国家自然科学基金(306724487)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：南方医科大学广东省农业科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 从放线菌发酵液中高通量筛选端粒酶抑制剂被引量：2
- 2010年
- 目的从2000多株放线菌发酵液中高通量筛选特异性端粒酶抑制剂。方法经对持有的3种端粒酶抑制剂筛选模型即3株酵母菌PCR验证后,将其接种于含3-AT、组氨酸缺乏的酵母培养液,然后分别调整其菌液浓度和筛选样品剂量,以备高通量筛选。将酵母菌液移于96孔板,加入待测样品,振摇培养并定时经多功能微孔板分析仪进行定量分析,选取抑菌率大于0.45的样品进行复筛。结果经验证所持有的3种端粒酶抑制剂筛选模型均可用于下一步的筛选,并选取酵母菌液OD595nm 0.04做为起始筛选浓度,选取放线菌发酵液剂量为5ml,通过对放线菌发酵液进行初筛和复筛,发现了14株放线菌发酵液的抑菌效率超过0.45。结论该研究首次高通量筛选端粒酶抑制剂,方法简便快捷,筛选结果稳定可靠,并筛选到14株放线菌发酵液可能具有抗肿瘤活性,为进一步研究和开发抗肿瘤新药奠定基础。
- 张慧敏曹莹王卫国李波兰沈会芳林壁润庞建新吴曙光
- 关键词：高通量筛选端粒酶抑制剂酵母三杂交系统抗肿瘤活性
- 高通量端粒酶抑制剂筛选模型融合表达载体的构建及转化被引量：1
- 2009年
- 目的构建含不同结构域的人端粒酶逆转录酶(hTERT)酵母三杂交系统融合蛋白表达载体并转化酵母。方法采用PCR法从pCLXSN-hTERT质粒中提取不同的hTERTcDNA片段,纯化分离定向克隆到pYESTrp3质粒,构建包含不同hTERT蛋白结构域的编码序列的重组质粒,转化大肠杆菌,经PCR、酶切、测序鉴定,将阳性重组质粒转化酵母菌,进行毒性和自激活检验。结果经过测序验证,重组融合蛋白表达载体pYESTrp3-hTERT构建成功,转化酵母无毒性和自激活性。结论成功构建能用于酵母三杂交系统的融合蛋白表达载体,可于酵母三杂交系统筛选端粒酶抑制剂及hTERT和hTR间的相互作用。
- 王卫国曹莹张群张慧敏刘晓萍孔焕育庞建新吴曙光
- 关键词：HTERT端粒酶抑制剂
- 人端粒酶RNA突变体酵母三杂交诱饵质粒的构建被引量：3
- 2009年
- 目的对人端粒酶RNA进行多位点的突变并构建该突变体的酵母三杂交诱饵质粒,且进行毒性检测。方法根据人端粒酶RNA(hTR)序列及突变位点设计引物,运用重叠延伸PCR法对hTR基因的第41位、第80位及第102位碱基进行T→A突变,将突变后的片段克隆入PMD18T载体,经测序正确后再亚克隆到酵母三杂交诱饵质粒PRH3'中,PCR及酶切鉴定。鉴定成功的重组诱饵质粒转化到酵母细胞L40ura3/pHyblex/ZeoMS2进行毒性检测。结果经过测序验证,该基因预期位点突变成功且其他序列未发生随机突变,重组诱饵质粒构建成功,转化酵母菌之后对宿主无毒性。结论成功构建了hTR突变体的重组质粒PRH3'-hTRm,可作为酵母三杂交系统中的"诱饵"。
- 曹莹王卫国李琳张慧敏王广发庞建新吴曙光
- 关键词：人端粒酶RNA重叠延伸PCR定点突变
