天津市应用基础与前沿技术研究计划(12JC2DJC21400)
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
- 相关作者：朱长军董智雄付成华潘丽娜赵健更多>>
- 相关机构：天津师范大学山东大学泰山医学院附属医院更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 核糖体蛋白RPL15多克隆抗体的制备与细胞内定位
- 2016年
- 为了解核糖体大亚基蛋白RPL15在细胞中的定位和功能,设计并合成了RPL15蛋白的多肽,作用于抗原免疫兔子,使其产生特异性多克隆抗体,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光方法检测RPL15抗体的特异性.结果证实本研究成功制备并纯化了RPL15的多克隆抗体,且该抗体可以特异性识别RPL15蛋白.免疫荧光实验表明RPL15定位于细胞质和细胞核中,主要定位于核仁并呈点状分布,且与UBF、FBL和C23存在部分共定位.
- 梁爽爽冀美超胡晓晴付成华朱长军董智雄
- 关键词：核糖体多克隆抗体免疫荧光细胞内定位
- 染色体驱动蛋白KIF4A抑制胃癌细胞的迁移运动被引量：3
- 2015年
- 探究染色体驱动蛋白KIF4A与胃癌细胞迁移运动的关系,从而为胃癌临床治疗提供新的治疗靶点。用G418筛选的方法构建了两种细胞株:KIF4A低表达的胃癌SGC细胞株与KIF4A过表达的胃癌SGC细胞株,Western与免疫荧光的验证后,对其分别进行细胞划痕与Transw ell迁移实验检测KIF4A对细胞迁移运动能力的影响。成功构建了KIF4A低表达的SGC细胞株(SGC-sh KIF4A)与KIF4A过表达的细胞株(SGC-KIF4A),在KIF4A低表达的SGC细胞株中细胞的迁移速率增加,在KIF4A过表达的细胞株中细胞的迁移速率减慢。染色体驱动蛋白KIF4A抑制胃癌细胞的迁移运动能力,为进一步研究KIF4A与胃癌转移的机制奠定基础。
- 胡晓晴梁爽爽冀美超朱长军潘丽娜
- 关键词：驱动蛋白胃癌迁移
- A549-KIF4A过表达细胞株的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 非小细胞肺癌A549细胞中驱动蛋白KIF4A的表达量极低.为研究KIF4A在肺癌发生和发展过程中的作用,利用脂质体转染的方法,将p EGFP-KIF4A质粒和p EGFP-C1质粒分别转入A549细胞中,用G418筛选得到单克隆,并扩增得到稳定表达GFP-KIF4A和GFP的细胞株.利用Western Blot以及免疫荧光染色法对得到的细胞株进行鉴定.结果表明:A549-GFP-KIF4A细胞中GFP-KIF4A蛋白的表达水平较高,A549-GFP-C1中仅表达GFP蛋白.免疫荧光检测表明:A549-GFP-KIF4A过表达细胞中GFP-KIF4A荧光融合蛋白的定位与内源KIF4A的定位相同.
- 宋翔付成华朱长军董智雄
- 关键词：驱动蛋白脂质体转染免疫荧光检测细胞株
- 染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA（shRNA）表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株（SGC-shKIF4A）和稳定表达无意义shRNA的对照细胞（SGC-shNC）;同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.
- 钟铠泽赵健李陪陈蔚文朱长军董智雄
- 关键词：有丝分裂小分子干扰RNA胃癌细胞
- 黏着斑蛋白Supervillin的抗体制备及纯化被引量：1
- 2014年
- 黏着斑蛋白Supervillin(SVIL)是一个细胞膜结合蛋白分子,定位于细胞与细胞外基质接触面的黏着斑。为了进一步研究SVIL蛋白分子在细胞内的功能,应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒pGEXKG-SVILC302和pHIS8-SVILC302,并在细菌BL-21(DE3)中用IPTG分别诱导表达GST-SVILC302和HIS-SVILC302融合蛋白。用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化GST-SVILC302蛋白,然后免疫新西兰大白兔制备SVIL多克隆抗体,并用Ni-NTA柱子结合HIS-SVILC302蛋白,对其进行交联,纯化抗体。Western Blot(WB)和Immunofluorescence(IF)实验证明该抗体可以识别外源的GFP-SVIL和内源的SVIL蛋白,并且可以用于蛋白免疫沉淀实验。表明此SVIL多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度,为进一步研究黏着斑蛋白SVIL在细胞内的功能奠定了坚实的基础。
- 张佟佟钱积成朱长军董智雄
- 关键词：SUPERVILLIN抗体纯化
- KIF4A mRNA在肺癌组织中表达水平的研究被引量：1
- 2013年
- 收集肺癌组织标本和正常肺组织标本,提取组织中的RNA,通过反转录PCR合成cDNA,进行实时定量PCR测定.结果表明:31例肺癌组织中有29例KIF4A mRNA的表达量高于正常组织,其中26例(83.87%)比正常组织高2倍以上,10例(32.30%)比正常组织高4倍以上;KIF4A mRNA的表达量与肿瘤淋巴结转移(TNM)分期的相关性具有统计学意义(F=0.565,P=0.029).由于肺癌组织中KIF4A mRNA的表达量升高与肿瘤的分期分型相关,因此可以作为判断肺癌分期及预后的新分子标志物,对于评估肺癌的发生与发展也可能具有重要意义.
- 张三凤赵健朱长军董智雄
- 关键词：肺癌组织实时定量PCR
- 应用组织芯片技术分析驱动蛋白KIF18A在卵巢癌中的表达及其意义被引量：2
- 2013年
- 采用组织芯片技术研究KIF18A蛋白与卵巢癌发生的关系,并探讨该蛋白分子治疗临床卵巢癌的潜在价值.对比100例卵巢癌病患的癌组织与正常组织芯片,KIF18A蛋白分子在正常卵巢组织、卵巢癌、转移淋巴结中皆有不同程度的表达.在卵巢癌组织中的表达明显高于正常组织(p≤0.05).卵巢浆液性乳头状腺癌的不同分期中,Ⅰ期与Ⅱ期相比,在Ⅱ期中KIF18A蛋白分子的表达明显上调(p≤0.05).同时,淋巴结转移性浆液性乳头状腺癌中的KIF18A蛋白表达量高于非转移性的浆液性乳头状腺癌(p≤0.05).这些结果表明,KIF18A蛋白分子的表达强度与卵巢癌的肿瘤临床分期以及淋巴结转移有关,可作为卵巢癌检测的新型标志物.
- 李玉刘昕朱长军刘海燕
- 关键词：驱动蛋白卵巢癌组织芯片技术
- KIF18A杆状病毒表达系统的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的KIF18A蛋白是调节有丝分裂和影响肿瘤发生发展的重要蛋白，本研究旨在建立KIF18A蛋白昆虫杆状病毒表达系统，从而可在体外高效合成KIF18A蛋白。方法先用分子克隆方法构建转移载体，然后通过基因转座作用得到重组杆状病毒，最后将重组杆状病毒转入昆虫细胞Sf-9以高效合成KIF18A蛋白。结果经过DNA测序、倒置显微镜下细胞观测和WesternBlot检测验证分析，证实已成功建立了KIF18A蛋白昆虫杆状病毒表达系统。结论明确了KIF18A杆状病毒表达系统中转移载体构建和重组病毒转染等条件，建立了高效表达KIF18A的杆状病毒表达系统。
- 赵泽栋付成华粱爽爽朱长军潘丽娜
- 关键词：杆状病毒BAC-TO-BAC
