国际科技合作与交流专项项目(2010DFA34250)
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 相关作者：王静杨宇王旺赵婷婷刘丽娟更多>>
- 相关机构：中国检验检疫科学研究院沈阳农业大学福建国际旅行卫生保健中心更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家质检总局科技计划项目质检公益性行业科研专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 多种蚊媒病毒x—TAG悬浮芯片复合检测方法的建立
- 2013年
- 建立多重检测东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、基孔肯亚病毒、登革病毒、日本脑炎病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、圣路易斯脑炎病毒、版纳病毒、布尼亚病毒、裂谷热病毒的悬浮芯片方法。将十二种蚊媒病毒分为3组，每组使用标记有不同anti—TAG的上游引物及标记有生物素的下游引物对分别构建多重PCR体系，PCR产物与偶联了x—TAG的编码磁性微球进行杂交，最后利用Bio—plex100分析系统对12种蚊媒病毒分别进行单一、多重液相芯片检测。将平均荧光强度的判定阈值定为背景对照的3倍，多批次实验均能对十二种单一病毒样本和混合病毒样本进行准确鉴定，未出现交叉反应，表明该方法特异性较好。敏感性测试结果显示本检测方法具有高灵敏度。通过利用偶联有TAG及生物素的引物对，成功建立了可同时检测12种蚊媒病毒的液相芯片检测技术平台。该平台对于病原体的检测具有较好的应用前景。
- 王旺王静孙肖红杨宇张晓龙赵婷婷曹晓梅
- 关键词：悬浮芯片
- 9种蜱媒病原体xMAP悬浮芯片高通量检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 目的建立森林脑炎病毒(forest encephalitis,TBEV)、新疆出血热病毒(Xinjiang hemorrhagic fever,XHF)、斑点热群立克次体(spotted fever group rickettsiae,SF)、巴贝西原虫(Babesiaspp.)、埃立克体(Ehrlichieae)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis,Fr)、Q热立克次体(Coxiella burneti,Q)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi,Bo)、巴尔通体(Bartonella,Barton)9种蜱传病原体的悬浮芯片多重检测方法。方法将9种蜱媒病原体分为两组构建多重PCR体系,各上游引物均带有不同的anti TAG标记,下游引物标记生物素,PCR产物与偶联对应x TAG的磁性微球进行杂交,结合物用Bio plex 100液相芯片系统检测,并对9种蜱媒病原体分别进行单一、多重检测分析。结果将平均荧光强度的判定阈值定为背景对照的3倍,多批次实验均能对混合模板进行准确鉴定,未出现交叉反应,表明该方法的稳定性和特异性均较好;同时对该方法的灵敏性进行鉴定,结果表明本检测方法灵敏度良好。结论通过利用偶联有标签序列及生物素的引物对,成功建立了可同时检测9种蜱媒病原的液相芯片检测技术平台;该平台对于蜱媒病原体的检测具有较好的应用前景。
- 王旺杨宇王静赵婷婷孙肖红刘丽娟
- 关键词：悬浮芯片
- 基于新型悬浮芯片的13种/型经呼吸道感染病毒高通量检测方法被引量：2
- 2014年
