江苏省教育厅自然科学基金(08KJD350002)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 相关领域：生物学更多>>
- 重组人ICOS胞外区原核表达载体的构建及表达
- 2011年
- 构建重组人ICOS胞外区原核表达载体,并进行初步表达。根据GenBank基因库中ICOS胞外区基因序列设计引物,用RT-PCR法从人T淋巴瘤细胞Jurkat的总mRNA中扩增出ICOS胞外区基因并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞外区同源二聚体,并将ICOS胞外区同源二聚体插入到原核表达载体PET-28a中,并对重组质粒进行鉴定。转化E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白。结果获得ICOS胞外区同源二聚体基因大小为757 bp,构建的重组表达载体中目的基因序列完全正确。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约为31 ku。这说明成功地构建人重组ICOS胞外区同源二聚体的原核表达载体,并实现在大肠杆菌中大量表达。为下一步蛋白纯化及制备抗ICOS单克隆抗体奠定了基础。
- 李文秀周凤云毛伟平潘杨滨何志娟徐翀刘宣宣
- 关键词：ICOSJURKAT细胞重叠延伸PCR原核表达
- 抗HepG2核糖体展示抗体库的构建
- 2009年
- [目的]构建鼠源抗HepG2核糖体展示抗体库。[方法]以培养的HepG2肝癌细胞4次免疫Balb/c小鼠,取脾脏分离总RNA,逆转录合成第一条链,PCR扩增重链可变区和轻链k,经linker DNA连接形成VH/k核糖体展示抗体库。将VH/k与pMD18-T载体的连接产物转化E.coli TG1,蓝白斑筛选,挑取白色菌落,提取质粒,PCR鉴定,并测序。[结果]VH和k链得到正确的扩增,长度分别为399和647bp,VH/k连接产物正确,连接产物长度为1 093 bp。[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗HepG2核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗HepG2特异性单链抗体奠定基础。
- 周雷毛伟平冯娟刘洪云魏传静李文秀周凤云
- 关键词：核糖体展示单链抗体肝癌抗体库
