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国家教育部博士点基金(20060559006)

作品数：8 被引量：6H指数：1
相关作者：周天鸿李月琴郭芬张欣初彦辉更多>>
相关机构：暨南大学广东药学院牡丹江医学院更多>>
发文基金：国家教育部博士点基金广东省自然科学基金广东省教育厅高水平科研项目更多>>
相关领域：生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 8篇中文期刊文章

领域

  • 7篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 4篇核表达
  • 3篇真核
  • 3篇真核表达
  • 3篇细胞
  • 2篇蛋白
  • 2篇蛋白相互作用
  • 2篇原核表达
  • 2篇转录
  • 2篇转录因子
  • 2篇相互作用
  • 2篇小鼠
  • 2篇基因
  • 2篇基因真核
  • 2篇肌细胞
  • 2篇分化
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体
  • 1篇多克隆抗体制...
  • 1篇英文
  • 1篇原核

机构

  • 8篇暨南大学
  • 7篇广东药学院
  • 4篇牡丹江医学院

作者

  • 8篇郭芬
  • 8篇李月琴
  • 8篇周天鸿
  • 4篇李实骞
  • 4篇初彦辉
  • 4篇张欣
  • 3篇欧淑芳
  • 3篇黄晓峰
  • 2篇罗志文
  • 2篇孙丽敏
  • 2篇刘兆宇
  • 1篇李弘剑
  • 1篇邹奕
  • 1篇刘向东
  • 1篇王丁丁
  • 1篇黄晓锋

传媒

  • 2篇中国生物工程...
  • 1篇生物技术
  • 1篇Journa...
  • 1篇中国生物化学...
  • 1篇暨南大学学报...
  • 1篇热带医学杂志
  • 1篇现代生物医学...

