国家重点基础研究发展计划(2011CBA01003)
- 作品数：15 被引量：42H指数：3
- 相关作者：白雪源陈香美冯媛媛崔少远傅博更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院吉林大学南开大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划全球变化研究国家重大科学研究计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- ICR小鼠胰岛内nestin阳性细胞的分离培养及特性鉴定
- 2013年
- 通过向ICR小鼠胆总管注射胶原酶Ⅴ的方法体外分离胰岛,并从中分离培养出nestin+细胞,之后通过低糖、低血清诱导其分化产生类胰岛样细胞团。结果显示,小鼠胰岛内存在nestin+细胞,将其分离纯化后在体外低糖(2.5mmol/L)和低血清(2%)条件下可诱导分化为胰岛样细胞团;表明nestin+细胞具有胰腺干/祖细胞的特性。
- 张胜张鹏张学明冯怀亮李子义
- 关键词：ICR小鼠祖细胞胰岛胰岛样细胞团
- 雷帕霉素对高糖诱导的肾系膜细胞自噬抑制、氧化损伤和衰老的影响被引量：12
- 2012年
- 目的探讨雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤(3-MA)对高糖诱导的原代大鼠系膜细胞自噬、氧化损伤及衰老的影响。方法从大鼠肾分离培养原代肾小球系膜细胞(GMCs),分为正常对照组、高糖组、高糖+雷帕霉素(自噬增强剂)及高糖+3-甲基腺嘌呤(自噬抑制剂)干预组。在细胞培养24 h、72 h及10 d时,Western blotting观测自噬标志物-自噬相关基因LC3及泛素结合蛋白p62/SQSTMI的表达变化;硫代巴比妥酸法检测细胞脂质损伤产物-丙二醛(MDA)水平,2,4-二硝基苯肼(DNPH)比色法测定细胞蛋白质损伤产物-羰基含量,通过进行衰老相关β-半乳糖苷酶活性(SA-β-gal)染色及衰老相关异染色质斑块(SAHF)分析检测细胞的衰老程度。结果与对照组相比,细胞经高糖处理72 h和10 d后,自噬标志物LC3表达降低,p62/SQSTMI升高,MDA及羰基含量上升(均P<0.05);处理72 h细胞SA-β-gal染色阳性率增加(P<0.05),细胞核异染色质斑块形成增加。高糖培养的细胞用雷帕霉素干预72 h和10 d后,LC3表达升高,p62/SQSTMI表达下降,MDA及蛋白质羰基含量均下降(均P<0.05),72 h后细胞SA-β-gal染色阳性率下降(P<0.05),细胞核异染色质斑块形成减少;高糖培养的细胞用3-MA干预72 h和10 d后,LC3表达下降,p62/SQSTMI表达升高,MDA及蛋白质羰基含量升高(均P<0.05),72 h细胞SA-β-gal染色阳性率上升(P<0.05),细胞核斑块形成增多。结论高糖可抑制系膜细胞自噬功能,促进系膜细胞氧化损伤,加速细胞衰老;雷帕霉素干预可减轻高糖对系膜细胞自噬功能抑制,减少氧化损伤,延缓衰老;3-MA加重高糖对系膜细胞自噬功能的抑制,进一步加重细胞氧化损伤,加速衰老。
- 李锦白雪源崔少远傅博陈香美
- 关键词：系膜细胞高糖雷帕霉素衰老
- 肾脏器官衰老机制的研究进展
- 2011年
- 器官衰老是连接细胞衰老和生物体整体衰老的桥梁。肾脏是人体中衰老较快的器官之一，表现为功能减退、修复能力下降、易于向病态转化。本文介绍了近年来肾脏衰老机制研究的新进展。
- 白雪源蔡广研陈香美
- 关键词：衰老机制器官衰老肾脏细胞衰老生物体
- 自噬与衰老的关系
- 2012年
- 在正常细胞生长和发育过程中,生物大分子的生物合成和分解代谢存在一种重要的平衡。环境变化通过多种调节机制,促进机体生长和发育,最终保持生物合成和分解代谢平衡。在真核细胞中,蛋白质降解主要通过泛素-蛋白酶体途径和自噬-溶酶体途径完成：蛋白酶体途径局限于胞浆和细胞核,主要参与短寿命蛋白质的降解;而溶酶体途径由囊泡状细胞器组成，其内含有多种水解酶包括蛋白酶负责物质降解。众所周知，溶酶体途径负责长寿命蛋白质的降解。其中自噬（autophagy）是溶酶体途径的主要成分，它将包括蛋白质和受损细胞器在内的胞浆成分输送入溶酶体，从而将其降解。1自噬的提出自噬一词来源于希腊语，本意是‘‘吞噬自己”。
