湖北省科技攻关计划(2007AA302B08)
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 相关作者：陶泽璋肖伯奎陈始明王燕陈伟更多>>
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- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家自然科学基金武汉市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基因联合沉默抑制Hep-2细胞生长增殖的实验被引量：1
- 2009年
- 目的探讨应用RNA干扰技术同时沉默人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、Bcl-xl三个基因对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生长增殖的影响,并与单独沉默hTERT基因对细胞的生长增殖作用进行比较。方法构建表达hTERT mRNA特异的、含荧光素基因的shRNA(short hairpin RNA,短发夹RNA)真核表达质粒pshRNA1;根据hTERT、VEGF、Bcl-xl的cDNA序列构建串联表达3个shRNA序列的重组质粒pshRNA2。将上述质粒分别转染Hep-2细胞,MTT法观察Hep-2细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白印迹法检验蛋白表达。结果pshRNA1、pshRNA2转染Hep-2细胞后,细胞增殖受到明显抑制,并诱导细胞凋亡。且pshRNA2对细胞的生长增殖抑制作用明显强于pshRNA1。pshRNA1转染细胞后hTERT蛋白表达下降,pshRNA2转染细胞后hTERT、VEGF、Bcl-xl蛋白表达均明显下降。结论与单独沉默hTERT相比,同时沉默hTERT、VEGF、Bcl-xl基因表现出更强大的抑制细胞增殖效应,多基因共沉默为喉癌的基因治疗提供了新思路。
- 马伟王燕陈始明肖伯奎陈伟陈晨陶泽璋
- 关键词：基因疗法凋亡抑制蛋白质类人端粒酶逆转录酶
- 人端粒保护蛋白POT1和TRF2在喉癌中的表达被引量：5
- 2009年
- 目的探讨人端粒保护蛋白1(human protection of telomeres1,POT1)和端粒重复序列结合因子2(telomeric repeat binding factor-2,TRF2)在喉鳞状细胞癌(简称喉癌)及声带息肉中的表达及意义。方法采用间接免疫荧光法检测20例喉癌、19例声带息肉中POT1和TRF2的表达水平。结果POT1和TRF2在喉癌中的阳性表达率为65.00%和70.00%,在声带息肉中未见POT1和TRF2的表达。POT1在低分化喉癌中的表达高于POT1在高及中分化喉癌中的表达(P<0.05),POT1的表达水平在喉癌的不同发生部位、T分级、临床分期及淋巴结转移率中的差异无统计学意义(P<0.05)。TRF2的表达程度与肿瘤的发生部位、组织病理、T分级、淋巴结转移率和临床分期均无关(P<0.05)。相关分析显示喉癌中POT1的表达与TRF2的表达无相关性(P<0.05)。结论POT1和TRF2在喉癌中高表达,两者在喉癌的发生中可能起重要作用。POT1在喉癌中的表达与肿瘤的分化程度有关。
- 左晶晶陶泽璋肖伯奎邓玉琴
- 关键词：喉肿瘤鳞状细胞间接免疫荧光法
- 同时抑制VEGF、hTERT和Bcl-xl表达对喉癌细胞生长增殖的影响被引量：1
- 2009年
- 目的研究同时抑制VEGF、hTERT和Bcl-xl的表达对体内、外喉癌细胞生长增殖的影响。方法使用针对VEGF、hTERT和Bcl-xlmRNA的shRNA真核表达载体:pshRNA-VEGF-hTERT-Bcl-xl。通过脂质体的介导将该质粒转染至体外培养的喉鳞癌Hep-2细胞。四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测该质粒对Hep-2细胞的毒性作用;构建喉鳞癌荷瘤裸鼠动物模型,采用瘤体内多点注射的方式将质粒导入瘤体内,观察质粒对移植瘤的生长抑制作用。结果质粒pshRNA-VEGF-hTERT-Bcl-xl成功转染到喉癌细胞中并表达。经质粒pshRNA-VEGF-hTERT-Bcl-xl处理后,MTT结果显示癌细胞增殖能力显著下降,与0.9%氯化钠溶液治疗的对照组比较,在处理后24h、48h和72h,细胞增殖活性分别降至62.22%,28.77%和10.24%。pshRNA-VEGF-hTERT-Bcl-xl质粒治疗组裸鼠移植瘤生长缓慢,体积明显小于对照组,首次治疗后28天抑瘤率为90.2%,与0.9%氯化钠溶液治疗的对照组比较,P<0.01。结论同时抑制VEGF、hTERT、Bcl-xl表达可显著提高喉鳞癌的治疗效果。该实验为多基因靶向的肿瘤基因治疗提供了新思路。
- 陈始明王燕肖伯奎陶泽璋
- 关键词：喉癌人端粒酶逆转录酶BCL-XL
- 喉癌中Par-4与hTERT的表达及相关性被引量：1
- 2010年
- 目的探讨前列腺凋亡反应因子(prostate apoptosis response-4,Par-4)和人端粒酶逆转录酶(human telome rasereverse transcriptase,hTERT)两种蛋白在靶向hTERTmRNA干扰前后的喉癌中的表达及其相关性。方法基于RNAi技术原理,用质粒pEGFPshTERT干扰体外培养的喉癌Hep-2细胞,免疫细胞化学分别检测干扰前、后12、24、36、48小时的喉癌细胞中hTERT和Par-4的表达情况;用质粒pEGFP-shTERT治疗喉癌裸鼠模型,量子点超敏荧光检测治疗前,治疗后6、10、14天的喉癌组织中hTERT和Par-4的表达情况。结果用质粒pEGFP-shTERT干扰前喉癌中hTERT呈高表达,Par-4仅在胞浆表达,干扰后hTERT表达降低,Par-4胞核表达增多,各组间的蛋白表达差异有统计学意义;相关性分析显示:RNAi干扰前后,喉癌中Par-4和hTERT的表达成负相关(P<0.05,r=-0.908)。结论在喉癌中,靶向敲除hTERT mRNA后,伴随hTERT表达降低和细胞凋亡的发生,Par-4表达逐渐增多,提示Par-4与hTERT相互作用可能对hTERT的非端粒酶依赖的抗凋亡途径有影响。
- 余艳陈伟盛建飞陈始明王燕肖伯奎陶泽璋
- 关键词：前列腺凋亡调节蛋白质类喉肿瘤
