国家科技重大专项(2012ZX09304010)
- 作品数：50 被引量：173H指数：9
- 相关作者：饶春明王军志王兰高凯毕华更多>>
- 相关机构：中国食品药品检定研究院军事医学科学院武汉大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 重组胰高血糖素样肽-1受体激动剂(rExendin-4)原液质量研究被引量：1
- 2015年
- 目的:对重组胰高血糖素样肽-1受体激动剂(r Exendin-4)原液进行质量研究。方法:采用紫外光谱、肽图、飞行时间质谱及N端氨基酸序列分析对r Exendin-4原液进行结构确证;采用凯氏定氮法、BCA法及氨基酸分析法测定r Exendin-4原液的蛋白含量,建立高效液相色谱法测定原液纯度,通过纯度校正计算原液中r Exendin-4含量。结果:确证了r Exendin-4原液的结构,测得原液含量为2.21 mg·m L-1。结论:本研究所用的r Exendin-4原液结构正确、测定含量结果准确可靠,可作为HPLC外标法含量测定用对照品,用于r Exendin-4同质对照品的赋值,也可作为理化对照品用于r Exendin-4工艺中间体的评价和原液放行检验。
- 丁晓丽张金亮张慧梁成罡
- 关键词：结构确证纯度测定
- 实时荧光定量PCR法用于重组猿免疫缺损病毒-人色素上皮衍生因子注射液中复制型SIV的检测
- 2014年
- 目的:建立重组猿免疫缺损病毒-人色素上皮衍生因子(simian immunodeficiency virus-human pigment epithelium-derived factor,SIV-hPEDF)注射液中复制型SIV的实时定量PCR检测方法。方法:在提取重组SIV-hPEDF注射液供试品基因组RNA后,采用实时定量PCR的方法,检测供试品中的复制型SIV。结果:经过3次实验,所得TAT RNA标准品标准曲线均线性良好,线性方程为Y=-3.248lgX+38.12,相关系数为0.994;重组SIV-hPEDF注射液供试品中复制型SIV检测结果均为阴性。结论:所建立的复制型SIV实时荧光定量PCR检测方法重复性好、灵敏、准确,可用于重组SIV-hPEDF注射液中复制型SIV的检测。
- 秦玺李永红杨琦杨靖清于雷杨玉帅徐莉饶春明
- 关键词：基因治疗药物
- 多种PEG化重组人生长激素中蛋白含量测定的通用型方法的建立被引量：4
- 2014年
- 目的：通过以未修饰的原型蛋白为对照品,建立准确测定多种聚乙二醇化重组人生长激素（PEG-rhGH）中蛋白含量的通用型方法。方法：采用rhGH国家对照品和凝胶色谱法测定PEG-rhGH中的蛋白含量。通过详细的专属性、精密度、准确性等方法学考察,建立该方法。色谱条件：采用TSKGel 3000SWxl（300 mm×7.8mm）凝胶色谱柱,以0.05 mol·L-1的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠（pH7.0）为流动相,流速为0.6 mL·min-1,柱温为室温,检测波长为280 nm。通过将测定结果与申报企业原有方法测定结果进行比对,对现有含量测定方法进行评价。结果：由于PEG与蛋白质之间的连接子存在双键,在214 nm下,3种PEG-rhGH的测定结果的准确性较差,平均回收率（n=9）分别为109.3%、109.9%、110.6%;而在280 nm下,rhGH在200-1800μg·mL-1浓度范围内线性关系良好（r=0.9999）,3种PEG-rhGH的平均回收率（n=9）分别为101.2%、101.7%、100.4%。结果比对中发现,新建方法与企业申报方法中采用同质对照品的HPLC法测定结果相当,但与以BSA为对照品的Lowry法测定结果相差较大。结论：本方法专属性、精密度和准确性良好,可作为多种PEG-rhGH含量测定的通用型方法。
- 李晶何辉程速远张慧梁成罡
- 关键词：凝胶色谱
- 治疗性单克隆抗体电荷异质性分析方法比较被引量：4
- 2017年