年份

  • 1篇2012
  • 5篇2010
  • 1篇2009
  • 1篇2007
共 8 条 记 录，以下是 1-8
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排序方式：
小鼠Myf5真核表达载体的构建及其在细胞中的定位
2010年
目的:获得小鼠生肌调节因子Myf5基因并构建pEYFP-C1真核表达载体,观察Myf5在小鼠C3H10T1/2细胞中的定位。方法:利用PCR获得Myf5基因克隆到pEYFP-C1载体中,利用脂质体将构建的表达载体转染C3H10T1/2细胞,荧光观察融合蛋白的表达。结果:从小鼠cDNA文库中得到760bp的myf5的CDS序列后,重组到pEYFP-C1载体中并转染C3H10T1/2细胞,荧光显示Myf5蛋白定位在细胞核中。结论:Myf5载体成功构建并在小鼠C3H10T1/2细胞表达,证明了Myf5蛋白定位于细胞核,为进一步研究Myf5与其他蛋白的相互作用奠定了基础。
刘向东郭芬黄晓峰刘兆宇张欣李月琴周天鸿
关键词：MYF5细胞定位
Mdfic与Rhox5蛋白相互作用的关键结构域鉴定
2012年
Mdfic(MyoD family inhibitor domain containing)是一个新发现的含有MyoD抑制素结构域(I-mfa domain)的转录调控因子,可能在肌细胞的分化过程中发挥重要作用.小鼠Rhox5为同源异型框基因,隶属于Rhox基因簇(reproductive homeobox on the X chromosome genes cluster)β亚簇.在前期证实Mdifc能结合Rhox5蛋白的基础上,进一步鉴定两者相互作用的关键结构域.生物信息学分析Mdfic的氨基酸序列,PCR方法扩增Mdfic A截短型片段(第72～247位氨基酸残基),含保守的I-mfa结构域;双向酵母双杂交和体外GST-Pull down结果表明,该截短型片段可以与Rhox5蛋白结合,且结合力度较完整的Mdfic蛋白强;将Mdfic A片段划分为两段:Mdfic B(72～191 aa,不含I-mfa结构域)和Mdfic C(191～247 aa,含I-mfa结构域).结果表明,含保守I-mfa结构域的Mdfic C截短型片段丧失了与Rhox5蛋白结合的能力,而不含I-mfa结构域的Mdfic B截短型片段可以结合Rhox5蛋白.鉴于Mdfic蛋白的非I-mfa结构域在Rhox5/Mdfic结合中发挥关键作用,Rhox5与Mdfic的结合可能进一步调控由Mdfic的I-mfa结构域参与的其他转录因子(如MyoD)的调控,三者形成一个复杂的调控网络,共同参与肌细胞发生及分化的调控.
郭芬欧淑芳初彦辉李月琴王丁丁周天鸿
关键词：转录因子
含外显子8的prosaposin蛋白亚型与Rhox5蛋白间的相互作用被引量：1
2010年
研究含外显子8的prosaposin蛋白亚型(PsapE8)与同源异型框蛋白Rhox5蛋白间的相互作用.重叠延伸PCR法扩增PsapE8的cDNA序列,将其按照通读框方式分别克隆至pGBKT7和pGADT7酵母双杂交载体中构建pGBKT7-PsapE8和pGADT7-PsapE8重组质粒.酵母双杂交实验检测PsapE8与Rhox5蛋白在酵母体内的结合;体外转录翻译S35标记的PsapE8蛋白,GSTpull-down实验检测PsapE8与Rhox5蛋白在体外的结合情况.成功地构建了pGBKT7-PsapE8和pGADT7-PsapE8重组质粒,酵母双杂交实验表明PsapE8蛋白在酵母体内可以结合Rhox5蛋白;GST pull-down实验再次验证了两者在体外的结合;表明含有外显子8的prosaposin蛋白亚型PsapE8可以与Rhox5蛋白相结合.
郭芬李月琴李实骞罗志文张欣周天鸿
关键词：蛋白相互作用
小鼠RHOX5蛋白两种截短型突变体的原核表达及其与MDFIC互作的鉴定被引量：3
2009年
目的:表达和纯化两种小鼠RHOX5蛋白的截短型突变体,确定完整的RHOX5蛋白及其两种截短型突变体与MDFIC蛋白结合的能力。方法:生物信息学分析小鼠同源异型框蛋白RHOX5的cDNA序列,分别对RHOX5的两种截短型片段RHOX5 N和RHOX5 C进行PCR、分别扩增RHOX5的两种截短型片段RHOX5 N和RHOX5 C并将其克隆至pGEX4T3原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒分别转化大肠杆菌RosettaTM2(DE3)菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione-Sepherase 4B颗粒对融合蛋白进行小批量亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳分离目标蛋白,确定融合蛋白的表达。进行GST-pull down实验,检测完整的RHOX5蛋白及其两种截短型突变体与MDFIC蛋白结合的能力。结果:在大肠杆菌RosettaTM2(DE3)中有效地实现了GST-RHOX5、GST-RHOX5 N和GST-RHOX5 C 3种融合蛋白的可溶性表达;经Glutathione Sepherase 4B颗粒亲和纯化后,获得了纯化后GST融合蛋白;GST-pull down实验证实,含有homeodomain的RHOX5蛋白和RHOX5C截短型突变体可以与MDFIC蛋白相结合,而RHOX5N截短型突变体则丧失了与MDFIC蛋白结合的能力。结论:实现了RHOX5及其两种截短型突变体的原核表达和纯化,证实RHOX5蛋白的homeodomain结构域是其与MDFIC结合的关键部位。
