国家自然科学基金(81070799)
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
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- Toll样受体4对牙周膜干细胞免疫学特性的影响
- 2014年
- 背景:Toll样受体4及其配体脂多糖与牙周疾病的发生、发展密切相关,牙周膜干细胞的免疫学特性在牙周组织修复重建、牙周病的治疗中发挥重要作用,而Toll样受体4及其配体对牙周膜干细胞免疫学特性的影响还不清楚。目的:探讨Toll样受体4对牙周膜干细胞免疫学特性的影响。方法:分离、培养牙周膜干细胞,与10 mg/L的Toll样受体4配体脂多糖共同培养3 d。以未经脂多糖处理的牙周膜干细胞作为对照,观察脂多糖处理的牙周膜干细胞能否引起同种异体淋巴细胞的增殖,以及对混合淋巴细胞反应和植物血凝素引起的淋巴细胞增殖的影响。通过建立Transwell培养系统建立牙周膜干细胞+植物血凝素+异体外周血单个核细胞的反应体系,测定细胞上清液中的前列腺素E2浓度。在上述反应体系进行中和实验,观察被牙周膜干细胞抑制了的淋巴细胞重新发生增殖的情况。结果与结论:无论是否与脂多糖共培养,牙周膜干细胞都没有引起等量异体外周血单个核细胞增殖,都能够抑制植物血凝素引起的淋巴细胞增殖和混合淋巴细胞反应,但是脂多糖预处理牙周膜干细胞的免疫抑制作用显著低于无脂多糖组。在牙周膜干细胞+植物血凝素+异体外周血单个核细胞的反应体系中,前列腺素E2浓度显著升高。中和实验发现,前列腺素E2的拮抗剂吲哚美辛基本恢复了被牙周膜干细胞抑制的淋巴细胞增殖。提示,脂多糖减弱了牙周膜干细胞的免疫抑制特性,该效应由前列腺素E2减少引起。
- 丁刚魏立梅张丽汤瑞玲
- 关键词：干细胞牙周膜TOLL样受体4脂多糖类牙周膜干细胞TOLL样受体脂多糖
- 牙周膜干细胞对口腔表皮样癌KB细胞增殖影响的研究
- 2015年
- 目的探讨牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)对口腔表皮样癌细胞系KB细胞增殖的影响及其机制。方法取拔除的阻生第三磨牙和正畸减数牙,采用酶消化法分离PDLSCs。应用Transwell培养小室将PDLSCs和KB细胞以不同的比例混合培养,建立共培养体系。48h后,应用MTT法观察KB细胞增殖情况。在部分实验的培养体系中加入抗IL-6抗体,同法观察KB细胞增殖。收集共培养48h的KB细胞,通过流式细胞术检测其凋亡情况,RT-PCR法检测其Caspase-3的表达,蛋白质印迹法检测其β-catenin表达情况。收集PDLSCs,采用RT-PCR法检测其IL-6的表达。结果 PDLSCs与KB细胞共培养48h,PDLSCs∶KB细胞数量比为1∶1时,吸光度值为1.33±0.18,与单独KB细胞组的2.65±0.33相比,差异有统计学意义,P=0.041;PDLSCs∶KB细胞数量比为5∶1时,吸光度值为1.06±0.18,与单独KB细胞组相比,差异有统计学意义,P=0.001。表明PDLSCs能够显著抑制KB细胞的增殖。PDLSCs∶KB细胞数量比为1∶1时,KB细胞的凋亡率为(39±5)%,与单独KB细胞组的(15±4)%相比,P=0.022;PDLSCs∶KB细胞数量比为5∶1时,KB细胞的凋亡率为(51±7)%,与单独KB细胞组相比,P=0.001。在PDLSCs与KB细胞的共培养体系中,加入抗IL-6抗体后,PDLSCs抑制KB细胞的增殖作用显著减轻。RT-PCR实验发现,共培养48h后的PDLSCs的IL-6表达升高。蛋白质印迹法检测结果发现,培养48h后的KB细胞β-catenin表达无明显变化。结论 PDLSCs能抑制口腔表皮样癌KB细胞的增殖和促进KB细胞凋亡。
- 王建波丁刚王清魏立梅
- 关键词：牙周膜间充质干细胞口腔癌细胞增殖
- 扁桃体间充质干细胞免疫学特性的初步研究被引量：1
- 2015年
