国家自然科学基金(81372965) 作品数:11 被引量:14 H指数:3 相关作者: 吴永会 王玥 王声远 张琳 付瑶 更多>> 相关机构: 哈尔滨医科大学 牡丹江市第一人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
白藜芦醇对镍染毒NIH/3T3细胞COX-2 mRNA表达影响的实验研究 2017年 研究白藜芦醇对镍染毒小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)损伤的保护作用。将NIH/3T3细胞分为镍染毒组和白藜芦醇干预组,染毒组给予终浓度分别为0.00、100.00、200.00、400.00μg/ml的三氧化二镍(Ni_2O_3)混悬液。干预组在染毒前加入白藜芦醇溶液(终浓度为20μmol/L)预处理2 h,其他处理与染毒组一致。采用MTT法检测细胞生长抑制率;实时定量PCR(real time PCR,RT-PCR)法检测细胞中环氧合酶-2(COX-2)mRNA的表达水平。结果显示,随着染毒浓度的升高,染毒组和干预组细胞生长抑制率均明显增加。在Ni_2O_3染毒浓度100.00、200.00、400.00μg/ml时,干预组抑制率均低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05);干预组COX-2mRNA相对表达量分别为4.18±0.18、5.25±1.10、7.34±0.96。干预组COX-2基因相对表达量均低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。提示,随着镍染毒浓度的增加,NIH/3T3细胞损伤程度增加,COX-2 mRNA表达水平增高,白藜芦醇对镍所致的细胞损伤具有一定的保护作用。 辛芮 王玥 李昶 周艾佳 杨越 付瑶 吴永会关键词:镍 COX-2 白藜芦醇 抗坏血酸对镍染毒NIH/3T3细胞P53及Bcl-2蛋白表达的影响 被引量:1 2018年 目的研究抗坏血酸(Ascorbic acid,AA)对镍染毒小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)P53、Bcl-2蛋白表达的影响。方法研究采用染毒浓度为50μg/mL镍精炼尘诱导建立损伤模型,通过测定细胞相对存活率、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GsH-Px)活力、过氧化氢(H2O2)和丙二醛(MDA)含量以及p53(野生型)、Bcl-2蛋白表达情况,探讨不同剂量抗坏血酸(25、50、100mmol/L)对镍精炼尘诱导NIH/3T3细胞损伤的保护作用。结果抗坏血酸Ⅲ组可以使NIH/3T3细胞存活率显著提高;细胞凋亡率降低;SOD和GSH—Px的活力明显增加,差异有统计学意义(P〈0.05);同时可以使MDA和H202水平,以及细胞外LDH酶活力明显降低,差异有统计学意义(P〈0.05)。抗坏血酸Ⅱ、Ⅲ组Bcl-2蛋白表达水平均高于镍精炼尘组,差异有统计学意义(P〈0.05);抗坏血酸各剂量组p53蛋白表达水平均低于镍精炼尘组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论随着抗坏血酸浓度的增加,氧化损伤水平降低,抗氧化酶水平上升,细胞凋亡减少,p53表达降低,Bcl-2表达增加,表明抗坏血酸对镍精炼尘染毒NIH/3T3细胞损伤具有一定的保护作用。 田超 王玥 李吉平 王声远 夏冰 杨越 李昶 王琪 吴永会关键词:镍 抗坏血酸 蛋白质P53 镍冶炼烟尘染毒致NIH/3T3细胞线粒体损伤及L-抗坏血酸的干预作用 2016年 目的研究镍冶炼烟尘对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)线粒体损伤的影响及L-抗坏血酸的保护作用。方法将NIH/3T3细胞分为染毒组和L-抗坏血酸干预组。染毒组加入镍冶炼烟尘配制浓度分别为0.00、25.00、50.00、100.00g/ml的混悬液,干预组在染毒前额外加入L-抗坏血酸(100mmol/L)。利用MTT法检测细胞生长抑制率,钙黄绿素-AM荧光探针检测细胞线粒体膜通道孔(MPTP)变化,JC-1荧光染色观察并检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化,比色法定量检测细胞线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性变化。结果随着染毒浓度升高,染毒组和干预组细胞生长抑制率均明显增加。在25.00、50.00、100.00μg/ml浓度时干预组抑制率均低于染毒组,差异有统计学意义(P〈0.05)。在50.00、100.00μg/ml浓度时,染毒组MPTP荧光强度为564.940±14.015、436.613±31.275;干预组MPTP荧光强度为611.203±20.053、498.840±21.308,干预组的荧光强度均高于染毒组,差异有统计学意义(P〈0.05);荧光显微镜下干预组绿色荧光强度低于染毒组,干预组红色荧光强度高于染毒组。