国家科技重大专项(2008ZX-10003-012)
- 作品数：13 被引量：51H指数：4
- 相关作者：程小星曹志红王心静董梅佟爱华更多>>
- 相关机构：解放军第309医院中国人民解放军总医院第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项北京市自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组结核分枝杆菌PPE17蛋白原核可溶性表达纯化和血清学诊断研究被引量：1
- 2011年
- 目的利用原核系统可溶性表达结核分枝杆菌PPE17蛋白并进行纯化,研究其免疫学特性,并评价该重组蛋白在结核病血清学诊断方面的价值。方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中利用PCR扩增PPE17核酸序列然后克隆至融合表达载体pET-DsbC中,转入大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化,用Western Blot和EL ISA方法进行抗原性初步评价。结果融合蛋白Ds-bC-PPE17在原核系统内经IPTG诱导表达后,主要以可溶性形式表达存在,经镍柱层析获得了纯的重组蛋白,纯度达95%以上。Western Blot和EL ISA方法结果证明重组DsbC-PPE17蛋白具有较强的抗原活性。用纯化的PPE17蛋白做抗原,临床诊断结核病人血清,阳性率达60%。结论融合蛋白DsbC-PPE17在大肠埃希菌中以可溶性表达形式存在,高纯度的重组融合蛋白有可能成为结核病的血清学诊断抗原。
- 孙卫国李邦印王倩熊志红张灵霞李国利程小星
- 关键词：结核分枝杆菌可溶性表达血清学诊断
- Rv2653c在大肠埃希菌中的克隆与表达研究被引量：2
- 2010年
- 目的从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法根据H37Rv基因组序列合成引物,以PCR方法钓取Rv2653c基因,克隆到pGEM-T上,挑取阳性克隆进行测序,将正确编码基因克隆到pET24b载体上,在BL21大肠埃希菌菌株中以IPTG诱导表达重组蛋白。以金属螯合层析初步分离纯化重组蛋白,采用western blot方法对重组抗原进行抗原性初步分析。结果首先获得了重组的Rv2653c编码的蛋白,表达产率不低于20%,初步纯化纯度约90%,以人血清进行的western blot分析发现,Rv2653c重组蛋白有较好的抗原性。结论获得了Rv2653c重组蛋白为进一步寻探讨其功能及应用价值奠定基础。
- 李邦印孙卫国程小星孙昌文熊志红王仲元王金河苏锐
- 关键词：分枝杆菌结核大肠埃希菌细菌蛋白质类重组蛋白质类
- 结核抗原特异性CD4^＋中央型记忆T细胞的检测及分布特性研究被引量：4
- 2009年
- 目的比较活动期肺结核患者和纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)试验阳性健康人记忆T细胞的产生和分布特性。方法取乙二胺四乙酸(ethylene diaminete traacetic acid,EDTA)抗凝静脉血,Ficoll进行密度梯度离心获取PBMCs。采用卡介苗刺激后,通过CD4、CD154、CCR7、CD45RA4种抗体共染色,用流式细胞仪检测结核抗原特异性CD4+记忆T细胞。结果以CD4+CD154+双阳性区设门,研究结核抗原特异性CD4+记忆T细胞,结果显示,肺结核患者CD4+CD154+CD45RA-CCR7+中央型T淋巴细胞亚群分布频率显著降低(P<0.05),CD4+CD154+CD45RA+CCR7+初始T细胞亚群的比例明显增高(P<0.05)。结论肺结核患者CD4+中央型记忆T淋巴细胞亚群的产生存在异常,可能与免疫功能低下和结核病发病密切相关。
- 牛翰婕程小星王心静曹志红董梅佟爱华
- 关键词：结核CD4^+T细胞记忆T细胞
- 肺癌相关肿瘤标志物在肺部疾病患者血清中表达的对比分析被引量：8
