国家自然科学基金(81201281)
- 作品数：14 被引量：30H指数：4
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- 赖氨大黄酸对胆汁淤积性肝纤维化大鼠Smad2、Smad3表达的影响被引量：4
- 2016年
- 目的探讨赖氨大黄酸(RHL)对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠Smad2、Smad3表达的影响。方法采用胆总管结扎(BDL)的手术方法建立大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,将大鼠随机分为5组:对照组、模型组、赖氨酸组、低剂量RHL组[35mg/(kg·d)]、高剂量RHL组[70mg/(kg·d)]。应用实时荧光定量PCR的方法检测大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3mRNA的相对表达量。Western blot的方法检测Smad2、Smad3蛋白时相对表达量的变化。结果与模型组大鼠比较,经RHL治疗后胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3mRNA相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组大鼠相比,经RHL治疗后胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3蛋白的相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RHL能够抑制肝纤维化的发展,可能是通过抑制Smad2、Smad3mRNA和蛋白的表达,阻断TGF-β1/Smads信号传导通路实现的。
- 王琳郝晓方张荣花王密斯孔艺璇冯雪妍章广玲
- 关键词：胆汁淤积肝纤维化SMAD2SMAD3
- miR-203a-3p在胰腺癌组织与细胞中的表达及其对BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响
- 2021年
- 目的:探讨miR-203a-3p对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛选胰腺癌组织和癌旁组织中差异表达的miRNA,分析miRNA高表达与低表达时胰腺癌患者的生存率和临床分期;利用TarBase数据库分析miRNA与癌症相关的GO功能与KEGG通路,利用DIANA Tools、miRDB和TargetScan网站预测miR-203a-3p的靶基因。将miR-203a-3p mimic及NC mimic、miR-203a-3p inhibitor及NC inhibitor转染至BxPC-3细胞,用qPCR法检测胰腺癌细胞和胰腺正常上皮细胞HPNE中miR-203a-3p、miR-192-5p和miR-451a表达水平,以CCK-8法、Transwell小室法和克隆形成实验分别检测BxPC-3细胞的增殖、迁移、侵袭和集落形成能力。结果:通过TCGA数据库筛选出18个胰腺癌组织中差异表达的miRNA,其中miR-203a-3p、miR-192-5p、miR-451a具有物种保守性,且其与胰腺癌临床癌症分期、细胞周期和患者生存率相关(均P<0.05);生物信息学网站预测显示miR-203a-3p的候选靶基因是PPM1A,PPM1A与多基因存在相互作用。miR-203a-3p、miR-192-5p和miR-451a在BxPC-3和Aspc-1细胞中均高表达(均P<0.01)。miR-203a-3p mimic组BxPC-3细胞中miR-203a-3p表达水平以及细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著提高(均P<0.01);miR-203a-3p inhibitor组细胞中miR-203a-3p表达水平以及细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(均P<0.01)。结论:miR-203a-3p在胰腺癌组织及细胞中均高表达,其表达与患者生存和临床分期相关,可调控BxPC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
- 卢鸿健张荣花霍小菊韩向阳王源杨晨马瑞雪章广玲
- 关键词：胰腺癌BXPC-3细胞增殖迁移
- 赖氨大黄酸对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠的治疗作用及其分子机制被引量：4
- 2015年
- 目的:探讨赖氨大黄酸(RHL)对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠的治疗作用,阐明RHL治疗大鼠胆汁淤积性肝纤维化的分子机制。方法:将35只大鼠分为对照组、模型组、35和70mg·kg-1 RHL治疗组及赖氨酸组,每组7只大鼠。通过胆总管结扎(BDL)方法建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型。使用全自动生化分析仪检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性以及总胆汁酸(TBA)和总胆红素(TBIL)水平;HE染色对肝脏组织行病理学检查;Masson三色染色观察肝组织纤维数量;使用试剂盒通过酶标仪测定肝脏组织中羟脯氨酸(Hyp)水平;免疫组织化学染色检测肝脏组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布;Western blotting法检测α-SMA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肝脏质量与体质量比值、血清中AST和ALT活性以及TBA和TBIL水平升高(P<0.05);肝组织肝小叶结构被破坏,纤维异常增生,Hyp水平亦升高(P<0.05)。