山东省自然科学基金(Y2002C24)
- 作品数：10 被引量：35H指数：4
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- 淋巴细胞和巨噬细胞去除对人骨髓造血细胞体外扩增效应的影响
- 2004年
- 为了探讨淋巴细胞和巨噬细胞去除对人骨髓造血细胞体外扩增效应的影响 ,采用抗CD3、抗CD5 6和抗CD14单克隆抗体介导的补体细胞毒方法 ,去除骨髓单个核细胞 (MNC )中的T淋巴细胞、NK细胞和巨噬细胞 ,流式细胞技术 (FACS )分析细胞表面标志。将经不同单抗处理的骨髓MNC加入含有多种造血生长因子的培养基中进行体外有核细胞扩增 ,并观察多向祖细胞集落 (CFU GEMM )的形成能力。结果显示 ,经抗CD3、抗CD5 6、抗CD14单抗分别处理和用上述三种单抗共同处理的骨髓MNC中相应的靶细胞与MNC对照组相比均有明显的降低。经多种造血生长因子刺激培养 2 0d ,骨髓MNC对照组有核细胞总数扩增了 6 5倍 ,T细胞、NK细胞和巨噬细胞去除组分别扩增了 90倍、 77 2倍和 6 7 4倍 ,而三种细胞共同去除组仅为 2 86倍。骨髓MNC对照组CFU GEMM产率为 16 1 5 0± 12 5 4 ,T细胞去除组CFU GEMM产率为 370 0 0± 5 8 2 2 ,明显高于前者 ,差异显著 (P <0 0 0 5 )。NK细胞去除组为 2 0 5 5 0± 30 73,与MNC对照组相比也有显著差异 (P <0 0 5 )。巨噬细胞去除组为 16 3 2 5± 18 5 4 ,三种细胞共同去除组仅为 4 9 75± 9 98。本文结果提示 ,单纯去除骨髓MNC中的T淋巴细胞或NK细胞可明显促进人骨髓造血细胞的体外扩增效应。
- 张建华张彩张云孙汭王郡甫
- 关键词：T淋巴细胞NK细胞巨噬细胞骨髓造血细胞体外扩增
- 人NKG2D的基因克隆及其在CHO细胞中的表达被引量：4
- 2006年
- 目的:构建重组人NKG2D真核表达载体并在CHO细胞表达重组人NKG2D。方法:用RT-PCR方法从NK-92细胞中调取NKG2D基因片段,克隆到pGEM-TEasy载体并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制内切酶EcoRI和BamHI消化pGEM-TEasy/NKG2D重组质粒,分离NKG2D片段,并插入真核表达质粒pEGFP-N1的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pEGFP-N1/NKG2D。然后经脂质体介导转染CHO细胞。应用荧光显微镜观测、Westernblot方法和免疫组化染色对转染细胞内pEGFP-N1/NKG2D的表达进行鉴定。结果:RT-PCR扩增获得650bp基因片段,经DNA序列分析证明所获得的DNA序列与文献报道的NKG2D序列一致。转染的CHO细胞在荧光显微镜下发出强绿色荧光,Westernblot分析显示重组蛋白能特异地与抗人NKG2D单克隆抗体结合;免疫组化检测显示,转染的CHO中有棕色颗粒,证明所构建的NKG2D真核表达载体可以在细胞中表达。结论:构建了人NKG2D的哺乳动物细胞表达载体,并成功地在CHO细胞中获得重组人NKG2D的表达。
- 许晓群陈雪梅张彩游力赵昌盛王郡甫张建华
- 关键词：NKG2D受体基因转染基因表达CHO细胞
- 干扰素α对恶性造血细胞系主要组织相容性复合体I类链相关蛋白A表达的上调作用被引量：1
- 2011年