- 2012年
- 目的探讨肺癌相关肿瘤标志物在肺部疾病患者血清中表达水平的变化及临床意义。方法采用C12蛋白芯片法检测肺癌、肺结核、肺部感染和健康对照各30例患者血清中,6种肺癌相关肿瘤标志物:糖原199(CA199)、神经原特异性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、糖原242(CA242)、糖原125(CA125)、糖原153(CA153)的表达水平。结果结核组CA199明显高于其他各组(P<0.01),NSE、CEA和CA242肺癌组明显高于其他组,CA242结核组表达最低,CA125结核组表达最高,结核组和感染组差异无统计学意义,但高于肺癌组。结论联合检测CA199、NSE、CEA、CA242、CA125、CA153对肺部疾病有较高的临床鉴别诊断价值,可以为肺部疾病的临床早期诊断治疗提供依据。
- 张立群王云霞张轩殷和郭蕾刘芸悠府伟灵
- 关键词：肿瘤标志物肺癌结核
- 电化学生物传感器在病原微生物快速检测中的研究进展被引量：4
- 2012年
- 在生物医学和临床疾病诊断等领域,病原微生物的检测至关重要。传统的检测方法检测过程周期长、灵敏度低、准确性差、操作繁琐且影响因素多,极大限制其临床应用。因此,研发快速、简单、灵敏度高、特异好的检测方法势在必行。生物传感器是以具有分子识别能力的生物体成分作为敏感元件,与物理换能器有机结合的一门交叉学科[1,2]。
- 王云霞张立群张轩府伟灵
- 关键词：电化学生物传感器病原微生物
- 肺结核患者外周血单个核细胞MCP-1表达上升被引量：4
- 2011年
- 目的 研究肺结核患者血浆单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的浓度特点及外周血单核细胞（PBMCs）经结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激后MCP-1和IFN-γ的表达及相关性.方法 20例活动期肺结核患者和16位PPD阳性健康对照,采集EDTA抗凝血,用结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激PBMCs,采用FlowCytomix流式技术检测血浆和细胞培养液上清上中MCP-1和IFN-γ的表达.结果 肺结核患者血浆MCP-1浓度与对照组比较差异无统计学意义[肺结核组（263.8±25.31）pg/ml,对照组（212.1±18.04）pg/ml,P＞0.05],但肺结核患者的血浆MCP-1水平偏高,尤其是呼吸道症状明显的患者.肺结核患者的PBMCs经结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激后,培养液上清中MCP-1的水平比血浆显著升高,肺结核患者与对照组比较差异有统计学意义[（21460±3376）pg/ml vs 10910±2141）pg/ml,P＜0.01],与IFN-γ的分泌无关（spearman r=0.1835,P＞0.05）.结论 肺结核患者血浆MCP-1浓度可能与病情发展相关;结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激外周血单个核细胞产生的MCP-1可能成为新的诊断指标之一.
- 王心静曹志红杨秉芬刘艳华蒋静程小星
- 肺结核患者CD4^+记忆T细胞亚群的检测分析被引量：18
- 2009年