免疫组织化学染色,α-SMA着色于胞膜和胞浆且表达增多;Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠α-SMA表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,35和70mg·kg-1RHL治疗组大鼠肝脏质量与体质量比值、血清中AST和ALT活性以及TBA和TBIL水平明显降低(P<0.05)。肝脏病理组织学,与模型组比较,35和70mg·kg-1 RHL治疗组大鼠肝脏组织中纤维成分数量减少,Hyp水平降低(P<0.05);免疫组织化学和Western blotting法,与模型组比较,35和70mg·kg-1 RHL治疗组大鼠肝脏组织中α-SMA表达减少(P<0.05)。结论:RHL能抑制肝星形细胞激活、肝脏纤维变性和蓄积以发挥对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏的保护作用,RHL有望成为治疗胆汁淤积性肝纤维化的药物。
- 郝晓方张荣花王琳王梅梅甄永占章广玲陈静
- 关键词：胆汁淤积肝纤维化
- 肺鳞状细胞癌预后相关miRNAs及其候选靶基因生物信息学筛选
- 2021年
- 目的筛选与肺鳞状细胞癌预后相关的miRNAs及其靶基因的预测。方法采用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库收集人肺鳞状细胞癌miRNAs表达数据并进行差异表达分析;采用Kaplan-Meier分析差异表达的miRNAs与患者生存率的相关性;单因素方差分析差异表达的miRNAs与淋巴转移的相关性;采用DIANA TOOLS v5.0生物信息网站对筛选出的差异表达的miRNAs进行靶向基因预测、GO和KEGG功能富集分析;通过miRDB、miRwalk、TargetScan和microRNAs.org数据库进一步预测与预后相关性较高的miRNAs的靶基因;利用GEPIA在线工具评估miR-30a-3p候选基因的临床预后意义;候选靶基因与miR-30a-3p的相关性采用Pearson相关性分析。结果按照logFC>2、P<0.05标准筛选出差异表达显著的miRNAs共201个(173个上调、28个下调);其中下调的miR-144-5p、miR-30a-3p及上调的miR-210-3p、miR-9-5p与肺鳞状细胞癌患者生存率相关,且下调的miR-30a-3p与淋巴转移相关(P<0.05);miRDB、miRwalk、TargetScan和microRNAs.org数据库共同筛选出53个miR-30a-3p候选靶基因;高表达的USP38、SLMAP与更差的OS显著相关(P<0.05)。miR-30a-3p与RCN2、C8orf44和NAA25的表达量呈显著负相关(P<0.001)。结论miR-30a-3p可能通过负调控靶基因USP38、SLMAP、RCN2、C8orf44和NAA25参与肺鳞状细胞癌的发生发展过程,有望作为肺鳞状细胞癌预后相关分子标记物。
- 程远张荣花侯晓丽韩向阳卢鸿健张青刘志勇
- 关键词：肺鳞状细胞癌MIRNAS预后
- MiR-199a-5p对肝星状细胞活化增殖的影响被引量：3
- 2021年
- miR-199a-5p是miRNAs家族的一员。为探讨对人肝星状细胞活化增殖和迁移的影响,为临床肝纤维化治疗提供新的思路,本研究构建miR-199a-5p过表达载体、合成miR-199a-5p反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)经脂质体转染LX-2细胞。采用CCK-8法和Transwell分别检测细胞增殖和迁移能力;集落形成实验检测LX-2细胞的集落形成能力;实时荧光定量PCR技术检测细胞中转染miR-199a-5p后纤维化相关基因α-SMA和CollagenⅠ的mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞中α-SMA表达水平。结果表明miR-199a-5p可以促进LX-2细胞增殖(P<0.01)、迁移(P<0.01)和集落形成(P<0.01);而ASO-199a-5p-5p组细胞增殖(P<0.01)、迁移能力(P<0.01)和集落形成能力(P<0.01)受到抑制。RTqPCR结果显示miR-199a-5p在受TGF-β1刺激后的LX-2细胞中的miRNA表达水平高于未受刺激组的(P<0.05),转染miR-199a组细胞中α-SMA的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)表达水平升高。以上结论表明miR-199a-5p过表达能促进肝星状细胞活化、增殖。
- 王源刘章心怡苏静慧王密斯张荣花熊亚南王梅梅甄永占章广玲
- 关键词：肝星状细胞细胞增殖迁移
- 赖氨大黄酸促进大鼠心肌Smad7表达的研究
- 2018年
- 目的初步探讨赖氨大黄酸(RHL)对肾性压力负荷性心肌纤维化模型大鼠Smad7表达的影响。方法将32只大鼠随机分为对照组、模型组、赖氨酸组及RHL组,每组8只,用"两肾一夹"法建立肾性压力负荷性心肌纤维化模型,通过测量鼠尾动脉收缩压及左心室质量指数评价造模效果,通过Masson染色观察大鼠心肌纤维化病变程度,采用免疫组织化学法及实时荧光定量聚合酶链反应在蛋白及mRNA水平检测Smad7表达情况。结果与模型组相比,经RHL治疗后肾性压力负荷性心肌纤维化大鼠心肌组织中Smad7蛋白及mRNA表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RHL可有效抑制肾性压力负荷性大鼠心肌纤维化进程,其机制与上调Smad7表达,靶向拮抗TGF-β/Smads信号传导通路有关。
- 赵鹏刘志勇
- 关键词：心肌纤维化TGF-Β/SMADSSMAD7
- 微小RNA在恶性肿瘤靶向治疗中的研究进展被引量：6
- 2018年