- 崔敬白雪源陈香美
- 关键词：自噬衰老
- 丙戊酸钠促进猪再克隆胚胎体外发育被引量：1
- 2013年
- 对VPA处理的最佳处理时间和处理浓度进行探索,希望通过VPA处理来改善再克隆胚胎的发育能力。结果表明,使用1mmol/L VPA处理16h,可以获得较高的囊胚形成率。然后通过免疫荧光检测发现,囊胚时期acH3K9的乙酰化水平在处理组中高于非处理组。多能性因子Oct4、Nanog、Sox2和Klf4的实时定量检测结果则显示,它们之间的表达水平同样差异不显著。结果表明VPA能够显著提高猪再克隆胚胎体内发育能力。
- 孙羽王安峰韩杨陈仙菊张明军
- 关键词：体细胞核移植丙戊酸钠囊胚
- 小鼠脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞的诱导分化研究被引量：2
- 2015年
- 为了通过特定转录因子将小鼠脂肪间充质干细胞(mADSCs)定向诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)。本研究分别构建Pdx1(胰十二指肠同源盒基因1)、MafA(V-maf肌肉腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A)、NeuroD1(神经分化因子1)3种基因的慢病毒过表达载体,使用293T细胞对3种因子进行慢病毒包装,将3种慢病毒过表达载体以单因子侵染、双因子侵染、三因子联合侵染的方式对mADSCs进行定向分化诱导,于诱导分化第15天对不同方式诱导的IPCs进行检测鉴定,并对不同方式诱导组的IPCs进行高糖刺激,刺激后30~120min检测培养基中含糖量的变化。结果显示,构建的慢病毒过表达载体pHBLV-CMV-IRES-ZsGreen-Pdx1、pHBLV-CMV-PGK-RFPMafA、pHBLV-CMV-PGK-RFP-NeuroD1所含目的片段基因序列与小鼠全基因编码序列完全一致,三种基因慢病毒过表达载体构建成功;诱导分化第15天,三因子联合诱导组所形成的IPCs克隆双硫腙(DTZ)染色呈阳性,并可表达胰岛素生物合成及分泌相关基因;在高糖刺激条件下,三因子联合诱导组糖分解速度、分解量远优于单因子或双因子诱导组。结果表明,Pdx1、MafA、NeuroD1 3种因子联合作用,可以将小鼠脂肪间充质干细胞定向诱导分化为胰岛素分泌细胞,并可在高糖刺激下,有效发挥降糖作用。
- 赵天闯安星兰刘阳唐博张学明李子义
- 关键词：小鼠
- 转Lp-PLA_2猪成纤维细胞系的建立及其功能鉴定
- 2012年
- 根据NCBI上公布的猪Lp-PLA2mRNA序列设计引物,以小型猪肺脏cDNA为模板进行PCR,将扩增产物连接进入具有EF1α启动子的pIRES2-EGFP真核表达载体中,并对其功能进行鉴定。然后,将猪Lp-PLA2表达载体转染入小型猪胎儿成纤维细胞,经过G418抗性筛选,鉴定,成功得到5株转Lp-PLA2基因的猪成纤维细胞系。这为下一步建立Lp-PLA2转基因猪及其功能研究奠定基础。
- 纪元宋奇王罡琦高飞武蓉王海军唐小春
- 关键词：LP-PLA2
- 竹叶青蛇毒诱导不同品系小鼠系膜增生性肾炎模型的比较研究被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨竹叶青蛇毒(habu snake venom,HSV)诱导C57BL/6小鼠和FVB/N小鼠系膜增生性肾炎模型的病理差异,为实验动物模型的选择提供科学依据。方法:取8周龄雄性C57BL/6小鼠(n=33)和FVB/N小鼠(n=52),单次尾静脉注射2.5 mg/kg竹叶青蛇毒建立模型。定期检测血尿素氮和肌酐水平,观察肾组织病理改变并进行病理评分,观察肾小球内PCNA免疫组化染色情况。结果:FVB/N小鼠的存活率(53.2%)明显低于C57BL/6小鼠(89.3%)。肾组织病理表现为C57BL/6小鼠在蛇毒注射后的第1和3天肾小球内出现显著系膜溶解病变,第7天肾小球系膜细胞增殖和系膜基质积聚,第14、21天病变肾小球逐渐恢复正常。FVB/N小鼠注射后第1和3天系膜溶解病变不显著,第7天存在系膜细胞增生,但病变程度低于同期C57BL/6小鼠。病理评分结果示C57BL/6小鼠在模型建立后系膜溶解指数和肾小球硬化指数均高于同期FVB/N小鼠。免疫组化结果显示两种小鼠肾小球内PCNA阳性率在第3、7天均显著高于对照组,其中C57BL/6小鼠肾小球内PCNA表达在第3天高于FVB/N小鼠。结论:静脉注射HSV能诱导小鼠发生系膜增生性肾炎病理改变,C57BL/6小鼠对该模型的耐受性和易感性均优于FVB/N小鼠。
