北京市教委面上项目(KM200810025006)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 相关作者：朱光发吴春婷赵佳晖闫树凤靳丽妍更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京安贞医院更多>>
- 发文基金：北京市教委面上项目教育部留学回国人员科研启动基金北京市留学人员科技活动择优资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 针对核因子-κBP65基因的短发夹干扰RNA逆转录病毒载体构建与鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的:构建针对人核因子κB亚基P65基因mRNA的短发夹干扰RNA(shRNA)逆转录病毒表达载体,并探讨小干扰RNA(siRNA)靶向抑制NF-κBP65基因表达的作用。方法:根据shRNA设计原则,在人NF-κBP65全长序列中选取含19个核苷酸靶序列,设计形成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pSUPER.retro.neo中,构建针对NF-κBP65基因的shRNA表达载体。经293A细胞包装,并感染NIH3T3细胞进行病毒滴度测定后,感染THP-1细胞。分别采用RT-PCR和Westernblot从mRNA和蛋白水平检测干扰效果。结果:限制性酶切和基因测序证实针对人NF-κBP65亚基的shRNA表达逆转录病毒载体成功构建;其感染THP-1细胞后,NF-κBP65的mRNA和蛋白表达明显抑制。结论:成功构建了NF-κBP65shRNA逆转录病毒表达载体,该载体能高效感染THP-1并明显抑制NF-κBP65的表达。
- 吴春婷赵佳晖闫树凤靳丽妍朱光发
- 关键词：短发夹RNA逆转录病毒核因子-ΚB
- 核因子κB信号通路与急性肺损伤关系的研究进展被引量：7
- 2008年
- 核因子κB（nuclear factorkappal3，NFκB）活化不仅促进单核巨噬细胞和中性粒细胞表达多种促炎性细胞因子和黏附分子等．还可能延缓中性粒细胞的凋亡。因而与急性肺损伤的关系密切，抑制NF-κB活化可能为急性肺损伤的治疗提供一条新的途径。
- 吴春婷朱光发
- 关键词：核因子-ΚB炎症反应急性肺损伤单核巨噬细胞中性粒细胞
- 小干扰RNA干扰核因子κB信号通路对内毒素刺激巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨小于扰RNA（siRNA）抑制核因子κB（NF-κB）信号通路对细菌脂多糖（LPS）刺激的巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响.方法 人单核细胞白血病THP-1细胞经氟波酯诱导为巨噬细胞后分2组,分别感染应用分子克隆技术构建的针对NF-κB P65的siRNA逆转录病毒质粒（siRNA病毒组）及乱序（Scramble）对照序列逆转录病毒质粒（Scramble病毒组）.用终浓度50μg/ml的LPS持续刺激2组巨噬细胞,分别应用RT-PCR技术检测LPS刺激不同时间巨噬细胞NF-κB P65 mRNA和TNF-α mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测NF-κB P65蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测巨噬细胞培养上清液TNF-α含量.结果 LPS刺激12和24 h,siRNA病毒组巨噬细胞NF-κB P65 mRNA表达水平（0.97±0.02,0.89±0.01）明显低于Scramble病毒组（1.01±0.03,0.97±0.01,均P＜0.05）;LPS刺激24和72 h,siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达水平（0.95±0.04,0.94±0.01）明显低于Scramble病毒组（1.07±0.06,1.03±0.05,均P＜0.05）.LPS刺激4、8、12和24 h的各时点,siRNA病毒组TNF-α mRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组（0.92±0.02比0.98 ±-0.01,0.86±0.02比1.00±0.01,0.79±0.03比1.01±0.01,0.78±0.03比1.02±0.01,均P＜0.05）.LPS刺激2、4、8、24、36、48、54和72 h的各时点,siRNA病毒组巨噬细胞培养上清液TNF-α含量均明显低于Sramble病毒组（均P＜0.01）.结论 针对NF-κB P65的siRNA可抑制NF-κB信号通路的功能活性,进而抑制内毒素刺激引起的巨噬细胞活化和TNF-α释放,提示RNA干扰技术在急性肺损伤早期过度炎症反应的防治中具有潜在应用价值.
- 吴春婷朱光发赵佳晖张向峰靳丽妍闫树凤
- 关键词：肿瘤坏死因子Α巨噬细胞脂多糖类