- 目的:对4种常用的单抗电荷异质性分析方法进行比对研究。方法:以重组抗TNFα全人源单克隆抗体为例,分别利用离子交换色谱(IEC)、毛细管区带电泳(CZE)、毛细管等电聚焦电泳(CIEF)和成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)4种方法对该抗体的电荷异质性进行分析;利用CIEF和iCIEF 2种方法对抗体主峰等电点(pI)进行分析。结果:4种方法能够对重组抗TNFα全人源单克隆抗体的电荷异构体进行有效的分离和定量,其中IEC和CZE 2种方法检测的电荷异构体峰面积百分比(酸性峰、主峰和碱性峰)较为一致,4种方法检测的碱性峰比例较一致,CIEF和iCIEF检测的主峰与酸性峰比例较其他方法偏高。CIEF和iCIEF检测抗体主峰等电点具有一定差异,其中,聚焦时间长短和pI Marker的选择是影响单抗pI值检测的主要因素。结论:通过抗体电荷异质性分析方法的比较研究可见,在单抗电荷异构体比例和主峰pI测定上4种方法具有一定的差异。对单抗的质控应结合产品特性和表征研究,合理选择电荷异质性分析方法。
- 王文波武刚于传飞张峰刘春雨李萌陈伟郭莎高凯王兰
- 关键词：单克隆抗体等电点毛细管电泳离子交换色谱
- 重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体质控方法与质量标准的建立
- 2016年
- 目的建立重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体的质控方法和质量标准。方法利用乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制试验测定重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体的生物学活性;RP-HPLC和SECHPLC测定其纯度;胰酶酶切,HPLC测定其肽图;荧光定量PCR检测E.coli宿主DNA残留量;ELISA法测定宿主蛋白残留量;Edman降解法进行N-末端序列测定;水平等电聚焦电泳法测定等电点;其余检测项目按《中国药典》三部(2010版)规定进行。同时对通常在原液中进行检定的宿主DNA残留、菌体蛋白残留、N-末端序列测定进行初步的方法验证,考察其在成品中进行检测的可行性。结果经初步验证,在成品中进行宿主DNA残留、菌体蛋白残留、N-末端序列测定具有可行性,用建立的方法对重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体成品进行检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2010版)的要求。结论建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。同时只对成品进行质控的方法和质量标准对同类产品的质量控制具有借鉴意义。
- 毕华李永红杨靖清丁有学范文红韩春梅李响史新昌裴德宁饶春明
- 关键词：生物学活性
- 抗CD20人鼠嵌合单抗N糖的毛细管电泳分析被引量：12
- 2015年
- 目的:利用毛细管电泳对原研抗CD20人鼠嵌合单抗和4个生物类似药的N糖谱进行分析。方法:对单抗Fc上的N糖链利用糖苷酶F进行酶切释放,然后用8-氨基芘-1,3,6-三磺酸(APTS)染料进行标记,通过毛细管电泳对N糖链进行分析。结果:7批原研CD20单抗N糖糖型和比例基本一致。4个生物类似药虽然在糖型上与原研单抗一致,但在比例上存在不同程度的差异。SBP-C4中G0F比例显著高于原研和其他生物类似药,而G1F和G2F比例显著较低。SBP-C1,C2和C3中分别含半乳糖修饰和岩藻糖修饰的糖型比例在(原研单抗±3SD)范围内,SBP-C4半乳糖修饰糖型比例明显较低,岩藻糖修饰的糖型比例较原研单抗略高。SBP-C1和C2的CDC活性与原研单抗(RBP-1)基本一致,SBP-C3的CDC活性略高于原研单抗,SBP-C4的CDC活性显著较低。4个生物类似药候选药物的ADCC活性与原研单抗(RBP-1)基本一致。结论:在对单抗的质量控制中,尤其是对于具有Fc功能的单抗,应重视N糖链检测的重要性。
- 王文波王兰王馨于传飞张峰刘春雨陈伟李萌高凯
- 关键词：毛细管电泳
- 体外人外周血单个核细胞热原检测法用于ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的方法学研究被引量：3
- 2017年