- 目的观察干扰素a（IFN-a）对恶性造血细胞系主要组织相容性复合体（MHC）I类链相关蛋白A（MICA）表达的影响。方法反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测人类慢性髓系白血病细胞K562及人类伯基特淋巴瘤细胞Raji细胞MICAmRNA的表达，免疫组织化学法检测MICA蛋白的表达，四甲基偶氮唑蓝（MTF）比色法检测人类外周血自然杀伤（NK）细胞对肿瘤细胞的杀伤。结果K562细胞MICA表达阳性，Raji细胞MICA表达阴性。Raji和K562细胞分别在1000U／ml IFN-a诱导24h和48h时MICAmRNA开始表达上调（t=17．016，P〈0．05；t=5．616，P〈0．05）。72hRaji细胞和K562细胞分别在500U／ml和1000U／ml诱导条件下MICAmRNA表达开始上调（t=6．622，P〈0．05；t=9．071，P〈0．05）。IFN—Ot对MICAmRNA表达的上调作用呈一定时间和剂量依赖关系，且蛋白与mRNA表达水平一致。1000U／ml IFN—a诱导72h后，Raji细胞和K562细胞对NK细胞杀伤的敏感性明显上调（t=20．016，P〈0．05；t=7．969，P〈0．05），抗MICA抗体封闭MICA后，NK细胞对Raji细胞杀伤率恢复至诱导前水平（t=0．393，P〉0．05），而K562细胞则低于诱导前水平（t=9．841，P〈0．05）。结论IFN—a上调了恶性造血细胞中MICA基因的转录表达，继而增强了NK细胞对其识别与杀伤。
- 吴慧牛家峰张彩
- 关键词：干扰素A杀伤细胞MICA
- MHCI类样分子(MICA)在部分肿瘤组织和肿瘤细胞系中的表达及临床意义被引量：15
- 2005年
- 目的:探讨MHCI类样分子(MICA)在肿瘤组织和肿瘤细胞系中的表达及其临床意义。方法:分别采用半定量RT-PCR和免疫组织化学技术检测肿瘤组织和肿瘤细胞系MICA表达,MTT法测定NK细胞细胞毒活性。结果:人红白血病细胞K562、喉癌细胞系Hep2、宫颈癌细胞系Hela、肝癌细胞系HepG2和结直肠癌细胞系HT29均有MICAmRNA和蛋白表达,而人Burkitt淋巴瘤Raji和高转移肺癌PG不表达MICA。MICA表达阳性的肿瘤细胞对NK杀伤敏感性明显高于MICA阴性者。多数肿瘤组织存在MICAmRNA和蛋白表达,但并非在所有肿瘤均有表达,癌旁组织均无MICA表达。结论:肿瘤细胞表达MICA可激发NK细胞对肿瘤的杀伤,NKG2D及其配体的相互作用在肿瘤免疫监视中起着非常重要的作用,肿瘤细胞分泌sMICA分子为肿瘤发生免疫逃逸的机制之一。
- 张彩许晓群张建华王郡甫冯进波张建田志刚
- 关键词：肿瘤MICANK细胞NK细胞受体免疫逃逸
- sMICA基因的克隆表达及其纯化被引量：1
- 2005年
- 目的构建重组MICA原核表达载体并探讨MICA对NK细胞毒效应的影响。方法经RT-PCR从Hela细胞获取MICA基因,经适当酶切后构建表达载体pBV220-MICA,转入大肠杆菌DH5α进行表达。重组MICA蛋白经纯化后与NK92细胞孵育观察对NK细胞毒效应的影响。结果带有重组质粒pBV220-MICA的大肠杆菌经热诱导后,以可溶性形式表达重组MICA蛋白,纯化后的重组MICA蛋白纯度为95%。经重组MICA处理的NK92细胞对MICA表达阳性的肿瘤细胞的杀伤作用明显降低。结论构建了pBV220-MICA重组质粒,并在大肠杆菌中获得可溶性表达,为研究MICA与NK细胞受体的相互作用机制奠定了基础。
- 王郡甫许晓群张彩冯进波张建华刘金生于锡巧田志刚
- 关键词：MICA基因克隆原核表达
- NKG2D真核表达载体的构建及其对YT细胞生物学功能的影响被引量：1
- 2005年
