重庆医科大学创新基金(2002CX03)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 用线性动力学方法考察黄嘌呤对尿酸酶的抑制作用被引量：6
- 2005年
- 目的:以米氏常数相差较大的两种尿酸酶为模型,考察用两个底物浓度下标定比活性确定酶动力学参数和筛选抑制剂的可靠性.方法:用293nm吸收监测尿酸酶反应.通过两个底物浓度下标定比活性确定表观米氏常数(apparentmichaelismentenconstant,Kmapp)和表观最大反应速度(apparentmaximalreactionrate,Vmapp).据表观动力学参数随抑制剂浓度的变化确定抑制类型和抑制常数(inhibitionconstant,Ki).结果:只要所用尿酸浓度中较小者(thelowerconcentrationofuricacid,SL)大于待测Km的0.8倍且较大者(thehigherconcentrationofuricacid,SH)在SL的1.4倍以上,此线性动力学法能可靠测定Bacillusfastidiosus和Candidaspecies尿酸酶的米氏常数,且与双倒数法结果一致.如SL大于Km的3.8倍而SH为SL的3倍,此线性动力学法所得Candidaspecies尿酸酶Kmapp与抑制剂浓度成正比,Ki为(4.8±0.5)μmol/L,与双倒数法结果一致.Bacillusfastidiosus尿酸酶Km太高,底物浓度有限时不能用此方法筛选其抑制剂.结论:此线性动力学方法仅用高于Km的底物浓度也能可靠确定酶动力学参数,有利于用常规定量方法筛选对底物具有高亲合力特殊靶酶的抑制剂.
- 赵利娜廖飞赵运胜
- 关键词：尿酸酶黄嘌呤米氏常数
- 用积分法考察黄嘌呤对Candida species尿酸酶的抑制作用被引量：4
- 2005年
- 目的:以Candida species尿酸酶为模型,考察用积分法筛选抑制剂的条件.方法:用293 nm吸收记录尿酸酶反应.用反应时间为自变量的积分速度方程拟合反应曲线确定表观米氏常数(apparentM ichaelis-M enten constant,Km app)和表观最大反应速度(apparentm axim al reaction rate,Vm app).据上述参数随抑制剂浓度的变化确定抑制类型和抑制常数(inh i-b ition constant,Ki).结果:被分析数据中的畸异值显著降低结果可靠性.通常终点底物<1/6Km app而起始底物足够高,此积分法测定Km app的偏差和变异低于20%而Vm app精度更高.用积分法所得Km app与双倒数法一致,且和黄嘌呤浓度成正比,对应Ki为(5.4±0.8)μmol/L(n=3),也与双倒数法一致.结论:被分析数据精度足够高,用无抑制剂时米氏常数(M ichaelis-M enten constant,Km)4倍以上的起始底物浓度并固定终点底物浓度<1/6Km,此积分法能用于筛选特殊类型的抑制剂.
- 赵利娜廖飞赵运胜
- 关键词：积分法尿酸酶黄嘌呤米氏常数
- 不同方法测定黄嘌呤对Bacillus fastidiosus胞外尿酸酶抑制效力的比较被引量：1
- 2006年
- 赵利娜赵运胜陶佳廖飞
- 关键词：黄嘌呤尿酸酶效力半抑制浓度积分法