- 目的 探讨扁桃体间充质干细胞（tonsil mesenchymal stem cells,TMSCs）的免疫学特性及机制.方法 取慢性扁桃体炎患儿的扁桃体组织,分离、培养TMSCs,通过流式细胞术检测HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ、CD80、CD86等免疫分子的表达情况.以牙周膜干细胞作为对照,观察TMSCs能否引起同种异体外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）的增殖,以及TMSCs对混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR）和植物血凝素（phytohemagglutinin,PHA）引起的淋巴细胞增殖的影响.建立TMSCs＋PHA＋异体PBMCs、TMSCs＋MLR的培养体系,测定细胞上清液中的犬尿氨酸浓度.在上述反应体系进行中和实验,观察被TMSCs抑制了的淋巴细胞重新发生增殖的情况.每个实验重复3次,每组6个佯本.统计学方法采用方差分析,P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 TMSCs表达HLA-Ⅰ,但不表达HLA-Ⅱ和共刺激分子CD80、CD86.TMSCs与异体PBMCs共培养5d后,刺激指数为1.38±0.26,而单纯PBMCs培养5d后的刺激指数为1.22±0.28,2组差异无统计学意义（P＞0.05）,证实TMSCs不会引起异体PBMCs增殖.TMSCs与异体PBMCs、PHA共培养5d后,刺激指数分别为1.49±0.29（TMSCs∶ PBMCs为0.5∶1）和1.23±0.22（TMSCs∶ PBMCs为1∶1）,而PBMCs＋PHA组培养5d后的刺激指数为4.60±0.81,2组之间的差异均有统计学意义（P＜0.05）,说明TMSCs能够抑制PHA引起的淋巴细胞增殖.TMSCs与MLR共培养5d后,刺激指数分别为1.29±0.23（TMSCs∶ PBMCs为0.5∶1）和1.26±0.27（TMSCs∶ PBMCs为1∶1）,而MLR培养5d后的刺激指数为3.04±0.66,2组之间的差异均有统计学意义（P＜0.05）,说明TMSCs能够抑制MLR引起的淋巴细胞增殖.在TMSCs＋PHA＋异体PBMCs、TMSCs＋MLR的培养体系中,犬尿氨酸浓度显著升高,分别为（26.0±2.3） μmol/L和（23.5±4.5）μmol/L.中和实验发现,1-甲基-L-色氨酸基本恢复了被TMSCs抑制的淋巴细胞增殖.结论 TMSCs具有低免疫原性和免�
- 丁刚魏立梅孙伟元张丽
- 关键词：扁桃体间质干细胞免疫
- 脂多糖对牙周膜干细胞生物学特性的影响被引量：3
- 2014年
- 探讨脂多糖（LPS）对牙周膜干细胞（PDLSCs）生物学特性的影响.方法 分离、培养PDLSCs,并检测其间充质干细胞标志物STRO-1、CD146的表达情况.在含有LPS的培养基中培养PDLSCs,分别进行以下实验：（1）应用甲苯胺蓝染色法和Brdu掺入法分别检测PDLSCs的克隆形成率和细胞增殖率;（2）对PDLSCs进行骨向和脂肪向诱导,采用茜素红染色和油红O染色检测其骨向和脂肪向分化潜能;（3）应用ELISA法测定培养上清中IL-6的浓度;（4） Western blot检测PDLSCs磷酸化ERK1/2的表达情况.结果 PDLSCs表达STRO-1、CD146,阳性率分别为28.6％±2.3％、86.7％±3.9％.LPS对PDLSCs的克隆形成率和细胞增殖率没有影响.在含有LPS的矿化诱导液中,矿化面积明显增多,说明LPS能够促进PDLSCs骨向分化.脂肪向诱导实验发现,LPS组和无LPS组的油红染色阳性面积相近,两组无显著性差异.LPS促进IL-6的分泌和ERK1/2活化,并具有剂量依赖性.结论 LPS改变了PDLSCs的生物学特性,提示炎性状态可能影响PDLSCs介导的牙周组织再生.
