国家自然科学基金(30471280)
- 作品数：5 被引量：22H指数：3
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- 相关机构：吉林大学军事医学科学院更多>>
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- 抗菌肽天蚕素B基因的克隆及其在山羊乳腺中的暂态表达被引量：3
- 2009年
- 根据已发表的天蚕素B的cDNA序列化学合成4条引物,以重叠延伸PCR的方法合成了真核细胞偏爱密码子编码的抗菌肽天蚕素B基因,将其克隆于pMD18-T载体,DNA序列分析证实合成的抗菌肽基因的碱基序列与设计的序列完全一致。利用山羊-β酪蛋白基因5′侧翼调控序列和真核基因表达载体pIRES1-neo,构建抗菌肽天蚕素B的乳腺组织特异性表达载体pbCP-cpin,将该载体溶于生理盐水,注入处于泌乳期的成年母山羊乳腺组织进行暂时表达。通过对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌试验确定了抗菌肽天蚕素B基因在山羊乳腺中的表达和抗菌活性。本试验建立了抗菌肽天蚕素B的乳腺瞬时表达系统,为验证各调控元件以及抗菌肽基因在转基因动物乳汁中分泌表达的有效性和可行性提供了一个快速检测系统。
- 王铁东李小平逄大欣欧阳红生
- 关键词：抗菌肽天蚕素乳腺
- 抗菌肽重组逆转录病毒载体的构建、重组病毒的包装及其在牛奶中的稳定表达被引量：3
- 2008年
- 将含有双抗菌肽基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLN—bcp—LK（R）中，获得了含有双抗菌肽基因的重组逆转录病毒载体pLN—bcp-LfcinB-CE-MA（R），利用脂质体转染PA317包装细胞，G418进行筛选得到了阳性细胞克隆，克隆扩大培养后，用病毒上清感染NIH3T3细胞进行滴度测定，最高滴度为1×10^4CFU／mL，用病毒上清转染妊娠中后期奶牛乳腺组织，产犊后采集的奶样经琼脂板溶圈法和Tricine-SDS-PAGE检测，结果表明乳汁中表达的抗菌肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有明显地抑菌活性，并能实现相对稳定的表达，表达可持续30-45d。
- 张锦霞张守峰郭学军扈荣良
- 关键词：抗菌肽重组逆转录病毒转染
- 乳铁蛋白肽基因的合成及其在动物乳腺中的表达被引量：13
- 2006年
- 根据已发表的编码牛乳铁蛋白肽（LfcinB）25个氨基酸的mRNA序列，设计了4条用于合成牛乳铁蛋白肽全基因的引物，用重叠延伸PCR法合成149bp的牛乳铁蛋白肽基因（包括牛乳铁蛋白信号肽序列、上下游酶切位点和终止密码子），并将此基因克隆到载体pI-B，获得了乳腺特异性表达质粒pI-BL，该质粒经生理盐水稀释后直接注入稳定泌乳期奶山羊和奶牛乳腺组织（注射量为400μg），以琼脂板溶圈法检测奶样抑菌活性。结果显示，注射后3～48h，奶样有明显抑菌活性，其中3～9h抑菌活性最高。
- 张锦霞王铁东张守峰郭学军扈荣良
- 关键词：乳铁蛋白乳铁蛋白肽基因合成乳腺特异性表达
- 逆转录病毒介导的天蚕抗菌肽B在奶牛乳腺中的表达
- 2009年
- 为了研究天蚕抗菌肽在奶牛乳腺组织长期表达的可行性以及对大肠杆菌的抑制作用,将天蚕抗菌肽B(cecropin B,CB)的基因序列以哺乳动物偏爱的密码子优化后,合成了四条相互重叠的DNA片段,通过重叠延伸PCR法获得了天蚕抗菌肽B的基因,将其亚克隆至T载体,测序正确后构建逆转录病毒载体pLNCX-bCP-cecB,经过包装细胞的包装,获得含有天蚕抗菌肽B表达框的逆转录病毒,注射入奶牛乳腺组织,通过琼脂板孔穴扩散法检测基因的表达及活性;实验结果表明,克隆的抗菌肽基因在乳腺中获得了表达,表达产物对大肠杆菌具有抑制作用,抑制效果可以持续至13天以上。
- 王铁东逄大欣欧阳红生
- 关键词：抗菌肽天蚕素B逆转录病毒
- 牛气管抗菌肽在山羊乳腺组织中的表达被引量：5
- 2009年
- 根据已经发表的牛气管抗菌肽(bTAP)cDNA序列设计4条短的寡核苷酸片段,以重叠延伸PCR的方法合成bTAP基因,将其克隆至pMD-18T载体,序列测定正确后,构建bTAP基因的乳腺组织特异性表达载体pBcp-bTAP,将其溶于生理盐水后直接注射山羊乳腺小叶,使bTAP基因在乳腺组织内表达,收集注射质粒前后的奶样,测试奶样对金黄色葡萄球菌,大肠杆菌的抑制能力,结果显示注射pBcp-bTAP后的奶样表现出对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有明显的抑制作用,这种抑制活性可以持续至20h以上。
- 王铁东逄大欣欧阳红生
- 关键词：乳腺基因表达
