国家教育部博士点基金(20040129001)
- 作品数：8 被引量：14H指数：3
- 相关作者：马学恩么宏强斯日古楞张淑琴周建华更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绵羊肺腺瘤病特异性PCR及套式PCR诊断方法的建立被引量：5
- 2009年
- 绵羊肺腺瘤是由外源性反转录病毒JSRV引起的接触性传染的肺肿瘤性疾病。感染羊没有针对JSRV的循环抗体,但在感染羊的肺肿瘤组织、淋巴网状系统及外周血单核细胞中可检测到外源性前病毒exJSRV及JSRV转录产物。健康羊基因组中存在15~20拷贝的内源性前病毒enJSRV,内外源性前病毒的结构基因高度相似,而在U3区存在差别,因而,设计了针对exJSRVU3区的特异性引物并在国内首次建立了一步法特异性PCR检测法及套式PCR检测法。以700ng健康羊基因组DNA为背景,梯度稀释阳性质粒pJSRV-LTR作为模板,比较两种方法的敏感性,结果表明套式法的敏感性是一步法的10倍以上,套式法也是目前可用于检测感染羊血液样品的唯一方法,可望在绵羊肺腺瘤病的流行病学调查及防控方面起重要作用。
- 罗军荣刘霄卉余群英张淑琴周建华马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒套式PCR
- 绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白基因在大肠杆菌中的分段表达被引量：2
- 2007年
- 为了建立原核高效表达体系,从自然感染绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株的肺肿瘤组织中提取基因组DNA,应用PCR技术分别扩增编码囊膜蛋白(env)基因的表面蛋白(surface protein,SU)和跨膜蛋白(transmembrane protein,TM)区域基因,通过T-A克隆的方法分别克隆入pGEM-TEasy载体中,然后利用设计的起始密码、终止密码以及相应酶切位点的引物,把env基因的SU区和TM区基因亚克隆到表达载体pGEX-4T-1中,分别构建SU和TM的重组表达质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转化入大肠杆菌BL21 CodonPlus中并在IPTG的诱导下表达,表达产物用SDS-PAGE分析鉴定。结果表明,该基因可以在大肠杆菌中以稳定的包涵体形式高效表达,表达的SU和TM融合蛋白表观分子质量约为68 ku和46 ku,表达量分别占全菌蛋白的25%和30%,并且从包涵体分离纯化得到的表达蛋白具有较高纯度,是一种理想的免疫原。
- 斯日古楞么宏强马学恩王升启
- 关键词：绵羊肺腺瘤病囊膜蛋白基因克隆
- 绵羊肺腺瘤病病毒NM株衣壳蛋白基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2007年
- 为了建立原核高效表达体系,从自然感染绵羊肺腺瘤病病毒内蒙(NM)株的肺肿瘤组织中提取基因组DNA,应用PCR技术扩增编码gag基因衣壳蛋白(Capsid protein,CA)基因,构建CA蛋白的重组表达质粒pGEX-4T-1-CA,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转化入Ecoli BL21 CodonPlus中,在IPTG的诱导下表达,表达产物用SDS-PAGE分析鉴定。结果表明,该基因可以在大肠杆菌中以可溶性和包涵体形式高效表达,表达的CA融合蛋白表观分子量约为37 Ku,表达量占全菌蛋白的20%,利用谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析柱纯化可以得到具有较高纯度的表达蛋白,是一种理想的免疫原。本研究为下一步利用重组蛋白研制绵羊肺腺瘤病病毒NM株的单克隆抗体及诊断试制盒等奠定了基础。
- 斯日古楞么宏强马学恩王升启
- 关键词：绵羊肺腺瘤病衣壳蛋白基因克隆
- 绵羊肺腺瘤病自然病例的临床病理学观察被引量：5
- 2006年
- 么宏强马学恩于立新张淑琴郑秉武
- 关键词：肺腺瘤病病理学观察自然病例绵羊自然感染病羊
- 绵羊肺腺瘤病毒自然感染病例的病理学观察
- 2006年
- 通过对2只自然感染绵羊肺腺瘤病毒的病羊进行剖检及病理组织学观察,了解此病毒对绵羊机体的主要侵害器官及其他各器官所发生的一系列变化。试验结果表明:剖检可见肺脏膨隆,体积增大、充满胸腔;肺的表面和切面上见到大小不一、质度较实的黄白色小结节;有些病例肺胸膜的脏层与壁层发生黏连;在支气管、细支气管内可见白色泡沫状的黏液。组织学检查可见肺泡壁上皮细胞和细支气管上皮细胞增生,呈乳头状向肺泡腔内或细支气管腔内生长;邻近部位的肺泡腔内有大量的巨噬细胞增生。从观察结果中可以看出,绵羊肺腺瘤病毒主要侵害肺脏和机体的免疫器官,可为绵羊肺腺瘤病的进一步研究提供参考。
- 么宏强马学恩于立新张淑琴郑秉武
- 关键词：绵羊肺腺瘤病自然病例病理学观察
- 绵羊肺腺瘤病毒内蒙株衣壳蛋白在真核细胞中的表达
- 2013年
- 为构建绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte Sheep Retrovirus,JSRV)内蒙株衣壳蛋白(CA)基因真核表达载体,采用含HA标签的引物,通过PCR方法从重组原核表达质粒上扩增CA-HA融合基因片段,将其克隆至真核表达载体上。构建的真核表达质粒通过脂质体法转染293细胞和Hela细胞,用间接免疫荧光和Westhern blotting法检测目的蛋白的表达。结果表明,成功地构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CA-HA,并转染的293细胞和Hela细胞内观察到特异性荧光和检测到目的基因的表达产物,说明CA基因在真核细胞内获得表达。本试验为建立特异性的诊断试剂盒奠定了基础。
- 斯日古楞么宏强马学恩周建华
- 关键词：间接免疫荧光法WESTERN
- 绵羊肺腺瘤病毒人工感染羔羊淋巴细胞动态变化的研究
- 2007年
- 么宏强斯日古楞马学恩于立新
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒T淋巴细胞亚群羔羊免疫抑制作用肿瘤性疾病T细胞亚群
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因表面蛋白的表达及其单克隆抗体的制备被引量：3
- 2008年
- 在E.coli BL21中诱导表达含有绵羊肺瘤病毒囊膜表面蛋白(SU)重组质粒pGEX-4T-1-SU,表达的GST融合蛋白经纯化后用佐剂乳化,作为抗原免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合、克隆化、ELISA法初步筛选抗SU单抗。最终获得了3株抗SU的单抗,为深入探讨JSRV的分子生物学特性及研制诊断试剂盒打下了基础。
- 刘霄卉斯日古楞罗军荣周建华马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因表面蛋白原核表达单克隆抗体