- 目的建立NK细胞受体NKG2D真核表达载体,通过转染NK细胞系YT,初步探讨NKG2D分子对YT细胞系杀伤功能的增强作用。方法用RT-PCR方法从NK-92细胞中调取NKG2D基因片段,克隆到pGEM-T Easy载体并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ消化pGEM-T Easy/NKG2D重组质粒,分离NKG2D片段,并插入真核表达质粒pEGFP-N1的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pEGFP-N1/NKG2D。然后经脂质体介导转染CHO细胞和YT细胞。应用荧光显微镜观测、Western blot方法和免疫组化染色对转染细胞内pEGFP-N1/NKG2D的表达进行鉴定,MTT方法观察YT细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。结果RT-PCR扩增获得650bp基因片段,经DNA序列分析证明所获得的DNA序列与文献报道的NKG2D序列一致。转染的CHO细胞在荧光显微镜下发出强绿色荧光,Western blot分析显示重组蛋白能特异地与抗人NKG2D单克隆抗体结合;免疫组化检测显示,转染的CHO中有棕色颗粒,证明所构建的NKG2D真核表达载体可以在细胞中表达;转染NKG2D真核表达载体的YT细胞对乳腺癌细胞具有更强的杀伤效果。结论所获得的表达NKG2D分子的真核表达载体,通过转染YT细胞,初步鉴定所表达NKG2D分子具有生物学功能,可以提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。
- 许晓群张建张彩游力张建华刘金生王郡甫高春义田志刚
- 关键词：NKG2D受体NK细胞基因转染真核表达
- MHC I类链相关蛋白A的表达调控与抗肿瘤免疫被引量：5
- 2006年
- MHC I类链相关蛋白A(MICA)是非经典的HLA I类分子,是活化性受体NKG2D的配体,在感染、肿瘤及细胞应激情况下表达上调,其表达量及形式的变化,直接影响多种免疫效应细胞功能表现。本文就近年来对MICA的表达调控以及与抗肿瘤免疫关系方面进行综述。
- 牛家峰张彩
- 关键词：MICANKG2D肿瘤
- IFN-α对宫颈癌细胞MHC-I类链相关蛋白A表达的上调作用被引量：3
- 2006年
- 目的:观察IFNα对宫颈癌细胞MHCI类链相关蛋白A(MICA)表达及功能的影响。方法:以IFNα诱导宫颈癌细胞系HeLa和Caski后,用半定量RTPCR和免疫组化染色法观察诱导前后MICAmRNA和其蛋白表达的变化,用MTT比色法检测诱导前后宫颈癌细胞对外周血NK细胞杀伤敏感性的变化。结果:经IFNα诱导后,HeLa和Caski细胞中MICAmRNA和其表面MICA蛋白的表达水平均明显上调,并呈一定的时间和剂量依赖关系。NK细胞对MICA表达较高的HeLa细胞的杀伤活性,明显高于对MICA弱表达的Caski细胞。经1×106U/LIFNα诱导3d后,两种细胞对NK细胞杀伤的敏感性均明显增强(P<0.01)。结论:IFNα可上调MICA在肿瘤细胞表面的表达,并可增强肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性。
- 牛家峰张彩张建华许晓群张维东王郡甫高春义
- 关键词：宫颈癌IFN-ΑMICANK细胞NKG2D
- NK细胞免疫调节功能的前沿问题——“NK-reg”是否存在被引量：1
- 2005年
- 张彩张建魏海明田志刚
- 关键词：REG机体内环境细胞因子网络自身抗原
- 肿瘤免疫逃逸与肿瘤免疫治疗的思考被引量：5
- 2005年
- 张云陈剑平张彩
- 关键词：肿瘤免疫逃逸肿瘤免疫治疗肿瘤抗原
