云南省联合支持国家计划项目(2008GA008)
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
- 相关作者：谢忠平龙润乡杨蓉李华白惠珠更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院云南昆明血液中心云南省第一人民医院更多>>
- 发文基金：云南省联合支持国家计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Protein A/G亲和层析在HCV抗体纯化中的应用效果被引量：5
- 2010年
- 目的分析蛋白A/G亲和层析柱在纯化抗HCV血清的影响因素,以便选择最佳使用条件提高ProteinA/G亲和柱的利用效率。方法分别将抗HCV血清用不同处理方式、不同上样方式、不同使用次数的亲和柱进行纯化,并收集纯化样品进行检测、分析。结果用饱和硫酸铵粗纯后,在蛋白A/G亲和层析柱的纯化效果更好;样品在亲和柱内吸附30min可提高亲和柱的对目的蛋白的吸附。结论使用初纯的抗体并增加吸附时间能提高亲和层析柱的利用率,并有效延长亲和柱的使用寿命。
- 杨蓉谢忠平龙润乡白惠珠谭振国王燕吴忠香张勇
- 关键词：PROTEIN抗体纯化丙型肝炎病毒
- 免疫复合物解离剂的研究及在HCV抗原检测中的应用效果分析被引量：2
- 2012年
- 目的探索一种可以使免疫复合物发生解离的方法,并进行应用效果分析。方法通过对HAV抗原抗体复合物的解离,进行酸化剂、去垢剂的组合及解离时间、温度等相关条件筛选,优化出最佳的解离方法,应用于1 370份HCV血清样品,对解离前后的抗原阳性率进行统计分析。结果 160 EU/ml的HAV抗原能被效价为20 U/ml的HAV抗血清完全中和;只单独使用去垢剂对免疫复合物无解离效果;0.1 mol/LGly-HCL能解离抗原抗体复合物,加入1种或几种去垢剂后则其解离效果有不同程度的提高,其中以Gly-HCl+7%TritonX-100+5%CHAP的效果最好(q=27.177,P<0.01);免疫复合物在加入解离剂后在室温60 min、37℃30 min、60℃10 min为本试验较好的解离条件,其中以37℃30 min效果最佳;应用Gly-HCl+5%CHAPS+7%TritonX-100在37℃对样品进行预处理30 min后,可使HCV抗原阳性检出率由解离前的33.3%提升至75.56%,解离前后之间的阳性率差异具有显著地统计学意义(χ2=32.34,P<0.01)。结论酸化剂能将HAV及HCV抗原抗体免疫复合物解离,添加去垢剂后,解离效果好于单独使用酸化剂,且联合添加好于单独添加。
- 杨蓉龙润乡李华谭振国白惠珠杨婷蒋蕊鞠谢忠平
- 关键词：甲型肝炎病毒丙型肝炎病毒抗原抗体复合物解离抗原检测
- HCV多表位复合抗原基因表达条件的探索
- 2012年
- 目的:筛选出适合HCV多表位复合抗原基因(PCX)表达的菌株,优化表达条件,并进行目的蛋白的免疫特异性的检测。方法:将含HCV多表位复合抗原基因的重组质粒pWR450-PCX转入大肠杆菌DH5α、TOP10F′、BL21菌株中,在不同培养基中,经不同浓度IPTG诱导不同时间,表达融合蛋白(GZ-PCX),并利用患者阳性血清通过Western Blot检测其免疫特异性。结果:重组质粒在DH5α、TOP10F′菌株中均能表达有一定免疫特异性的目的蛋白,但BL21中不表达;目的蛋白在TB培养基中的表达量明显高于LB培养基。结论:在37℃,IPTG浓度为1mM诱导3h时,目的蛋白的表达量达到峰值;所制备的抗原具有一定的免疫特异性和免疫原性。
- 杨蓉杨婷李华龙润乡董承红董丽娟谢忠平
- 关键词：丙型肝炎病毒原核表达免疫原性
- 丙型肝炎病毒分片段抗体检测及优势抗原表位分析被引量：2
- 2010年
- 目的检测丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体,并分析HCV优势抗原表位,为HCV抗原、抗体检测及疫苗研究提供依据。方法收集经ELISA法检测抗HCV阳性血清样品90份,使用总抗体检测试剂及抗HCV分片段试剂进行检测,并用荧光定量PCR对抗体弱阳性及阴性样品进行复核,分析不同片段出现的阳性率,从而分析HCV的优势抗原表位。结果 90份抗HCV阳性的样品经总抗体检测试剂检测,其中阳性78份(86.67%);90份抗HCV阳性的样品中,分片段试剂检测1个片段以上阳性样品59份(65.56%);其中C、NS3、NS4及NS5片段抗体阳性分别为56份(94.92%)、57份(96.61%)、42份(71.19%)及47份(79.66%),NS3及C片段抗体是HCV的优势抗体。结论 HCV-C及NS3表位是HCV的优势抗原表位;HCV分片段抗体与总抗体检测试剂之间阳性检出率存在一定差异。
- 谢忠平杨蓉龙润乡李华白惠株廖云蒋蕊鞠王燕洪超
- 关键词：丙型肝炎病毒