在25.00、50.00、100.00±g/ml浓度时,染毒组MMP绿色与红色荧光比值分别为16.579±0.220、14.453±0.280、11.133±1.007;干预组MMP绿色与红色荧光比值分别为18.697±0.163、16.260±0.520、13.703±0.715,干预组绿色与红色荧光比值均高于染毒组,差异有统计学意义(P〈0.05)。在25.00、50.00、100.00μg/ml浓度时,干预组的复合物Ⅰ、Ⅳ活性均高于染毒组,在100μg/ml浓度时,复合物Ⅱ染毒组活性为0.754±0.013,干预组活性为0.827±0.032,干预组的复合物Ⅱ活性高于染毒组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论随着镍冶炼烟尘浓度升高,NIH/3T3细胞线粒体损伤程度上升,L-抗坏血酸对镍冶炼烟尘� 潘昱霖 王玥 付瑶 王声远 谭文乔 陈嘉述 吴永会关键词:冶炼烟尘 线粒体 L-抗坏血酸 镍冶炼烟尘诱导NIH/3T3细胞氧化损伤作用的研究 被引量:3 2014年 目的 研究镍冶炼烟尘对NIH/3T3细胞的毒性作用和氧化损伤作用.方法 使用采自我国某镍冶炼厂的镍冶炼烟尘,用PBS配制浓度为0、6.25、12.50、25.00、50.00和100.00μg/ml的镍冶炼烟尘悬液,对NIH/3T3细胞染毒6h,进行CCK-8、中性红摄取(neutral red uptake,NRU)和乳酸脱氢酶(LDH)泄漏实验观察镍冶炼烟尘的细胞毒性;检测过氧化氢酶(CAT)活力、超氧化物歧化酶(SOD)抑制百分率及丙二醛(MDA)含量,评价细胞氧化损伤程度.结果 染毒组NIH/3T3细胞相对存活率随着镍冶炼烟尘浓度的增加而降低,CCK-8实验100 μg/ml染毒剂量组细胞生长抑制率达到86%,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05);LDH活力随染毒浓度的增加而增加,12.50、25.00、50.00、100.00 μg/ml染毒剂量组LDH活力明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,25.00、50.00和100.00μg/ml染毒剂量组细胞CAT活力明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,随着染毒剂量增加,SOD抑制百分率明显上升,MDA含量增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 NIH/3T3细胞暴露于镍冶炼烟尘6h后能够造成抗氧化系统损伤,导致细胞死亡. 巴婧翀 王玥 王声远 焦冬 吴永会关键词:细胞毒性 丙二醛 过氧化酶 镍冶炼烟尘对大鼠肺细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响 被引量:2 2016年 目的探讨镍冶炼烟尘对大鼠肺组织细胞凋亡相关蛋白p-JNK、Bax、Caspase-9和Caspase-3表达水平的影响。方法健康Wistar雄性大鼠40只,随机分为5组:对照组及镍冶炼烟尘0.50、1.00、2.00、4.00 mg/kg组,第1天及第16天非暴露式气管内滴注受试尘,30 d处死。Hoechst33258法观察肺内细胞形态学改变;分光光度法测定肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的含量;免疫印迹(Western blot)法检测肺细胞p-JNK、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,各染毒组大鼠肺组织细胞凋亡率均增高,差异有统计学意义(P<0.05);4.00 mg/kg染毒组细胞出现胞核固缩碎裂等凋亡早期形态学特征;各染毒组大鼠肺组织中SOD、GSH-Px活力较对照组显著降低,MDA含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);染毒组大鼠肺组织Bax蛋白表达均高于对照组(P<0.05),肺组织p-JNK、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。结论镍冶炼烟尘引起大鼠肺组织氧化损伤,同时促进p-JNK、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达,最终产生凋亡。 杨越 王玥 安学军 张琳 谭文乔 韩丹 吴永会关键词:镍冶炼烟尘 氧化应激 蛋白表达 甘肃省某镍矿职业病危害调查及评价 被引量:3 2015年 目的识别、分析与评价甘肃省某镍矿可能产生的职业病有害因素及其危害程度,提出相应的防护对策与措施,预防和控制职业病的发生。方法依据相关法律、法规和规范标准,采用现场职业卫生调查和检测法。结果该镍矿在开采过程中存在的主要职业病危害因素是矽尘、其他粉尘、水泥粉尘、一氧化碳、二氧化氮、二氧化硫、噪声、高温。检测16个粉尘作业工种,合格11个,合格率68.75%;对18个噪声作业点进行噪声测定,合格作业点16个,合格率88.89%。对一氧化碳、二氧化氮、二氧化硫和气象条件进行检测,结果均符合相关标准要求。