- 目的基于目标特异性引物延伸(TSPE)技术的新型基因悬浮芯片,建立高通量、快速、准确、可同时检测多种呼吸道病原的方法。方法针对流感病毒A、B型,副流感病毒1、3型,冠状病毒SARS-Co V、Co V-NL63、呼吸道合胞病毒A、B型,腺病毒B、E型,鼻病毒、人偏肺病毒、肠道病毒共13种/型经呼吸道感染病毒的特异性基因序列,设计13对引物和相应的特异性探针,经多重PCR扩增及TSPE反应,生物素标记对应基因片段,标记的片段与相应微球结合,悬浮芯片扫描仪检测。结果悬浮芯片检测体系能正确检测13种/型经呼吸道传播的病毒及其亚型,各探针间无交叉反应,特异性好、灵敏度高。结论建立了高通量、快速、准确的可同时检测多种呼吸道病原的技术平台,为突发呼吸道传染病的鉴定和检测提供技术储备,有利于及时应对传染病疫情。
- 杨宇张建明王静刘丽娟赵婷婷王旺高博
- 关键词：悬浮芯片多重PCR呼吸道病毒
- 2011年黑龙江省黑瞎子岛鼠群中钩端螺旋体感染状况调查被引量：8
- 2013年
- 目的调查2011年黑龙江省黑瞎子岛鼠群中钩端螺旋体的感染情况。方法于2011年4-10月在黑龙江省黑瞎子岛采用夹夜法捕鼠，共捕鼠356只，无菌操作采集鼠肾样品；提取鼠肾脏总核酸，采用PCR方法，利用钩体鉴别引物，对提取的肾脏总核酸中23SrDNA的482bp特异性片段进行扩增，以检测鼠体钩端螺旋体感染情况；抽取不同月份的15份阳性扩增产物进行纯化，用双脱氧终止法测序，并利用Mega4．0软件与Genebank中已知的国内外菌株基因序列进行比对及系统发育分析。结果在捕捉到的356只鼠中，红背鼯和黑线姬鼠所占比例较大，分别为39．3％（140／356）和36．0％（128／356）。所有鼠中共检测到钩端螺旋体阳性39只，感染率为11．O％，除褐家鼠外，其他鼠种均有感染，黑线姬鼠、红背鼾、东方田鼠、花鼠和大林姬鼠的感染率分别为9．4％（12／128）、12．9％（18／140）、10．8％（7／65），差异无统计学意义（χ2=1．92，P〉0．05）。4月份未检测到感染疫鼠，5、6、7、8、9和10月份的感染率分别为5．6％（4／72）、8．8％（5／57）、12．8％（5／39）、9．8％（5／51）、33．3％（11／33）和22．5％（9／40），差异有统计学意义（χ2=32．92，P〈0．05）；黑瞎子岛鼠群感染的钩端螺旋体在同一进化支上，相似度为97．1％-99．6％，与澳大利亚的菌株U90865在进化上最为相近，相似度〉96．3％。结论该地区鼠群中已存在钩端螺旋体的感染，所感染钩体在进化上相似，且存在季节性差异，而对宿主的选择性不明显。
- 王振东王莎莎刘丽娟杨宇李明郭天宇富英群侯咏孙肖红徐宝梁王静
- 关键词：鼠科黑瞎子岛
- 4种病原抗体液相芯片同步检测方法建立被引量：1
- 2012年
- 全球经济化的发展、贸易的开通,交通的便捷,无不为各国旅行、探亲、交易打开了方便之门,人口流动速度加快,与此同时传染病的传播也随之蔓延[1]。为保障居民生命健康安全,进行国境口岸传染病病原抗体的快速筛查,为传染病的传入与传出建立一道屏障有重要意义[2]。
- 杨永莉王静杨宇王旺
- 关键词：登革病毒禽流感病毒西尼罗病毒液相芯片抗体同步检测
- 新型液相芯片复合检测5种鼠传病原体方法的建立被引量：2
- 2013年
- 目的建立一种能同时检测5种鼠传病原体:流行性出血热病毒(Epidemic hemorrhagic fever,EHF)、斑疹伤寒立克次体(Rickettsia typhi,TY1)、鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,YP)、恙虫病立克次体(Rickettsia tsutsugamushi,RST)、钩端螺旋体(Leptospira,Lep)的液相芯片多重检测方法;方法针对5种病原的全基因组序列,分别设计特异性引物,并将上游引物5’端分别偶联一些特定的核酸片段作为标签(TAG),下游引物5’端标记生物素,PCR扩增后产物与微球进行杂交,最后利用液相芯片检测系统分析结果。结果建立的方法能同时完成对5种病原体Bio-plex100病原体及其中任何1种的检测,特异性好,灵敏度最低可达3 fg/test。结论通过利用偶联有TAG及生物素的引物对,成功建立了可同时检测5种鼠传病原的液相芯片检测方法,具有较高的灵敏度和特异性。该方法对于鼠传病原体的检测具有较好的应用前景。
- 王旺杨宇王静赵婷婷
- 关键词：液相芯片标签