- 目的:研究肺结核患者外周血总CD4+记忆T细胞及抗原特异性记忆T细胞的产生及分布规律,了解记忆T细胞在结核发病中的作用。方法:以荧光标记的抗CD4、CCR7、CD45RA3种抗体共染色,用流式细胞仪检测肺结核患者外周血总CD4+记忆T细胞;以荧光标记的抗人CD4、CD154、CCR7、CD45RA4种抗体共染色,检测结核抗原特异性CD4+记忆T细胞。通过对比分析,了解记忆T细胞分布特征。结果:肺结核患者外周血总CD4+T细胞中CD45RA+CCR7+T细胞、CD45RA-CCR7+T细胞和CD45RA-CCR7-T细胞这三群的比例分别为(59.18±16.11)%、(15.40±6.48)%和(16.30±9.97)%;而在抗原特异性CD4+T细胞中三群T细胞的比例分别为(32.67±13.94)%、(56.96±12.70)%和(8.76±5.62)%。通过统计学比较后发现,总CD4+T细胞和抗原特异性CD4+T细胞这两组之间CD45RA+CCR7+T细胞、CD45RA-CCR7+T细胞和CD45RA-CCR7-T细胞的分布比例差异均有显著性。结论:肺结核患者外周血总CD4+T细胞中以初始细胞为主,而抗原特异性CD4+T细胞中则以中央记忆细胞为主,说明结核病患者可以产生抗原特异性记忆T细胞,参与长效免疫,可能在防止再感染或者降低再感染的严重程度方面起重要作用。
- 曹志红程小星王心静牛翰婕董梅佟爱华
- 关键词：结核表位T淋巴细胞亚群
- CD27和CD28在肺结核病人抗原特异性CD4＋T细胞中的表达分析被引量：3
- 2010年
- 目的 研究肺结核病人与健康人外周血结核抗原特异性CD4^＋T细胞中CD27和CD28的表达情况,了解不同分化程度T细胞在结核发病中的作用.方法 以荧光标记的抗CD4、CD154、CD27、CD28四种抗体共染色,用流式细胞仪检测肺结核病人和健康人外周血CD4^＋ CD154^＋ T细胞中CD27和CD28的分布比例.通过对比分析,了解不同分化阶段CD4^＋T细胞在病人与健康人之间的分布差异.结果 特异性结核抗原刺激后,肺结核病人外周血CD4^＋ CD154^＋ T细胞中CD27^＋ CD28^＋（早期分化）、CD27^- CD28^＋ 和CD27^＋ CD28^-（中期分化）以及CD27^-CD28^-（晚期分化）T细胞的比例分别为（49.55±6.15）%、（26.85±3.87）%、（7.2±1.37）%和（16.35±3.97）%;而在健康人中这四群细胞的比例分别为（51.81 ±4.94）%、（29.83±5.33）%、（12.65±4.48）%和（5.7±2）%.结核病人与健康人以早期分化CD4^＋T细胞为主,在晚期分化CD4^＋T细胞比例上差异有统计学意义（t=2.26,P〈0.05）.结论 肺结核病人抗原特异性CD4^＋T细胞中晚期分化阶段细胞的比例显著高于健康人,提示抗原特异性CD4^＋T细胞的分化程度与结核病相关.
- 曹志红蒋静王心静董梅佟爱华程小星
- 关键词：抗原
- 结核病免疫治疗策略及临床应用研究现状被引量：1
- 2011年
- 长期的流行病学研究显示，虽然结核分枝杆菌感染人数众多，但只有5％～10％的感染者最终发展为活动性结核病，机体的免疫系统在结核病的发病和发展中起了关键的作用。抗结核免疫主要依赖细胞免疫，CD4＋T细胞、
- 程小星王巍
- 关键词：免疫疗法
- 肺结核患者抗原特异性IFN-γ＋TNF-α＋T细胞的检测分析被引量：4
- 2012年
- 目的研究肺结核患者与健康对照外周血T淋巴细胞中γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达情况，初步探讨多功能性T细胞在结核发病中的作用。方法分离外周血单个核细胞（PBMCs），与特异性结核抗原共培养后，用流式细胞仪检测外周血CD8＋、CD4＋T细胞以及CD8-CD8＋细胞中抗原特异性IFN-γ和TNF-α的表达情况。通过非参数检验比较患者与PPD阳性健康对照者之间的表达差异。结果根据细胞因子分泌的类型将每群细胞分成3个亚群，分别为两个单阳性细胞亚群（IFN-γ＋TNF-α＋或IFN-γ＋TNF-α＋）和一个双阳性细胞亚群（IFN-γ＋TNF-α＋）即多功能性细胞亚群。经统计学分析，肺结核患者三群细胞中抗原特异性多功能性细胞的比例均高于PPD阳性健康对照者（P=0．001，0．001和0．014），且对照组该亚群的比例大部分均在结核病患者均值以下。结论多功能性T细胞很可能在结核的疾病进展过程中发挥重要作用。
- 曹志红王心静董梅程小星
- 关键词：结核Γ干扰素肿瘤坏死因子Α
