基因表达开始增多,6 h后凋亡细胞开始明显增加,两者均较对照组明显增加。结论:癫样放电可能启动神经元caspase 3表达,继而介导神经元凋亡。
- 刘建民赵文元卢亦成周晓平赵瑞
- 关键词：CASPASE海马神经元凋亡