结论尽管有针对性地采取了通风防护工程,但该镍矿粉尘和噪声危害严重,建议企业配备良好的防护设备,同时保证防护设施正常运行,有效地预防与控制职业病的发生。 王玥 王声远 张琳 孙梓程 于翠平 周艾佳 辛芮 吴永会关键词:镍矿 职业病危害 白藜芦醇对镍精炼烟尘致大鼠肺组织ΔNp63表达的干预 2015年 观察染镍尘大鼠肺组织ΔNp63的表达,研究白藜芦醇对镍染毒大鼠肺损伤的保护作用。取雄性Wistar大鼠肺部灌注毒物制备肺损伤模型,受试物为采集自某镍工厂车间的镍精炼沉降尘。按大鼠体重随机分为模型组、白藜芦醇高剂量组(600 mg/kg)和低剂量组(300 mg/kg),经口灌胃给药,另设正常对照组,常规喂养10周。观察染毒大鼠体重、状态的变化,通过免疫组织化学的方法观察肺组织中ΔNp63的表达。HE染色结果表明,镍精炼烟尘对大鼠肺部造成的损伤明显;而在白藜芦醇干预下,肺部损伤减弱。经Kruskal-Wallis H秩和检验:χ2=18.3085,P<0.0001,三组的蛋白质表达强度有显著差异。随着白藜芦醇浓度增高,ΔNp63表达降低。提示白藜芦醇干预下的大鼠肺组织中ΔNp63表达明显降低,说明白藜芦醇对镍致大鼠肺损伤有明显的保护作用。 谭文乔 王玥 王声远 王苏仪 陈嘉述 潘昱霖 吴永会关键词:镍 白藜芦醇 ΔNP63 表没食子儿茶素没食子酸酯对硫酸镍诱导Beas-2B细胞氧化损伤的保护作用 2016年 为确定表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人支气管上皮Beas-2B细胞的抗氧化作用,本实验采用500μmol/L硫酸镍诱导建立细胞氧化损伤模型,通过测定细胞存活率、ROS生成量、谷胱甘肽水平及丙二醛含量,探讨不同剂量(2.5、5、10μmol/L)EGCG对硫酸镍诱导氧化损伤Beas-2B细胞的保护作用。结果表明,EGCG可以提高Beas-2B细胞的存活率,降低ROS生成量,提高GSH含量,降低MDA水平(P<0.05)。提示EGCG对Beas-2B细胞具有保护作用,其机制可能与减少细胞氧化损伤有关。 周艾佳 安学军 杨越 王玥 辛芮 高然 吴永会关键词:硫酸镍 BEAS-2B细胞 镍冶炼工人肺癌组织中ΔNp63蛋白表达的变化 被引量:1 2016年 采用蛋白质免疫组织化学(SP)法检测镍冶炼工肺癌细胞、非镍工肺癌细胞和正常肺成纤维组织中ΔNp63的表达,以探讨镍冶炼厂工人肺癌的发生及相关蛋白ΔNp63的变化。镍冶炼工肺癌组织中ΔNp63的蛋白表达量,与正常肺间质细胞相比增加77.29%,与非镍工肺癌细胞中ΔNp63的表达量相比增加26.73%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。提示ΔNp63的过度表达可能参与了肺癌发生的重要阶段,在发病机制中起到重要作用。 陈嘉述 王玥 王声远 谭文乔 吴永会关键词:肺癌 ΔNP63 免疫组织化学 镍冶炼烟尘对NIH/3T3细胞bcl-2和bax蛋白表达水平的影响 被引量:3 2015年 目的 研究镍冶炼烟尘对NIH/3T3细胞bcl-2和bax蛋白表达水平的影响.方法 取生长对数期的NIH/3T3细胞,置于镍冶炼烟尘浓度分别为0、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 μg/ml的培养液中培养24 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞LDH活力、Hoechst33342法观察细胞凋亡形态学改变以及蛋白免疫印迹法(western blot)检测NIH/3T3细胞bcl-2和bax蛋白表达水平.结果 与对照组比较,各时点各染毒组细胞相对存活率明显降低,除作用7d6.25 μg/ml染毒组外,差异均有统计学意义(P<0.05).胞外LDH活力随染毒浓度的增加而升高,各染毒组胞外LDH活力明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).经100.00 μg/ml镍冶炼烟尘作用24 h细胞呈现染色质浓缩、细胞体积缩小等凋亡早期形态学特征.6.25、12.50、25.00μg/ml染毒组细胞bcl-2蛋白表达分别为0.58±0.01,0.63±0.01,0.57±0.01,均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),50.00、100.00 μg/ml染毒组细胞bcl-2蛋白表达分别为0.35±0.01,0.27±0.01,均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).6.25μg/ml染毒组细胞bax蛋白表达量为0.58±0.00,明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),50.00、100.00μg/ml染毒组bax蛋白表达量分别为0.71±0.01,0.78±0.02,均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 NIH/3T3细胞暴露镍冶炼烟尘24h后能够引起细胞凋亡的启动,并且氧化应激可能诱导其凋亡的发生. 张琳 王玥 马文翰 付瑶 韩丹 吴永会关键词:氧化性应激 BCL-2 BAX