- 为考查体外人外周血单个核细胞热原检测法对ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的适用性,选取不同厂家共10批供试品,使用体外人外周血单个核细胞热原检测法,采用加样回收干扰实验考察供试品是否存在干扰。结果表明,大部分供试品在最大有效稀释倍数内,IL-6法干扰实验的回收率在50%~200%,且热原物质含量均低于标准限值,均为合格样品。研究表明,体外人外周血单个核细胞热原检测法可用于ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗热原检测。
- 蔡彤张媛贺庆刘倩杜颖陈晨高华
- 重组人源化兔抗血管内皮生长因子单克隆抗体生物学活性检测方法的建立被引量：6
- 2012年
- 目的建立重组人源化兔抗血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体生物学活性检测方法。方法以人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)作为基质细胞,对23支重组人源化兔抗VEGF单抗参比品、24支供试品原液和10支成品进行生物学活性测定,并计算参比品和供试品的IC50值,计算变异系数;对参比品进行活性赋值后,再计算供试品活性,计算变异系数。结果重组人源化兔抗VEGF单抗参比品、原液和成品的IC50值分别为(49.41±23.60)、(47.42±19.45)和(39.13±16.25)ng/ml,变异系数分别为47.76%、41.02%和41.53%;参比品活性赋值为5.08×104U/ml;供试品原液活性为(0.88±0.19)×106U/ml,变异系数为21.6%,供试品成品活性为(1.49±0.41)×106U/支,变异系数为27.5%。结论成功建立了重组人源化兔抗VEGF单抗生物学活性测定方法,确定了参比品的活性单位,为重组人源化兔抗VEGF单抗生物学活性的检测提供了切实可行的方法。
- 范文红毕华饶春明王军志
- 关键词：血管内皮生长因子人脐静脉血管内皮细胞生物学活性
- 重组人干扰素α2a成品中蛋白含量体积排阻高效液相色谱法的建立被引量：6
- 2013年
- 目的建立测定重组人干扰素α2a成品中干扰素α2a蛋白含量的体积排阻高效液相色谱法(size exclusion-high performance liquid chromatography,SE-HPLC),并进行验证。方法应用SE-HPLC法测定重组人干扰素α2a对照品及供试品蛋白质含量,并对方法的线性、精密度、稳定性、重复性及准确性进行验证。采用建立的SE-HPLC法检测5家企业生产的24批样品中干扰素α2a蛋白含量,同时每批样品按《中国药典》三部(2010版)方法测定生物学活性,并计算比活性(IU/mg)。结果重组人干扰素α2a在0.364 8～11.67μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 9)。用建立的方法连续进样6次,检测对照品溶液的干扰素α2a蛋白含量,RSD为2.4%;同一批样品进样12次,检测供试品溶液的干扰素α2a蛋白含量,RSD为2.8%;同一批样品取6份进样,检测供试品溶液的干扰素α2a蛋白含量,RSD为2.1%;5家企业生产的24批样品,平均加标回收率为103.5%,平均比活性为1.65×108IU/mg。结论建立了测定重组人干扰素α2a蛋白含量的SE-HPLC法,该方法简便,精密度、稳定性、重复性及准确性好,可用于重组人干扰素α2a成品中干扰素α2a蛋白含量的测定及比活性评价。
- 李永红裴德宁陶磊韩春梅饶春明
- 关键词：蛋白质含量高效液相色谱法
- 新型体外热原检测法的研究进展被引量：12
- 2017年
- 为了确保任何非肠道用药,特别是静脉注射用药的安全,必须对产品进行热原检测,这使得热原检测技术成为保证药品安全性的一项关键技术。建立单核细胞热原检测法代替传统热原检测法(家兔热原检查法与细菌内毒素检查法)的研究是热原检测领域发展的整体趋势,2010欧洲药典与美国食品药品监督管理局(FDA)均已采纳此类细胞法。本文将围绕单核细胞法近10年来的研究技术、实际应用和方法特点以及未来发展趋势作一扼要介绍。
- 贺庆高华谭德讲王军志
- 关键词：家兔热原检查法细菌内毒素检查法发热