- 丁刚张丽孙婷魏立梅
- 关键词：牙周膜干细胞脂多糖分化
- 扁桃体间充质干细胞的分离、培养和鉴定被引量：3
- 2014年
- BMSC在体外能够分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、肌细胞等,是一种良好的种子细胞,在骨组织工程和再生医学中具有广阔的应用前景[1].但是,培养BMSC通常需要抽取骨髓,可引起局部疼痛不适等并发症,且获得的BMSC数量、增殖力、多向分化潜能随着供体年龄的增长而下降[2].因此,寻找一种取材方便、步骤简单、供者痛苦小的分离间充质干细胞的方法,日益引起研究者的重视.笔者探讨从扁桃体组织中分离、培养间充质干细胞的可行性及其生物学特性.
- 丁刚张丽方军孙伟元汤瑞玲孙婷
- 关键词：间充质干细胞扁桃体多向分化潜能BMSC骨组织工程
- 利用经修饰的survivin短肽体外诱导对胃癌细胞系具有限制性杀伤作用的特异性细胞毒性T细胞
- 2012年
- 采用一种简单有效的方法体外诱导经修饰的survivin短肽特异性细胞毒性T细胞,并观察其对胃癌细胞的杀伤作用。选取对HLA-A2分子亲和力更高的survivin短肽(96—104,LLLGEFLKL,HLA-A2限制性)以更有效地诱导特异性T细胞。选取正常志愿者外周血单核细胞,筛选其中HLA-A2+者,利用HLA-A2/survivin短肽有效诱导特异性细胞毒性T细胞。Pentamer实验检测特异性细胞毒性T细胞比率。Elispot实验检测细胞毒性T细胞IFN-γ分泌能力。选取胃癌细胞系MKN28、SGC7901及KATO Ⅲ,检测其HLA-A2和survivin表达情况。检测特异性细胞毒性T细胞对三种细胞系的杀伤效果。Pentamer实验结果显示,HLA-A2/survivin短肽刺激之前短肽/HLA Pentamer和CD8双阳性细胞仅为0.06%,接受刺激后双阳性细胞增加到27.5%。Elispot实验结果显示HLA-A2/survivin短肽刺激后IFN-γ分泌细胞比率明显强于阴性对照组。PCR结果显示,KATO Ⅲ为HLA-A2+,MKN28和SGC7901为HLA-A2-。Western Blotting结果显示KATO III和SGC7901为survivin阳性,MKN28为survivin阴性。特异性细胞毒性T细胞杀伤结果显示,细胞能有效杀伤KATO III细胞,但对其他两种细胞杀伤效果不明显。p<0.01。经修饰的survivin短肽能够有效诱导特异性细胞毒性T细胞,并对胃癌细胞系有HLA-A2/survivin限制性杀伤。
- 孙婷魏立梅丁刚
- 关键词：SURVIVINHLA-A2外周血单核细胞胃癌细胞系
- 骨向分化骨髓间充质干细胞的免疫学特性研究
- 2012年
- 目的探讨骨向分化骨髓问充质干细胞（bonemesenchymalstemcells，BMSCs）的免疫学特性。方法正常成人骨髓分离的BMSCs在骨向诱导培养基中培养2周后，将未分化的BMSCs和骨向分化的BMSCs与同种异体T淋巴细胞、植物血凝素（PHA）共培养，MrITr法检测T淋巴细胞的增殖情况；ELISA法测定骨向分化2周的BMSCs上清以及共同反应5d的混合淋巴细胞反应（mixedlymphocytesreaction，MLR）上清转化生长因子（transforminggrowthfactor-β1，TGF—β1）的浓度，并通过加入抗TGF—β抗体检测MLR情况。结果无论是未分化的BMSCs还是骨向分化的BMSCs都不会引起同种异体T淋巴细胞的增殖，并且都能抑制PHA诱导的T淋巴细胞增殖。MLR中的TGF-β1浓度显著升高。抗TGF—β抗体能够抵消骨向分化的BMSCs免疫抑制作用。结论骨向分化的BMSCs具有低免疫原性和免疫抑制特性。
- 方军李华壮丁刚赵光宗高克海陈景春
- 关键词：骨髓间质干细胞细胞分化免疫抑制