- 恶性肿瘤一直是当今世界最难攻克的顽疾之一,肿瘤靶向治疗以其高效低毒等特点为病人带来了新的希望,目前的靶向药物主要是单克隆抗体和小分子酪氨酸激酶抑制剂。微小RNA（micro RNA,mi RNA）是一类小的、进化保守的非编码RNA,负性调节编码基因以及非编码转录因子的表达,是各种细胞主要调控者,在肿瘤的发生、进展以及转移中发挥了重要的作用。研究显示,多种肿瘤均存在大量发挥癌基因或抑癌基因作用的mi RNA的表达失调,而这些表达异常的mi RNA已成为人们研制肿瘤靶向治疗的又一新工具。因此本研究就近年来mi RNA在肿瘤靶向治疗中的相关研究做一简要综述,以期为肿瘤的靶向治疗提供新的视角。
- 赵洪焕孔艺璇章广玲李玉凤韩素桂
- 关键词：微小RNA肿瘤靶向治疗
- 大鼠肝纤维化相关microRNA及其候选靶基因的筛选被引量：2
- 2021年
- microRNAs(miRNAs)是一类功能性非编码RNA,在多种生物过程中具有重要作用。然而,miRNA的表达模式、调控网络以及参与肝纤维化的miRNA仍有待阐明。为了探讨与肝纤维化相关的miRNA及其靶基因的功能,为临床肝纤维化治疗提供理论依据,本研究前期已采用胆管结扎法(BDL)建立大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型。从大鼠肝脏中提取总RNA,应用基因芯片技术对胆汁淤积性肝纤维化肝组织中miRNA和mRNA表达谱进行综合分析;结合生物信息方法分析在胆汁淤积性肝纤维化中差异表达miRNA可能的靶基因;实时荧光定量PCR技术检测TGF-β1处理人肝星状细胞LX-2细胞中miR-29a-3p、miR-194-5p和miR-22-3p相对表达水平。结果表明,与正常肝组织相比,纤维化肝组织中有48个差异表达miRNA(FC>2,P<0.05),其中36个上调,12个下调;筛选出18个预测靶基因参与与纤维化相关的生物过程;TGF-β1处理LX-2细胞中miR-29a-3p、miR-194-5p和miR-22-3p相对表达水平显著下调(P<0.05)。本研究筛选的差异表达miRNAs通过调节靶基因的表达在肝纤维化中可能发挥重要作用,将为miRNA在肝纤维化中的作用提供新的见解。
- 侯晓丽苏静慧刘章心怡张荣花王一同刘雨潭张海东章广玲
- 关键词：胆汁淤积肝纤维化MIRNAMRNA
- MiR-1-3p通过CAAP1抑制肝癌细胞HepG2的生物学行为被引量：1
- 2021年
- 为探讨miR-1-3p对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的细胞生物学行为的影响,本研究通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-1-3p在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达水平;miR-1-3p过表达载体、miR-1-3p inhibitor分别转染HepG2细胞,RT-qPCR实验检测转染后miR-1-3p表达水平;通过CCK-8实验、克隆形成实验、流式细胞术、Western blot实验、划痕实验和Transwell实验研究miR-1-3p对HepG2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响;利用生物信息学技术预测miR-1-3p的靶基因,并通过双荧光素报告实验对miR-1-3p的靶基因进行验证;RT-qPCR和Western blot实验检测miR-1-3p对CAAP1 mRNA及蛋白的表达影响。结果显示miR-1-3p在HepG2细胞系中的表达明显低于正常肝细胞LO2(P<0.05),体外细胞学实验结果显示,过表达miR-1-3p能够显著抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进凋亡,而下调miR-1-3p的表达则作用相反,双荧光素报告实验表明miR-1-3p过表达显著抑制野生型荧光素酶活性,RT-qPCR和Western blot结果显示miR-1-3p过表达显著抑制CAAP1表达,进而抑制其蛋白表达。本研究初步表明,miR-1-3p可能通过调控其靶基因CAAP1抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,miR-1-3p可能是一种新的治疗肝癌的小分子靶点。
- 侯晓丽卢鸿健苏静慧王一同刘雨潭王梅梅张荣花章广玲
- 关键词：肝癌细胞增殖凋亡
- miR-185对肝癌细胞生长增殖及侵袭迁移的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨miR-185对人肝癌细胞Hep G2和SMMC-7721生长增殖、侵袭迁移能力的影响。方法构建miR-185过表达载体、合成miR-185反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO),经脂质体转染肝癌细胞Hep G2和SMMC-7721。利用CCK-8和Transwell小室实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力;生物信息学数据库预测结合基因芯片结果确定miR-185的候选靶基因NR1D1;利用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测miR-185对细胞中NR1D1基因表达水平的影响;荧光报告载体实验验证miR-185对靶基因的调控作用。结果 miR-185在人肝癌细胞中的mRNA表达水平显著低于正常肝细胞(P<0.01);过表达miR-185使人肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,下调肝癌细胞中NR1D1基因的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.01);荧光报告载体实验证明miR-185可以通过作用于NR1D1 mRNA的3'端非翻译区(untranslated region,UTR)下调其表达水平(P<0.05)。结论 miR-185能抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,NR1D1是miR-185的直接靶基因。
- 王密斯张荣花王琳孔艺璇冯雪研刘志勇甄永占章广玲
- 关键词：肝癌细胞细胞增殖肿瘤浸润细胞运动