郭芬李实骞欧淑芳初彦辉李月琴张欣周天鸿
关键词：原核表达和纯化
带c-Myc标签的Mdfic基因真核表达载体构建及其在成肌细胞中的表达被引量：1
2010年
目的构建新型转录因子Mdfic和c-Myc标签融合表达的真核表达载体pcDNA3.1-Mdfic-Myc,实现其在成肌细胞C2C12中的表达。方法 PCR方法扩增Mdfic的开放阅读框,酶切后的PCR扩增产物和退火后的人工合成的c-Myc标签共同克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建pcDNA3.1-Mdfic-Myc融合表达质粒。重组质粒经过PCR、双酶切和测序鉴定后,脂质体法转染C2C12细胞。RT-PCR和Western blotting方法检测转染后细胞中Mdfic-Myc的表达。结果成功构建了pcDNA-Mdfic-Myc真核表达质粒;RT-PCR和Western blotting结果表明,Mdfic-Myc融合蛋白在成肌细胞C2C12中获得高效表达。结论 pcDNA3.1-Mdfic-Myc融合表达质粒的成功构建及其在成肌细胞中的表达为进一步体外研究Mdfic蛋白单独的功能及其与其他分子间功能性相互作用奠定了基础。
郭芬李月琴黄晓峰欧淑芳初彦辉周天鸿
关键词：真核表达载体基因表达
鞘脂激活蛋白原Prosaspoin与Rhox5间的功能性相互作用(英文)
2007年
鞘脂激活蛋白原(prosaposin)是一种多功能的糖蛋白。除作为鞘脂糖水解途径中所涉及到的溶酶体酶的激活剂外,其在神经系统、生殖系统及前列腺癌的发生中都担当重要角色。利用酵母双杂交系统筛选与Rhox5蛋白相作用的分子,获得一个阳性克隆No.1-14,序列比对表明其是prosaposin(Psap)的C末端。进一步的研究表明,全长的prosaposin(不含外显子8的剪接本)亦可以与Rhox5相互作用。暗示prosaposin(Psap)的C末端可能是Psap与Rhox5相互作用的关键结构。由于Psap与Rhox5均在生殖系统的发生、发展和分化,精子的生成和成熟中发挥重要作用,Psap与Rhox5相互作用的证实提示两者可能共同参与雄性生殖系统发生的动态调控。
郭芬黄晓锋李实骞孙丽敏李月琴李弘剑邹奕初彦辉周天鸿
关键词：生殖系统
新型转录因子MDFIC的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
2010年
小鼠MDFIC(MyoD family inhibitor domain containing)蛋白是一个新近发现的与HIC(Human I-mfa domain containing protein)高度同源的转录调控因子,可能在肌细胞的分化过程中起着重要的作用。为了深入研究MDFIC的功能,首先要制备抗MDFIC的多克隆抗体。首先采用PCR方法扩增出编码MDFIC的cDNA片段,然后将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-3,并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,纯化后的目的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。间接ELISA检测抗体效价达1∶640 000以上,检测证明抗体效价较高。此外,Western blotting结果显示,该抗体可特异性识别真核细胞外源性及内源性的MDFIC蛋白。MDFIC多克隆抗体的成功制备为进一步研究MDFIC的功能以及进一步探索肌细胞的发生分化机制提供了重要工具。
刘兆宇郭芬黄晓峰孙丽敏李月琴周天鸿
关键词：转录因子多克隆抗体肌细胞分化
Rhox5基因真核表达质粒的构建及其在NIH3T3细胞中的稳定表达
2010年
目的:构建同源异性框基因Rhox5的真核表达质粒,转染NIH3T3细胞,建立稳定过表达Rhox5的细胞系。方法:PCR方法扩增Rhox5的全长cDNA序列,PCR产物双酶切后和人工合成的HA抗原表位标签共同克隆至pcDNA3.1(-)哺乳动物细胞表达载体中,构建pcDNA-Rhox5-HA融合表达质粒。脂质体法将经过测序成功的pcDNA-Rhox5-HA融合质粒和pcDNA3.1空载体分别转染NIH3T3细胞,潮霉素B筛选后建立阴性对照pcDNA3.1 in NIH3T3和稳定过表达Rhox5的Rhox5-HA in NIH3T3细胞系。RT-PCR和western blotting方法检测Rhox5-HA在稳定转染细胞系中的表达情况。结果:成功构建了pcDNA-Rhox5-Myc重组质粒,获得稳定过表达Rhox5的NIH3T3细胞系。RT-PCR和Western blotting结果表明,构建的稳定细胞系中成功表达Rhox5-HA融合蛋白。结论:Rhox5基因真核表达质粒的构建及其在NIH3T3细胞中的稳定表达为进一步体外研究Rhox5蛋白单独的功能及其与其他分子间功能性相互作用奠定了实验基础。
郭芬李月琴李实骞罗志文张欣周天鸿
关键词：真核表达质粒
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