- 文君吴玲玲涂卫平崔巧丽陈大鹏吕杨刘晓峦陈香美
- 关键词：竹叶青蛇毒
- 基因组编辑技术TALENs研究进展及应用
- 2014年
- 基因组编辑技术转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)成为多个不同生物体和细胞中基因修饰研究的重要工具。转录激活因子样效应物(TALEs)通过诱导DNA双链断裂激活在特定位点的易出错的非同源末端连接(NHEJ)或同源引导的修复(HDR),从而增加了基因修饰的效率。本文主要是总结TALENs的发展及今后的应用。
- 崔敬杜轩白雪源
- 关键词：基因修饰
- Toll样受体系统在肾脏衰老中的表达变化被引量：3
- 2013年
- 目的观察Toll样受体(TLRs)系统在肾脏衰老中的表达变化。方法用免疫印迹和实时定量PCR(qRT-PCR)技术分析3月龄组(青年组,n=20)、12月龄组(中年组,n=20)和24月龄组(老年组,n=20)大鼠肾脏中TLRs系统分子、核转录因子(NF-κB)信号通路分子以及炎症因子包括趋化因子配体3(CCL3)、CCL4、CCL5、CD80、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-12b(IL-12b)的表达变化情况。结果①12月龄组和24月龄组体重[(466.86±32.62)、(617.8±57.34)g]、肾重[(43.25±0.50)、(5.01±1.00)g]、三酰甘油(TG)[(2.32±0.46)、(3.22±0.82)mmol/L]和尿蛋白/肌酐比值[(164.81±38.31)、(256.00±49.39)mg/mmoL]高于3月龄组[(236.3±12.28)g、(1.67±0.68)g、(1.20±0.32)mmol/L、(146.01±22.72)mg/mmoL],差异有统计学意义(P<0.05);24月龄组大鼠血尿素氮(BUN)水平[(6.86±1.10)mmol/L]高于3月龄组[(5.73±0.47)mmol/L],差异有统计学意义(P<0.05);而血肌酐(SCR)、血糖(GLU)和胆固醇(CHOL)水平三组差异无统计学意义(P>0.05)。24月龄组肾重[(5.01±1.00)g]和尿蛋白/肌酐比值[(256±49.39)mg/mmoL]高于12月龄组[(3.25±0.50)g、(164.81±38.31)mg/mmoL],差异有统计学意义(P<0.05)。②12月龄组和24月龄组TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR11表达水平均高于3月龄组,24月龄组TLR1和TLR3水平高于3月龄组,24月龄组TLR9水平高于3月龄组,差异均有统计学意义(P<0.05);三组TLR6、TLR7、TLR10水平差异无统计学意义(P>0.05);TLR8未检测到。24月龄组TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR11水平高于12月龄组,差异均有统计学意义(P<0.05)。③12月龄组和24月龄组IK-Bα和活化的磷酸化NF-κB p65(Phospho-NF-κB p65)水平高于3月龄组,差异有统计学意义(P<0.05);24月龄组NF-κB p65水平高于3月龄组,差异有统计学意义(P<0.05)。24月龄组NF-κB p65和Phospho-NF-κB p65水平高于12月龄组,差异有统计学意义(P<0.05)。④24月龄组CCL3、CCL4、CCL5、CD80、TNF-α和IL-12b水平高于3月龄组,差异有统计学意义(P<
- 邵枫白雪源陈香美
- 关键词：TOLL样受体天然免疫衰老肾脏
