上海市卫生局科技发展基金(2008180)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：卢奕蒋永祥吴新华杨晋刘天津更多>>
- 相关机构：复旦大学中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局科技发展基金上海市自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 晶状体上皮细胞启动子LEP503调控的自杀基因系统细胞特异性表达研究
- 2012年
- 目的探讨人晶状体上皮细胞（HLEC）特异性启动子LEP503调控的Cre／LoxP增强型自杀基因（HSV-tk／GCV）系统在眼内主要细胞中的特异性表达及杀伤作用。方法实验研究。利用分子克隆技术，构建HLEC特异性启动子LEP503调控的HSV—tk／GCV系统并进行慢病毒包装。分别在HLEC、视网膜色素上皮细胞（RPEC）、小鼠成纤维细胞（NIH3T3）、293T细胞中转人此系统，3d后观察4组细胞增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达情况，并收集HLEC和RPEC，通过RT-PCR检测HSV—tk的表达差异。20mg／L丙氧鸟苷（GCV）作用后，CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测HSV-tk／GCV系统对HLEC和RPEC的杀伤作用。采用单因素方差分析Scheffe两两比较法对各组RPEC活性进行比较。结果HSV-tk／GCV系统在RPEC、NIH3T3、293T细胞中EGFP表达效率分别为62．3％，68．3％，75．8％；在HLEC中EGFP表达效率为17．5％。RT—PCR检测显示HLEC内有较高的HSV—tk表达，相对灰度值为4．01，而RPEC中HSV-tk表达微弱，相对灰度值为0．29。20mg／LGCV作用72h后流式细胞仪检测：HLEC组的细胞凋亡率为76．51％，而RPEC组仅为2．44％。CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制情况显示：20mg／LGCV作用72h后LEP503调控的HSV—tk／GCV转染的RPEC活性0．9198±0．06与正常RPE组0．9672±0．02和阴性对照RPE组0．89274-0．07相比，差异无统计学意义[组间均数差值（MD）分别为MD1=-0．047，P=0．671；MD2=0．027，P=0．912]。结论HLEC特异性启动子LEP503调控的Cre／LoxP增强型自杀基因系统在HLEC中能特异性表达HSV．tk，GCV作用后可特异性抑制HLEC增殖，但对RPEC无明显杀伤作用。
- 蒋永祥卢奕刘天津杨晋吴新华
- 关键词：慢病毒属基因表达调控基因自杀DNA结合蛋白质类上皮细胞
- RNA干扰抑制端粒酶反转录酶对晶状体上皮细胞增殖的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨RNA干扰(RNAi)抑制端粒酶反转录酶(TERT)对晶状体上皮细胞(LEC)增殖的影响。方法收集培养的LEC和视网膜色素上皮细胞(RPEC),用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测二者内源性TERT的表达差异;人工合成TERT小分子干扰RNA(siRNA)片段,用LipofectamineTM2000转染LEC,实时PCR检测TERT基因表达的变化。LipofectamineTM2000TERTsiRNAi持续转染LEC和RPEC96h,细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测TERTsiRNAi对LEC和RPEC增殖的影响。结果 RPEC中未见TERT表达,LEC中有低水平TERT表达。TERTsiRNA转染LEC48h后,siRNA组TERT相对表达水平(0.20±0.01)与阴性对照组(1.00±0.03)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。TERTsiRNA转染LEC和RPEC96h后,CCK-8试剂盒检测细胞的增殖抑制情况显示:LECsiRNA组LEC活性(0.55±0.04)与LEC阴性对照组(0.79±0.02)相比,差异有统计学意义(P<0.05);转染的RPECsiRNA组RPEC活性(1.13±0.04)与阴性对照组RPEC活性(1.16±0.01)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论较长时间RNAiTERT能有效抑制LEC增殖,但对RPEC无明显抑制作用。
- 蒋永祥吴新华卢奕
- 关键词：端粒酶反转录酶RNA干扰晶状体上皮细胞
